二氫槲皮素與二氫楊梅素的抗腫瘤活性對比①

王佳奇 宋明銘 陳 凱 王月亮 黃寶亮 丁傳波 鄭毅男 劉文叢

(吉林農業大學 中藥材學院，長春130118)

?

·生物治療·

二氫槲皮素與二氫楊梅素的抗腫瘤活性對比①

王佳奇 宋明銘 陳 凱 王月亮 黃寶亮 丁傳波 鄭毅男 劉文叢

(吉林農業大學 中藥材學院，長春130118)

目的：研究二氫槲皮素和二氫楊梅素對H22荷瘤小鼠抑瘤作用。方法：建立小鼠H22移植性腫瘤模型(除空白外)。造模24 h后分成6組：模型組，陽性對照組(環磷酰胺25 mg/kg)，二氫槲皮素和二氫楊梅素高、低劑量組(30、10 mg/kg)，除陽性對照組腹腔給藥，其余各組均灌胃給藥，測定其對H22荷瘤小鼠抑瘤率、免疫器官指數、生化指標和細胞因子含量的影響，并通過HE染色，觀察瘤組織內壞死程度。結果：二氫槲皮素和二氫楊梅素高、低劑量組(30 mg/kg、10 mg/kg)均對腫瘤具有一定抑制作用，且均可提高H22荷瘤小鼠胸腺指數和脾指數，其中二氫槲皮素高劑量組(30 mg/kg)抑瘤效果最佳，其抑瘤率為58.8%。二氫槲皮素和二氫楊梅素高、低劑量組均可升高H22荷瘤小鼠細胞因子白細胞介素-2(IL-2)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的水平，升高超氧化物歧化酶(SOD)的水平，降低丙二醛(MDA)水平。此外，二氫槲皮素和二氫楊梅素高、低劑量組對H22荷瘤小鼠肝腎功能沒有毒理作用。結論：二氫槲皮素和二氫楊梅素高、低劑量組均對腫瘤具有一定抑制作用，其中二氫槲皮素組的作用較明顯，且呈劑量依賴性，其作用機制可能與增強抗氧化能力、提高機體免疫功能和升高細胞因子水平有關。

二氫槲皮素；二氫楊梅素；抗腫瘤

二氫槲皮素(Dihydroquercetin)的化學式為 C15H12O7，分子量為304.25，又名紫杉葉素、黃杉素、花旗松素。二氫槲皮素是作為高檔食品的原材料，主要來自松科植物如落葉松、花旗松等植物中。二氫槲皮素為白色粉末，不溶于水，易溶于乙醇甲醇等有機溶劑。二氫楊梅素(Dihydromyricetin)的化學式為C15H12O8，分子量為320.25，又名雙氫楊梅樹皮素、福建茶素、白蔽素、二氫楊梅黃酮。主要來源于藤茶中，具有極高的抗氧化和清除氧自由基活性。二氫楊梅素為白色針狀結晶，25 ℃水中溶解度為 4%，熱水中溶解度更大；易溶于乙醇及丙酮，極微溶于醋酸乙酯。

二氫槲皮素和二氫楊梅素是兩種典型的類黃酮化合物，它們有相似的母體結構，其差別僅為B環5′位上是否存在酚羥基。它們的結構如圖1所示：

類黃酮化合物(Flavonoids)是一類植物次級代謝產物，廣泛存在于蔬菜、水果和藥用植物中，是一類天然抗氧化劑，其色澤因多呈黃色而被稱為類黃酮[1]。因其生物學功能，比如抗氧化性[2-5]、抗炎[6-8]、抗菌[9-12]、抗癌[11-14]、護肝[15，16]等在醫藥、食品工業領域得到廣泛的開發和利用。國內研究表明，黃酮類化合物已成為新的抗腫瘤研究熱點，目前已發現多種植物中黃酮類成分有抗腫瘤活性，如雞血藤黃酮類成分可抑制乳腺癌細胞生長[17]，木瓜總黃酮對死亡因子(PD)-1與其配體(PD-L1)的結合有抑制作用，使腫瘤細胞表面PD-L1的表達降低而促進機體對腫瘤的免疫應答，達到抑制腫瘤細胞生長的作用[18]。萬壽菊莖葉中兩種黃酮類化合物4′-甲氧基-澤蘭素3-O-β-D-葡萄糖苷和山奈酚-3,7-O-α-L-雙鼠李糖苷均可抑制人胃癌細胞SGC7901和人肝癌細胞SMMC7721的增殖，且呈現濃度與時間依賴性[19]。二氫槲皮素對體外人宮頸癌細胞(Hela)[20]、人胃癌細胞(MGC)、人盲腸癌細胞(Hce-8693)及人肝癌細胞(HepG-2)[21]均有抑制作用。二氫楊梅素對人肺癌A549細胞、人肝癌細胞(HepG-2)、人乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231有較強的抑制作用[22-24]。一般抗腫瘤的藥物都能夠增強機體免疫功能，清除自由基，分化癌細胞起到抗腫瘤的作用，且毒性較低。本文選用H22肝癌細胞為研究對象，建立荷H22肝癌移植瘤小鼠模型，將對兩種類黃酮化合物二氫槲皮素和二氫楊梅素的抗腫瘤活性進行對比，以免疫器官胸腺及脾指數，細胞因子IL-2和TNF-α的含量為指標研究兩種化合物對機體免疫功能的影響；以SOD含量和MDA水平為指標研究兩種化合物對機體內自由基的影響；以ALT、AST、GRE和BUN為指標，研究了兩種化合物對機體肝腎功能的影響，判定其毒性。

圖1 二氫槲皮素和二氫楊梅素的結果示意圖Fig.1 Structure sketch map of Dihydromyricetin and Dihydroquercetin

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑 二氫槲皮素(Dihydroquer-cetin,as known as taxifolin,TF)、HPLC>97%、蒸餾水實驗室自制；二氫楊梅素(Dihydromyricetin,DMY)，HPLC>98%,西安開來生物工程有限公司；環磷酰胺，上海華聯制藥有限公司；H22肝癌細胞株，中國科學院上海生命科學研究院細胞庫；羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，天津市科密歐化學試劑開發中心；肌酐(CRE)、血尿素氮(BUN)、谷氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.1.2 主要實驗儀器 電子天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]；磁力攪拌器(江蘇金壇市金城國勝實驗儀器廠)；電熱恒溫水浴鍋(金壇市醫療儀器廠)；TGL-20B高速臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)；超低溫冰箱(Haier)；倒置顯微鏡(Olympus)；全自動酶標儀(美國Bio-Tek公司)。

1.1.3 實驗動物 SPF級雄性ICR小鼠，體質量(20±2) g，動物合格證號：SCXK(吉)2011-0004，購自長春億斯實驗動物技術有限公司。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 復蘇H22小鼠荷瘤細胞，取0.2 ml細胞懸液注射到雄性ICR小鼠腹腔內，進行傳代。取腹腔接種7～9 d生長良好的H22腫瘤小鼠脫臼處死用75%乙醇全身消毒后,均在無菌條件下抽取小鼠腹水,置于盛有生理鹽水的帶塞試管中,混勻,1 000 r/min,離心3 min,棄去上清液,用生理鹽水洗滌3次再用生理鹽水調整細胞數為1.0×107個/ml的瘤細胞懸液，于ICR小鼠右前肢皮下接種0.2 ml 。

1.2.2 分組及給藥 小鼠接種 24 h 后將種瘤成功小鼠隨機分為6組(根據體重，將不同體重分開，然后隨機分配)，即：模型組(0.9%生理鹽水)(Model control,MC)，陽性對照組(環磷酰胺，25 mg/kg)(Positive control,PC)，二氫槲皮素高、低劑量組(30 mg/kg，10 mg/kg)，二氫楊梅素高、低劑量組(30 mg/kg，10 mg/kg)。每組10只，于分組第2天，除陽相對照組腹腔注射給藥，其余各組灌胃給予相應的藥物，空白對照組(未接瘤)(Normal control,NC)灌胃0.9%生理鹽水，連續給藥21 d，每日1次，給藥體積均為0.1 ml/10 kg。

1.2.3 抑瘤率測定 末次給藥后24 h，稱體重，摘眼球取血，脫頸椎處死小鼠，用鑷子鑷住小鼠右肩腫瘤生長部位皮膚后，用手術剪子剪開皮膚，暴露腫瘤，用手術剪鈍性剝離腫瘤，用濾紙吸干后用電子天平稱瘤重，計算抑瘤率。抑瘤率( %) =(對照組平均瘤質量-實驗組平均瘤質量)÷對照組平均瘤質量×100 %。

1.2.4 臟器指數 小鼠處死后，取出肝、脾、胸腺后，用0.9%生理鹽水清除殘血，用濾紙吸干后用電子天平稱重，臟器指數計算公式如下：臟器指數=臟器重量/末次給藥后體重。

1.2.5 生化指標檢測 將小鼠血液室溫靜置2 h后，3 500 r/min離心10 min，分離血清放于-20℃備用。將小鼠肝臟約按1∶10加入冷的0.9%生理鹽水，在冰浴上用組織勻漿機勻漿，勻漿液4 000 r/min離心10 min，上清液分裝于-20℃保存備用。

1.2.5.1 腎功能和肝功能指標測定 通過測定血清腎功能指標如尿素氮(BUN)和肌酐(CRE)，肝功能指標ALT和AST，檢查二氫槲皮素和二氫楊梅素對腎和肝臟的潛在毒性。

1.2.5.2 肝組織中SOD活力和MDA含量的測定 MDA含量檢測用硫代巴比妥酸(TBA)法，SOD活力檢測用黃嘌呤氧化酶法，具體操作按試劑盒要求。

1.2.5.3 血清中TNF-α、IL-2含量測定 IL-2、TNF-α測定采用ELISA酶聯免疫檢測法,操作步驟按試劑盒說明進行。加入終止液后,輕輕混勻,在酶標儀上450 nm處讀取吸收值OD，按標準品曲線，計算樣品的IL-2和TNF-α含量。

1.2.6 病理形態學觀察 切取小鼠瘤組織，10%甲醛固定，常規HE染色，觀察病理改變。

2 結果

2.1 二氫槲皮素和二氫楊梅素對H22荷瘤小鼠的抑瘤作用 結果如表1所示，二氫槲皮素與二氫楊梅素高、低劑量組對腫瘤均具有一定抑制作用，雖然二氫槲皮素和二氫楊梅素低劑量組抑瘤率均大于20%，但與模型組相比沒有顯著性，二氫槲皮素高劑量組的抑瘤效果最佳，其抑瘤率為58.80%。二氫槲皮素高、低劑量組與二氫楊梅素高、低劑量組之間沒有顯著性差異。

2.2 二氫槲皮素和二氫楊梅素對H22荷瘤小鼠免疫器官的影響 從表2可以看出，與空白對照組相比，模型組的胸腺指數和脾指數均顯著降低。與模型組相比，二氫槲皮素和二氫楊梅素高、低劑量組的脾指數均有不同程度的升高，且均具有統計學意義(P<0.01)；二氫槲皮素和二氫楊梅素高、低劑量組的胸腺指數均有不同程度的升高，且二氫楊梅素高、低劑量組具有統計學差異(P<0.01)。與陽性對照組相比，二氫槲皮素和二氫楊梅素高、低劑量組的脾指數和胸腺指數均具有統計學意義。結果表明，二氫槲皮素和二氫楊梅素高、低劑量組均對H22荷瘤小鼠免疫器官有一定的保護作用，二氫槲皮素高、低劑量組與二氫楊梅素高、低劑量組無顯著性差異。

2.3 二氫槲皮素和二氫楊梅素對H22荷瘤小鼠細胞因子的影響 如表3所示，與空白組比較，模型組血清中IL-2和TNF-α表達水平都顯著降低；與模型組相比，IL-2和TNF-α的表達水平在二氫槲皮素高、低劑量組和二氫楊梅素高、低劑量組均高于模型組。與陽性對照組相比，二氫槲皮素低劑量組和二氫楊梅素高、低劑量組IL-2表達水平均顯著升高，二氫槲皮素高劑量組TNF-α表達水平具有統計學意義。所有的數據表明，二氫槲皮素和二氫楊梅素可能是通過促進細胞因子分泌發揮抗腫瘤作用。

表1 二氫槲皮素和二氫楊梅素對H22荷瘤小鼠的抑瘤作用

Tab.1 Inhibitory effect of Dihydroquercetin and Dihydromyricetin on growth of transplanted H22tumor cells in mice

GroupsDosage(mg/kg)Tumorweight(g)Inhibitoryrate(%)MC-227±099-PC25068±0242)6972%TF10154±0793284%30094±0552)5880%DMY10178±1102185%30123±0951)4582%

表2 二氫槲皮素和二氫楊梅素對H22荷瘤小鼠免疫器官的影響

Tab.2 Effect of Dihydroquercetin and Dihydromyricetin on immune organ index of transplanted H22mice

GroupsDosage(mg/kg)Spleenindex(mg/g)Thymusindex(mg/g)MC-43±06024±009PC-36±0053)19±0082)TF2520±0041)13±0121)1041±0031)4)21±0051)4)DMY3044±0121)4)24±0071)4)1040±0071)4)20±0064)MC3043±0101)4)22±0081)4)

表3 二氫槲皮素和二氫楊梅素對H22荷瘤小鼠細胞因子影響

Tab.3 Effect of Dihydroquercetin and Dihydromyricetin on serum cytokines(IL-2 and TNF-α) levels of transplanted H22mice

GroupsDosage(mg/kg)TNF?α(pg/ml)IL?2(pg/ml)MC-14032±15117108±1076PC-12259±10761)3927±5952)TF2515797±15874)5360±1714)1016305±19094)6299±6884)5)DMY3017260±14214)5)6562±2874)6)1015576±10444)4957±2493)MC3016865±14324)6305±3624)5)

2.4 二氫槲皮素和二氫楊梅素對H22荷瘤小鼠SOD和MDA含量的影響 如表4所示，模型組小鼠肝臟組織中SOD活性與空白對照組相比顯著降低(P<0.01)；與模型組相比，二氫槲皮素高、低劑量組和二氫楊梅素高、低劑量組均能顯著提高肝臟組織中SOD活性(P<0.01)；二氫槲皮素高劑量組和二氫楊梅素高低劑量組與二氫槲皮素低劑量組相比均具有極顯著性差異(P<0.01)。與陽性對照組相比二氫槲皮素高、低劑量組和二氫楊梅素高、低劑量組均能顯著升高肝臟組織中SOD活性。與空白對照組相比模型組小鼠肝臟組織中MDA水平顯著升高(P<0.01)；與模型組相比，二氫槲皮素高、低劑量組和二氫楊梅素高、低劑量組均能顯著降低肝臟組織中MDA水平(P<0.01)；二氫槲皮素低劑量組和二氫楊梅素高、低劑量組與二氫槲皮素高劑量組相比均有顯著性差異。

表4 二氫槲皮素和二氫楊梅素對H22荷瘤小鼠SOD和MDA含量的影響

Tab.4 Effect of Dihydroquercetin and Dihydromyricetin on SOD and MDA levels of transplanted H22mice

GroupsDosage(mg/kg)SODMDAMC-21695±17571033±111PC-12478±15064)1488±0924)TF2515998±8154)828±0804)1021517±7944)5)1120±0634)5)DMY3024263±18614)5)971±0514)5)1021055±14404)5)1124±0744)5)MC3022220±6924)5)1028±0614)5)

2.5 二氫槲皮素和二氫楊梅素對H22荷瘤小鼠肝腎功能的影響 如表5所示，模型組小鼠血清中BUN，CRE含量與空白對照組相比顯著升高(P<0.01)，AST，ALT含量顯著降低；與模型組相比，二氫槲皮素高、低劑量組和二氫楊梅素高、低劑量組均能降低血清中BUN、CRE含量，升高AST、ALT含量。與陽性對照組相比，二氫槲皮素高、低劑量組和二氫楊梅素低劑量組血清中BUN、CRE、AST和ALT含量均有顯著差異。在二氫槲皮素和二氫楊梅素治療后，腎功能和肝功能指標均可恢復，表明二氫槲皮素和二氫楊梅素對H22荷瘤小鼠的肝腎功能無毒副作用。

2.6 腫瘤組織的HE染色 通過HE染色(圖2)后的腫瘤細胞組織學形態顯示：模型組(圖2A)腫瘤細胞異型性明顯，生長旺盛，并且腫瘤組織中沒有或只有少量壞死；陽性對照組(圖2B)腫瘤組織內微血管密度低，并出現大片固縮性壞死區域；二氫槲皮素低劑量組(圖2C)和二氫楊梅素低劑量組(圖2E)中細胞發生明顯形態學變化，細胞變小，皺縮，染色質凝集，細胞出現片狀壞死等凋亡征象。

表5 二氫槲皮素和二氫楊梅素對H22荷瘤小鼠肝腎功能的影響

Tab.5 Effect of Dihydroquercetin and Dihydromyricetin on liver and renal function indexes of transplanted H22mice

GroupsDosage(mg/kg)CRE(μmol/L)BUN(mmol/L)GPT(U/L)GOT(U/L)MC-1267±083770±0394050±1866701±062PC-1756±1891)1032±0551)3175±0841)5042±026TF251363±0432)931±0302)3060±1764789±130101255±0822)3)816±0362)4)4116±0952)4)6695±1292)4)DMY301264±1062)3)770±0182)4)4503±0892)4)7252±0882)4)101205±0802)4)791±0652)4)4024±0862)4)6685±1552)4)MC301350±0622)795±0332)4)4199±1262)4)7125±1332)4)

圖2 腫瘤組織HE染色(×200)Fig.2 HE staining of tumor tissue (×200)Note: A.Model control;B.Positive control;C.TF(10 mg/kg Dihydroquercetin);D.TF(30 mg/kg Dihydroquercetin);E.DMY(10 mg/kg Dihydromyricetin);F.DMY(30 mg/kg Dihydromyri-cetin).

3 討論

目前已經發現，在中藥和許多植物中含有許多能抑制腫瘤生長的活性成分，分析和改造這些活性成分可為開發新的抗腫瘤藥物提供重要來源[25]。國內研究表明，黃酮類化合物已成為新的抗腫瘤研究熱點。二氫槲皮素和二氫楊梅素是兩種典型的類黃酮化合物，本實驗對二氫槲皮素和二氫楊梅素的抗腫瘤活性進行了對比研究，其中二氫槲皮素高劑量組的作用較明顯，其抑制率高達58.8%。所以可以判斷二氫槲皮素高劑量組是最為合適的抗腫瘤劑量。

目前，化療通常作為一種治療腫瘤的主要措施。然而適當的劑量在整個過程中可能會引起嚴重的不良影響，如骨髓抑制、肝腎功能紊亂、免疫功能降低等[26]。這可能會限制適當的劑量，從而降低治療效果。作為腫瘤的發展，腫瘤衍生的因素也可能對宿主的免疫系統產生不利的影響[27]。因此機體的免疫功能狀態與腫瘤的發生、發展、轉移具有密切的聯系，在治療腫瘤的同時如何激發機體自身的抗腫瘤免疫反應引起了廣泛的研究[28-30]。胸腺和脾臟作為機體重要的免疫器官,其指數常用于免疫效果的評價[31]。本試驗中二氫槲皮素和二氫楊梅素各劑量與環磷酰胺組相比，在一定程度上提高了荷瘤小鼠的脾臟指數和胸腺指數，說明二氫槲皮素和二氫楊梅素均具有延緩荷瘤小鼠免疫器官衰退的作用。

IL-2和TNF-α是機體免疫網絡中具有重要調節作用的細胞因子，在抗腫瘤方面發揮著重要作用。黃酮類化合物的抗腫瘤作用機制可能與促進淋巴細胞增殖及誘導IFN-γ和TNF-α等產生有關[32]。本實驗觀察了二氫槲皮素和二氫楊梅素對血清IL-2和 TNF-α 水平的影響。結果表明，二氫槲皮素高、低劑量組和二氫楊梅素高、低劑量組均可不同程度地提高荷瘤小鼠血清 IL-2 和 TNF-α水平。因此推測二氫槲皮素和二氫楊梅素通過誘導 IL-2、 TNF-α免疫相關因子的產生，調節或增強機體的免疫功能，從而阻遏腫瘤的發展。

自由基與腫瘤的發生、發展有一定的關系[33,34]。在正常生理狀態下，機體代謝過程中產生的自由基可被抗氧化系統所清除。當自由基的產生與消除失衡時，過多的自由基可直接損傷 DNA，也可通過脂質過氧化作用間接損傷 DNA， 最終引起癌變。SOD是體內重要的抗氧化酶，對機體氧化和抗氧化平衡起著至關重要的作用。MDA是脂質過氧化代謝的毒性終產物，其含量直接反映體內脂質過氧化的速率和強度。本實驗結果顯示，二氫槲皮素和二氫楊梅素可以提高機體SOD活性，降低MDA的量，提示二氫槲皮素和二氫楊梅素可提高機體的抗氧化能力，以清除體內過多產生的自由基，進而保護DNA。一個好的化療藥物不僅包括抑制惡性腫瘤的生長，而且對它們正常的器官要具有最小的毒性。

本實驗檢測了腎功能指標如尿素氮(BUN)和肌酐(CR)，肝功能指標包括谷丙轉氨酶(ALT)和谷草轉氨酶(AST)。結果表明，與模型組相比，二氫槲皮素高、低劑量組和二氫楊梅素高、低劑量組均能降低荷瘤小鼠血清中BUN、CR，提高肝臟中ALT、AST的水平。與陽性對照組相比，二氫槲皮素高、低劑量組和二氫楊梅素高、低劑量組血清中BUN，CRE，AST和ALT含量均有統計學意義。在二氫槲皮素和二氫楊梅素治療后，腎功能和肝功能指標均可恢復，表明二氫槲皮素和二氫楊梅素對H22荷瘤小鼠的肝腎功能無毒副作用。

綜上所述，二氫槲皮素和二氫楊梅素均具有一定的抗腫瘤作用，其中二氫槲皮素組的作用較明顯，且呈劑量依賴性，其作用機制可能與抑制腫瘤的生長、提高宿主免疫功能、調節細胞因子水平和抗氧化有關。

[1] Burda.S，Oleszek J.Antioxidant and antiradical activities of flavonids[J].J Agr Food Chem，2001，49(6):2774-2779.

[2] 陳效忠,常 鑫,呂紅梅,等.水飛薊莖葉中具有抗氧化活性的黃酮類化學成分研究[J].黑龍江醫藥科學,2015,38(4):35-36.

[3] 羅宇倩,郭 輝,胡林福,等.竹葉黃酮的抗氧化活性研究[J].食品科技,2011,36(7):201-203.

[4] 李鵬婧,柳旭光,龍海榮,等.超聲波輔助提取菱角殼總黃酮及抗氧化性研究[J].食品科技，2011,36(7):167-171.

[5] 王毅紅,方玉梅,譚 萍,等.車前草黃酮類化合物清除DPPH自由基的作用[J].貴州農業科學,2010,38(8):50-52.

[6] 張蓓蓓,陳 巖,賁培玲,等.滁菊總黃酮的抗炎作用及部分機制研究[J].齊齊哈爾醫學院學報,2015,36(17):2497-2499.

[7] 魏荷琳,曾邦國,肖隆祥,等.三叉苦葉中三個黃酮類化合物的體外抗炎活性研究[J].產業與科技論壇,2015,14(12):46-47.

[8] 侯曉麗,孫銘學,高煥煥,等.抗炎天然產物活性成分研究進展[J].藥學實踐雜志,2015,33(1):20-27.

[9] 王亞男,柳秉潤,鄧旭明,等.蘆丁對金黃色葡萄球菌Sortase A 的抑制作用[J].吉林農業大學學報,2013,35(3):303-307.

[10] 張金杰,呂文文,翁遠超,等.野菊花中黃酮類成分的抗菌活性及指紋圖譜[J].國際藥學研究雜志,2013,40(6):807-812.

[11] Bo Ra K,Young KJ,Myeong JN.A mechanism of apigenin-induced apoptosis is potentially related to anti-angiogenesis and anti-migration in human hepatocellular carcinoma cells [J].Food Chem Toxicol,2011,49(7):1626-1632.

[12] 王秋蘭,高曉民,張 煦.白花蛇舌草總黃酮對BGC-823胃癌細胞增殖和凋亡的影響[J].現代中西醫結合雜志,2015,24(21):2289-2292.

[13] Mou HB,Zheng Y,Zhao P,etal.Celatrol induces apoptosis in non-small-cell lung cancer A549 cells through activation of mitochondria and Fas/FasL-mediated pathways[J].Toxicol Vitro,2011,25(5):1027-1032.

[14] Wu JH,Wang YR,Huang WY,etal.Anti-proliferative and pro-apoptotic effects of tectorgenin on hepatic stellate cells[J].World J Gastroenterol,2010,16(31):3911-3918.

[15] Ilkay Erdogan Orhan,Bilge Sener,Syed Ghulam Mushar-raf.Antioxidant and hepatoprotective activity appraisal of four selected Fumaria species and their total phenol and flavonoid quantities[J].Exp Toxicolog Pathol,2012,64(3):208-209.

[16] 王 燕.玉米須總黃酮對四氯化碳誘使肝損傷的保護作用研究[J].現代中藥研究與實踐,2015,29(3):33-36.

[17] 南 楠,張甘霖,于明薇,等.雞血藤黃酮類提取物SSCE安全性及抗腫瘤作用的研究[J].遼寧中醫雜志,2014,41(3):580-582.

[18] 劉愛華,田慧群,覃曉琳,等.木瓜總黃酮抗腫瘤活性研究[J].中國藥房,2014,25(7):599-601.

[19] 張 宇,曲佐寅,劉立新,等.萬壽菊莖葉中2種黃酮類化合物的體外抗腫瘤活性[J].中國實驗方劑學雜志,2013,19(13):233-237.

[20] 翟延君,程 飛,王添敏,等.花旗松素對人宮頸癌Hela細胞的體外抗腫瘤活性及其機理研究[J].中成藥,2011,33(12):2052-2055.

[21] 翟延君,佟苗苗,程 飛,等.花旗松素和3,3′-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷對腫瘤細胞的增殖的抑制作用[J].中成藥,2012,34(2):217-220.

[22] 李 雪，趙明智，郭瑞霞.花旗松素對人肺癌細胞A549增殖的抑制作用及其機制研究[J].現代藥物與臨床，2015，30(3)：249-252..

[23] Zhang QY,Liu J,Liu B,etal.Dihydromyricetin promotes hepatocellular carcinoma regression via a p53 activationdependent mechanism[J].Sci Rep,2014,doi:10.1038/srep04628.

[24] Zhou Y,Shu F,Liang X,etal.Ampelopsin induces cell growth inhibition and apoptosis in breast cancer cells through ros generation and endoplasmic reticulum stress pathway[J].PLoS One,2014,9(2):e89021.

[25] Lee KH.Novel antitumor agents from higher plangts[J].Med Res Rev,1999,19(6):569-596.

[26] Zhai Q,Li X,Yang Y,etal.Antitumor activity of a polysaccharide fraction from Laminaria japonica on U14 cervical carcinoma-bearing mice[J].Tumour Bio,2014,35(1):117-122.

[27] Frey AB,Monu N.Signaling defects in antitumor T cells[J].Immunol Rev,2008,222:192-205.

[28] Tsai JP,Chen HW,Cheng ML,etal.Analysis of host versus tumor interaction in cancer patients:Opposing role of transforming growth factor-beta 1 and interleukin-6 in the development of in situ tumor immunity [J].Immunobiol,2005,210(9):661-671.

[29] 張 丹,孫玉紅,李 茂,等.美洲大蠊多肽提取物對荷瘤小鼠腫瘤生長及免疫功能的影響[J].中國新藥雜志,2015,24(6):681-686

[30] 楊歆睿,王 剛,吉立賓,等.雪靈芝提取物對H22肝癌荷瘤小鼠免疫功能的影響[J].腫瘤防治研究,2015,42(7):662-665.

[31] Xiong Q,Jiao Y,Zhao X,etal.Purification,characterization and immunostimul-atory activity of polysaccharide from Cipangop-aludina chinensis[J].Carbohydrate Polymers,2013,98(1):217- 223.

[32] Aljanci I,Stankovi M,Tesevi V,etal.Protective effect on human lymphocytes of some flavonoids isolated from two Achillea species[J].Nat Prod Commun,2010,5(5):729-732.

[33] Jakhar R,Paul S,Pard YR,etal.3,5,7,3′,4′-Pentamethoxyflavone,a quercetin derivative protects DNA from oxidative challenges:potential mechanism of action[J].J Photochem Photobiol B,2014,131:96-103.

[34] 李富華,劉 冬,明 建.苦蕎麩皮黃酮抗氧化及抗腫瘤研究[J].食品科學,2014,35(7):58-63.

[收稿2016-03-03 修回2016-03-17]

(編輯 許四平)

Antitumor activity of Dihydroquercetin and Dihydromyricetin

WANG Jia-Qi,SONG Ming-Ming,CHEN Kai,WANG Yue-Liang,HUANG Bao-Liang,DING Chuan-Bo,ZHENG Yi-Nan,LIU Wen-Cong.

College of Traditional Chinese Medicine,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China

Objective:To investigate the antitumor effect of Dihydroquercetin and Dihydromyricetin on H22-bearing mice (in addition to blank).Methods: To establish the H22implanted hepato-cellular carcinoma animal model which was used to analyze the effect of Dihydroquercetin and Dihydromyricetin on the growth of transplanted tumor.Mice were divided into six groups 24 h after modeling:model,positive control (gytoxan,25 mg/kg),low-,high-dose(10,30 mg/kg) Dihydroquercetin and Dihydromyricetin groups.In addition to the positive control group were administered,the other groups were administered orally,the effects of H22on tumor inhibition rate,immune organ index,biochemical index and factor in tumor bearing mice were determined.The degree of necrosis in tumor tissue was observed by Hematoxylin and Eosin (HE).Results: Both low(10 mg/kg) and high(30 mg/kg) doses of Dihydroquercetin and Dihydromyricetin inhibited tumor growth,could increase the thymus index and spleen index of H22tumor-beating mice.The inhibitory effect was most pronounced (58.8%) with high doses of Dihydroquercetin.Both low and high doses of Dihydroquercetin and Dihydromyricetin also incteased interleukin-2 (IL-2) and tumor necrosis factor-α(TNF-α) levels,elevated levels of SOD,reduced MDA level.In addition,no toxicological effects were observed on hepatic function and renal function in low and high doses of Dihydroquercetin and Dihydromyricetin.Conclusion: In summary TF and DMY has antitumor effect on H22transplanted tumor in mice,the inhibitory effect was most pronounced with of TF,and was dose dependent.The possible mechanisms may be due to enhanced antioxidant capacity,improve immune function and elevated cytokine levels.

Dihydroquercetin;Dihydromyricetin;Antitumor

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.11.011

王佳奇(1991年-)，女，碩士，主要從事中藥新藥研究與開發方面的研究，E-mail:loveyueyang3344@sina.cn。

及指導教師：劉文叢(1968年-)，男，博士，教授，主要從事中藥新藥研究與開發方面的研究，E-mail:781083158@qq.com。

R730.52

A

1000-484X(2016)11-1614-07

①本文為吉林省科技發展計劃項目(No.20150311050YY)。