加味滌痰湯灌胃對腦缺血再灌注損傷大鼠神經功能的影響

劉曉婷，陳維達，陳澤濤，王海濤

(1山東中醫藥大學，濟南250014；2濰坊市中醫院;3山東省中醫院)

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加味滌痰湯灌胃對腦缺血再灌注損傷大鼠神經功能的影響

劉曉婷1,2，陳維達3，陳澤濤3，王海濤2

(1山東中醫藥大學，濟南250014；2濰坊市中醫院;3山東省中醫院)

目的 探討加味滌痰湯灌胃對腦缺血再灌注損傷大鼠神經功能的影響。方法 選取SPF級雄性SD大鼠90只，分為假手術組、模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組5組，每組大鼠16只。采用可逆性大鼠腦中動脈閉塞線栓法進行右側大腦中動脈栓塞(MCAO)，于造模成功后24 h假手術組與模型組灌胃生理鹽水，中藥高劑量組、中藥低劑量組分別灌胃加味滌痰湯1.92、0.96 g/(kg·d)，西藥組灌胃吡拉西坦片0.5 g/(kg·d)，灌胃容積為10 mL/kg；1次/d，連續給藥7 d。各組于治療開始前及治療結束24 h內進行神經行為學測試并記錄，于給藥周期結束24 h內，取腦組織切片、染色、拍照，計算各組梗死體積比及缺血側大腦水腫度。結果 治療后神經障礙評分及平衡木行走實驗得分中藥高劑量組、西藥組與模型組比較明顯減低(P均<0.05)，中藥低劑量組最為顯著(P<0.01)；中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組較模型組自發活動次數明顯增多(P均<0.05)，中藥高劑量組最為顯著(P<0.01)，中藥低劑量組及西藥組亦明顯增多(P均<0.05)，中藥高、低劑量組與西藥組比較，P均<0.05；中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組與模型組腦梗死體積相比均明顯降低(P均<0.01)；中藥低劑量組、西藥組缺血側大腦水腫度明顯降低(P均<0.01)。結論 加味滌痰湯灌胃對缺血再灌注損傷大鼠神經功能有保護作用，能提高受累肢體肌力、恢復精巧運動，減少腦梗死體積。

腦缺血再灌注損傷；加味滌痰湯；中藥；神經保護；大鼠

缺血性腦卒中是腦血管病中最常見的一種類型，約占全部腦血管病的80%。腦缺血一定時間恢復血液供應后，其功能不但未能恢復，卻出現了更加嚴重的腦功能障礙，稱為腦缺血再灌注(CIR)損傷[1]。缺血再灌注損傷是缺血性腦卒中導致神經功能障礙的主要病理基礎，缺血性腦卒中屬于中醫“中風”范疇，出自《濟生方》的滌痰湯有滌痰開竅之功，是治療急性期缺血性腦卒中的有效方劑。2015年1月～2016年1月，我們探討了加味滌痰湯灌胃對CIR損傷大鼠神經功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 雄性SD大鼠90只，SPF級，體質量140～160 g，北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號SCXK(京)2012-0001，質量合格證號NO.011400700055671。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)購于國藥集團化學試劑有限公司；蘇木色精、曙紅Y、甲苯胺藍等試劑均為分析純，購于國藥集團化學試劑有限公司。實驗儀器系統冠狀切腦，型號68709，深圳瑞沃德公司；LEICA RM2245切片機，LEICA HI1220烤片機，LEICA XL全自動染色機，OLYMPUS BX51 生物顯微鏡；FED53恒溫干燥箱購自德國Binder公司；LEICA ASP200s全自動全封閉脫水機，LEICAEG1150H包埋機；電熱恒溫鼓風干燥箱購自上海培因公司；自發活動視頻分析系統和大小鼠抓力測定儀，購自北京智鼠多寶生物科技有限責任公司。中藥加味滌痰湯(膽南星12 g、石菖蒲、橘紅、梔子、枳實各10 g，半夏9 g，水蛭、生大黃各6 g)，采用北京康仁堂藥業全成分中藥配方顆粒，每劑9.6 g。西藥吡拉西坦片(0.4 g/片)購自山東仁和堂藥業有限公司。

1.2 CIR損傷模型建立與分組 以10%水合氯醛按3.5 mL/kg麻醉大鼠，按照Clark 等[2]的方法，采用可逆性大鼠腦中動脈閉塞線栓法進行右側大腦中動脈栓塞(MCAO)手術，縫合皮膚切口并消毒。假手術組除不插入線栓外過程相同。缺血90 min后拔出栓線進行再灌注[3]，再灌注90 min時進行神經功能障礙評分，參照Longa等[4]制定的標準進行評分，神經功能評分為1～3分的MCAO大鼠和0分的假手術大鼠為本實驗選用。實驗共分為5組：假手術組、模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組，假手術組選用0分的假手術大鼠16只，其余4組隨機選取造模成功大鼠各16只；假手術組與模型組灌胃生理鹽水，中藥高、低劑量組分別灌胃加味滌痰湯1.92、0.96 g/(kg·d)，西藥組灌胃吡拉西坦片0.5 g/(kg·d)，灌胃容積為10 mL/kg；于造模成功后24 h給藥，1次/d，連續給藥7 d，固體飼料和水自由攝取。

1.3 神經行為學測試 各組于治療開始前及治療結束24 h內進行神經行為學測試并記錄。①神經功能障礙評分：參照Longa等[4]制定的標準進行評分。②平衡木行走實驗[5]：測定大鼠運動整合及協調能力，術前1周每天早晚各訓練1次，每次10 min，使其能順利在平橫木上行走。平衡木長80 cm、寬2.5 cm，平放在距離地面高10 cm處，參考Feeney的計分標準。③自發活動次數和抓力：將每只大鼠單獨置于暗室之中，采用自發活動視頻分析系統記錄10 min中內的自發活動次數，并用抓力測定儀對大鼠逐一進行抓力測試。術前1周每天早晚各訓練1次，使大鼠適應暗室及對抓力板抓握。④腦梗死體積比和缺血側大腦水腫度：各組給藥周期結束24 h內進行神經行為學測試后將大鼠斷頭取腦，取用的腦組織置于冰浴中迅速切片，切片厚度3 mm，37 ℃避光TTC染色約30 min，取出腦片，拍照，用Image-Pro Plus 6.0軟件處理圖片，計算各組梗死體積比，同時計算缺血側大腦水腫度[6]。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，多個樣本均數間的兩兩比較采用LSD法。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組治療前后神經功能障礙評分、平衡木行走實驗得分比較 見表1。

表1 各組治療前后神經功能障礙評分、平衡木行走實驗得分比較(分，

2.2 各組治療前后自發活動次數和抓力測量結果比較 見表2。

2.3 各組治療后腦梗死體積比和缺血側大腦水腫度比較 見表3。

表2 各組治療前后自發活動次數和抓力比較

表3 各組治療后腦梗死體積比和缺血側大腦水腫度比較

3 討論

中醫認為中風的發生與“風、火、痰、瘀、虛”密切相關。其中痰是人體水液代謝失常而形成的病理產物，是中風發生過程中重要的致病因素，并能影響疾病的發展、轉歸。現代研究表明，CIR損傷是一個多環節、多級聯的病理生理過程，與自由基的過度形成、神經細胞內鈣離子超載、興奮性氨基酸的細胞毒作用、炎性反應和細胞凋亡等多種機制相關[1]。目前研究應用的神經保護劑多是針對CIR損傷中的某一個環節起效[7]，但由于CIR損傷機制的復雜性，可能使用任何阻斷單一環節的藥物療效不佳。中藥復方具有化學成分多樣性、生物活性廣泛性的特性，在阻斷CIR損傷發生發展中可從多靶點、多層次、多環節發揮作用。

滌痰湯主治“中風痰迷心竅，舌強不能言”，臨床對急性缺血性腦卒中的治療有確切療效[8]。本研究采用加味滌痰湯，方中半夏燥濕化痰，膽南星祛風痰而止痙，共為君藥；橘紅化痰理氣，枳實主降氣、行痰濕，石菖蒲祛痰開竅；梔子清熱瀉火，大黃瀉熱通便，水蛭活血逐瘀通絡；諸藥合用具有豁痰開竅、醒神通絡的功效。本研究發現，中藥高、低劑量組、西藥組大鼠在用藥周期結束后神經功能障礙評分、平衡木行走實驗得分、10 min內自發活動次數及抓力均較模型組有所改善，表明滌痰湯無論高、低劑量均能有效改善MCAO大鼠神經功能，提高受累肢體肌力，恢復受累肢體精巧運動功能。從藥物應用劑量上看，中藥高、低劑量組均有明顯神經保護作用，兩組比較差異無統計學意義，無明顯的量效關系。中藥高、低劑量組及西藥組均能有效減少腦梗死體積，中藥低劑量組、西藥組缺血側大腦水腫度明顯降低，但中藥高劑量組腦水腫度未見明顯降低，這與神經行為學指標的改善并不完全一致。實驗中往往以腦梗死體積的變化作為評估干預藥物藥效的首選標準，但亦常會有腦缺血模型動物的行為變化與腦組織病理改變間難以找到相關的聯系[9]，可能與壞死周圍水腫區神經細胞功能未完全喪失有關。

本研究證實，加味滌痰湯灌胃對CIR損傷大鼠神經功能有保護作用，能提高受累肢體肌力、恢復精巧運動、減少腦梗死體積。

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陳澤濤(E-mail:zetaochen2007@126.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.41.010

R651.1

A

1002-266X(2016)41-0036-03

2016-05-14)