海馬可溶性因子體外誘導(dǎo)分化大鼠內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞為膠質(zhì)樣細(xì)胞

李 鵬 陳凡帆 謝 偉 張 昊 鐘文軍 涂蘭波 曹志愷 全 偉

廣州醫(yī)科大學(xué)附屬廣州市第一人民醫(yī)院神經(jīng)外科（廣州 510180）

·論著·

海馬可溶性因子體外誘導(dǎo)分化大鼠內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞為膠質(zhì)樣細(xì)胞

李 鵬 陳凡帆 謝 偉 張 昊 鐘文軍 涂蘭波 曹志愷 全 偉

廣州醫(yī)科大學(xué)附屬廣州市第一人民醫(yī)院神經(jīng)外科（廣州 510180）

目的 探索內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞在大鼠海馬可溶性因子中的體外發(fā)育歸宿及分化鑒定。方法 顯微鏡下分離Wistar大鼠海馬組織放置于低溫DMEM/12培養(yǎng)基，低溫振蕩2小時后高速離心（15000 g），獲取實(shí)驗(yàn)所用海馬組織可溶性因子。取材出生1天的Wistar乳鼠海馬中的內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞（endogenous neural stem cells，ENSCs），將ENSCs分別于含海馬可溶性因子終濃度為0（對照組）、50、100、200、400μl/mL的無血清DMEM/F12培養(yǎng)基中培養(yǎng)6天并每日觀察，使用免疫細(xì)胞化學(xué)、Western Blot印記技術(shù)比較各組ENSCs中Nestin、CD133的表達(dá)量；同時計(jì)量并比較各組ENSCs成球個數(shù)，以探索在模擬顱內(nèi)微環(huán)境情況下，ENSCs發(fā)育、歸宿及分化。進(jìn)一步于最適宜的海馬可溶性因子終濃度中分化神經(jīng)球，對分化的細(xì)胞行神經(jīng)元特異性蛋白入（如：β-tubullin III、MAP2）及膠質(zhì)細(xì)胞特異性蛋白（如：GFAP、S100及p75 NGFR）免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。結(jié)果 大鼠ENSCs在培養(yǎng)基中呈單細(xì)胞漂浮生長，球形；ENSCs于海馬可溶性因子各實(shí)驗(yàn)分組中培養(yǎng)第2天呈細(xì)胞球狀態(tài)，對照組中無細(xì)胞球形成（與100μl/mL組比較，P1=0.00），100μl/mL組與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P1=0.00＜0.05）；至第6天，在100μl/mL組中的細(xì)胞球數(shù)量明顯多于其余各組（P1’=P2’=P3’=P4’=0.00）。在免疫細(xì)胞化學(xué)檢測中，100μl/mL組中細(xì)胞球表達(dá)干細(xì)胞高親和蛋白Nestin、CD133陽性，Western Blot免疫印跡檢測其中Nestin、CD133蛋白高于對照組。……