逍遙散含藥血清對(duì)未孕大鼠離體子宮平滑肌的作用研究

海青山++楊榆青++鄭梅

摘要：目的觀察逍遙含藥血清對(duì)正常大鼠離體子宮平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響，并探討其作用機(jī)制。方法運(yùn)用Powerlab生物信號(hào)系統(tǒng)記錄大鼠離體子宮肌標(biāo)本的活動(dòng)，觀察不同濃度組逍遙散含藥血清對(duì)子宮平滑肌收縮時(shí)間、最大張力、子宮活動(dòng)力的影響。結(jié)果：逍遙散含藥血清對(duì)正常大鼠離體子宮肌有明顯的興奮作用，可增強(qiáng)其收縮時(shí)間、最大張力和子宮活動(dòng)力（與空白血清組比較，P<0.01），且興奮作用強(qiáng)度與含藥血清的濃度有相關(guān)性（高濃度和低濃度血清組比較P<0.05）。逍遙散含藥血清的這一作用可被異搏定和阿托品阻斷（與血清組比較P<0.01）。結(jié)論逍遙散含藥血清在體外可增強(qiáng)正常家兔子宮平滑肌的收縮，該作用可能是通過(guò)L型鈣通道和M受體發(fā)揮作用。

關(guān)鍵詞：逍遙散；含藥血清；子宮肌標(biāo)本

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2016）11-0077-03

逍遙散源于宋代《太平惠民和劑局方》，其方藥組成為：柴胡、芍藥、白術(shù)、茯苓、當(dāng)歸、生姜、薄荷、甘草，具有疏肝解郁、養(yǎng)血健脾的作用。臨床上逍遙散廣泛用于治療肝郁血虛脾弱所致的各科疾病，尤其是各種婦科疾病[1-3]。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)逍遙散具有抗抑郁癥及腸易激綜合癥、抗癌、防治肝纖維化、調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌等多方面作用[4-6]。本實(shí)驗(yàn)用血清藥理學(xué)的方法研究逍遙散含藥血清對(duì)離體子宮肌的作用，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行探討。

1制備逍遙散含藥血清

1.1材料

1.1.1藥品逍遙散原方不變，藥物劑量參考《方劑學(xué)》教材第六版：柴胡、當(dāng)歸、芍藥、白術(shù)、茯苓各9 g，甘草4.5 g，燒生姜一塊，薄荷少許。所用生藥經(jīng)鑒定，均為正品。

1.1.2動(dòng)物SPF級(jí)未孕SD大鼠（昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（滇）2011-2014），體重180±30 g，本院動(dòng)物房飼養(yǎng)，普通飼料，自主飲食。

1.1.3儀器離心機(jī)、恒溫水浴鍋（DZKW-C；北京光明醫(yī)療儀器廠）。

1.2方法

1.2.1逍遙散水煎劑制備和濃縮上述八味藥用六倍于生藥量的水浸泡30 min，分別按20、15、15 min煎煮3次，用六層紗布過(guò)濾，并濃縮成每1 mL含5.2 g 、2.6 g生藥量的藥液，置于4℃冰箱中貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2分組給藥SPF級(jí)未孕SD大鼠60只，隨機(jī)分為空白血清組，0.9%生理鹽水；含藥血清高濃度組，5.2 g/mL逍遙散水煎劑；含藥血清低濃度組，2.6 g/mL逍遙散水煎劑。經(jīng)灌胃途徑給藥，1.5 mL/100 g/次，每天2次，連續(xù)3 d。

1.3.3逍遙散含藥血清制備于第3日末次給藥后腹腔注射25%烏拉坦（4 mL/kg），并于給藥后60 min腹子宮采血，靜置30 min后，以3000轉(zhuǎn)∕分速度離心10 min，取上清液，分裝，-20℃保存待用，用前56℃30 min滅活。

2逍遙散含藥血清對(duì)大鼠離體子宮肌的作用

2.1材料

2.1.1試劑垂體后葉素（上海第一生化藥業(yè)有限公司，批號(hào)：060403）、己烯雌酚（合肥久聯(lián)制藥有限公司，批號(hào)：060301）、消炎痛（山西太原藥業(yè)有限公司，批號(hào)：071202）、酚妥拉明（諾華制藥，批號(hào)：060156）、阿托品（天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司，批號(hào)：060413）、苯海拉明（天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司，批號(hào)：0702051）、異搏定（江蘇四環(huán)生物股份有限公司，批號(hào)：0707131）、洛氏液（NaCl 9g，KCl 0.42g，CaCl2 0.24g，NaHCO3 0.2g，Glucose.l 0g，蒸餾水1000mL）。

2.1.2儀器Powerlab/8s生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)（澳大利亞埃德公司）、張力換能器（澳大利亞埃德公司，型號(hào)：ML784）、循環(huán)灌流恒溫平滑肌槽、離心機(jī)、冰箱、電子天平、哺乳動(dòng)物手術(shù)器械等。

2.1.3動(dòng)物SPF級(jí)未孕SD大鼠8只（昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（滇）2011-2014），體重180±30g，本院動(dòng)物房飼養(yǎng)，普通飼料，自主飲食。

2.2方法

2.2.1大鼠子宮平滑肌標(biāo)本的制備將未孕雌性大鼠于實(shí)驗(yàn)前兩天，每天皮下注射己烯雌酚0.1mg/kg，促使動(dòng)物處于動(dòng)情期或動(dòng)情前期，以提高動(dòng)物對(duì)藥物的敏感性。第3天，末次促情1h后，用頸椎脫臼法迅速處死大鼠，剖腹取出子宮，立即將其浸入到盛有洛氏液的平皿中，漂洗，分離周?chē)闹窘M織，制成長(zhǎng)約1.0cm的子宮平滑肌條，放入洛氏液中待用。

2.2.2離體實(shí)驗(yàn)將子宮肌標(biāo)本懸掛于含（37.5士0.5℃，pH=7.4）洛氏營(yíng)養(yǎng)液的恒溫平滑肌槽中，一端固定于浴槽底部，另一端與張力換能器連接。向恒溫平滑肌槽中通入含有95%O2和5%CO2的混合氣體，給予標(biāo)本1 g的基礎(chǔ)張力，平衡30 min（每10min換液一次），先觀察標(biāo)本的收縮情況，并用微機(jī)程控的Powerlab/8 s生物信號(hào)系統(tǒng)記錄收縮曲線，再依次加入所取的空白血清和含藥血清，觀察其對(duì)標(biāo)本的影響，記錄收縮曲線。每進(jìn)行一次試驗(yàn)后，用洛氏液沖洗標(biāo)本3次，使標(biāo)本張力恢復(fù)至基線再進(jìn)行下一次試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)中所用藥物濃度均以最終浴槽濃度計(jì)算。

3結(jié)果

3.1不同濃度逍遙散含藥血清對(duì)未孕大鼠子宮平滑肌收縮的影響在離體子宮肌自發(fā)收縮的基礎(chǔ)上，分別加入空白血清組、高濃度逍遙散含藥血清組（含生藥5.2 g/mL）、低濃度逍遙散含藥血清組（含生藥2.6 g/mL）及垂體后葉素，觀察大鼠離體子宮肌收縮時(shí)間（s/10 min）、張力（g）、活動(dòng)力（g·s/10 min 活動(dòng)力=張力×收縮時(shí)間）的變化（結(jié)果見(jiàn)表1）。

3.2阻斷劑加逍遙散含藥血清對(duì)大鼠離體子宮平滑肌活動(dòng)的作用以高濃度逍遙散含藥血清組作用為對(duì)照，分別加入阿托品、苯海拉明、酚妥拉明和異搏定，每組加入阻斷劑后5min待收縮活動(dòng)平穩(wěn)后，再加入0.5ml的高濃度逍遙散含藥血清。觀察上述阻斷劑對(duì)未孕大鼠離體子宮平滑肌收縮時(shí)間（s/10 min）、收縮張力（g）、活動(dòng)力（g·s/10min 活動(dòng)力=收縮幅度×收縮時(shí)間）的作用（結(jié)果見(jiàn)表2）。

結(jié)果表明：異搏定（L型Ca2+通道拮抗劑）、阿托品（M型受體阻斷劑）均可部分阻斷逍遙散含藥血清的興奮作用，減少子宮平滑肌的收縮時(shí)間、張力和子宮活動(dòng)力，與含藥血清組相比，差異有顯著性意義（P<0.05或P<0.01）。苯海拉明（Hl型受體阻斷劑）、酚妥拉明（α受體阻斷劑）均未能阻斷逍遙散含藥血清的興奮作用。

4討論

逍遙散為疏肝解郁的代表方，肝藏血，主舒泄，喜條達(dá)，婦科疾病多從肝論治。逍遙散在臨床廣泛應(yīng)用于月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、功血等婦科疾病的治療。據(jù)此推斷該方對(duì)子宮平滑肌的運(yùn)動(dòng)具有調(diào)節(jié)作用，通過(guò)中藥復(fù)方含藥血清對(duì)離體器官的作用，能更好地反映藥物在體內(nèi)環(huán)境中產(chǎn)生藥理效應(yīng)的真實(shí)過(guò)程[7]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，逍遙散含藥血清的確可以興奮未孕大鼠子宮肌的運(yùn)動(dòng)，在子宮最大收縮張力和收縮時(shí)間方面都表現(xiàn)明顯，在解除子宮收縮無(wú)力、子宮收縮遲緩等方面有作用。排出血清中原有的物質(zhì)干擾，這種作用仍然存在，說(shuō)明該作用是逍遙散本身或者代謝產(chǎn)物或者刺激機(jī)體產(chǎn)生的內(nèi)源物質(zhì)導(dǎo)致的[8]。而且，具有濃度依賴(lài)性，在給藥濃度增高時(shí)，作用也加強(qiáng)。

在高濃度逍遙散含藥血清導(dǎo)致離體子宮平滑肌收縮加強(qiáng)的基礎(chǔ)上，分別以阿托品、苯海拉明、酚妥拉明和異搏定等阻斷劑干擾。子宮肌屬于內(nèi)臟平滑肌，其收縮呈現(xiàn)一定的節(jié)律性，子宮收縮時(shí)需要細(xì)胞外Ca2+通過(guò)鈣通道內(nèi)流，與肌鈣蛋白結(jié)合，促使粗細(xì)肌絲滑行，引起收縮。應(yīng)用異搏定（L型Ca2+通道拮抗劑）可部分阻斷逍遙散含藥血清的興奮作用，減少子宮平滑肌的張力證明逍遙散可以通過(guò)興奮L型Ca2+通道起作用。子宮肌存在乙酰膽堿受體，乙酰膽堿通過(guò)子宮肌受體發(fā)揮興奮作用。阿托品是M型受體阻斷劑，對(duì)逍遙散含藥血清興奮離體子宮肌有抑制作用，說(shuō)明逍遙散含藥血清中含有類(lèi)似乙酰膽堿的刺激物，逍遙散可能刺激機(jī)體產(chǎn)生乙酰膽堿等內(nèi)源性物質(zhì)增多而興奮子宮。

苯海拉明和酚妥拉明未能阻斷逍遙散含藥血清的興奮作用說(shuō)明組胺和去甲腎上腺素可能沒(méi)有參與逍遙散對(duì)子宮的調(diào)節(jié)作用。

5結(jié)論

上述研究結(jié)果表明，子宮是逍遙散作用的靶器官之一。逍遙散含藥血清對(duì)未孕大鼠離體子宮平滑肌具有興奮作用，可增加子宮平滑肌收縮的最大張力、收縮時(shí)間及子宮活動(dòng)力。逍遙散含藥血清對(duì)離體子宮平滑肌的興奮作用存在量效關(guān)系。逍遙散含藥血清對(duì)未孕大鼠離題子宮平滑肌的興奮作用，可能是通過(guò)興奮L型Ca2+通道增加Ca2+內(nèi)流，進(jìn)而增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度發(fā)揮作用。也可能與刺激機(jī)體產(chǎn)生乙酰膽堿，興奮M型受體發(fā)揮作用，與H受體和α受體無(wú)關(guān)。逍遙散促進(jìn)子宮活動(dòng)，可能是其治療產(chǎn)后子宮收縮不良性等疾病的基礎(chǔ)，具體作用途徑和機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)：

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