美洲大蠊提取物CⅡ-3對家兔血常規(guī)及抗氧化活性的影響

邵維莉 吳道勛 彭 芳,2 劉光明,2 陳俊雅,2 王 濤

1.大理大學藥學與化學學院，云南 大理 67100；2.云南省昆蟲生物醫(yī)藥研發(fā)重點實驗室，云南 大理 671000；3.大理大學基礎醫(yī)學院，云南 大理 671000

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美洲大蠊提取物CⅡ-3對家兔血常規(guī)及抗氧化活性的影響

邵維莉1吳道勛1彭 芳1,2劉光明1,2陳俊雅1,2王 濤3*

1.大理大學藥學與化學學院，云南 大理 67100；2.云南省昆蟲生物醫(yī)藥研發(fā)重點實驗室，云南 大理 671000；3.大理大學基礎醫(yī)學院，云南 大理 671000

目的：研究美洲大蠊提取物CⅡ-3對正常家兔血常規(guī)和血清抗氧化能力的影響。方法：給予正常家兔高(16mg/kg)、中(8mg/kg)、低(4mg/kg)耳緣靜脈注射CⅡ-3，對各劑量組血常規(guī)和血清中抗氧化因子活性進行測定。結果：單次給藥后，高劑量CⅡ-3能夠明顯降低正常家兔血液中白細胞、紅細胞的數量(P<0.05)；多次給藥后，與NS組比較，CⅡ-3對CAT、MPO的含量及T-AOC活性均有一定的提高作用(P<0.05)。結論：美洲大蠊提取物CⅡ-3具有一定的抗炎和抗氧化活性。

美洲大蠊；血常規(guī)；抗炎；抗氧化

美洲大蠊(PeriplanetaamericanaL.)為蜚蠊目蜚蠊科昆蟲，俗稱蟑螂。據《本草綱目》記載，蟑螂以干燥或新鮮全體入藥，有活血化瘀、解毒消疳、利水消腫等功效[1]。自20世紀70年代以來，國內外學者從其體內分離純化出多種活性物質，如與組織再生有關的p10蛋白[2]、促進血細胞吸收感染細菌的防御型分子脂多糖結合蛋白[3]以及具有利尿作用的多肽[4]等。并開發(fā)了美洲大蠊系列昆蟲藥品，如康復新液、心脈隆注射液和肝龍膠囊等[5]。實驗通過測定美洲大蠊醇提取物CⅡ-3對家兔外周血細胞因子和血清液中抗氧化因子的含量，進一步闡明美洲大蠊的抗炎及抗氧化作用，為其進一步研究提供參考。

1 儀器與材料

1.1 美洲大蠊提取物的制備 受試藥物CⅡ-3(批號：20140823，由大理大學藥學院劉光明教授提供)為棕褐色凍干粉末，其制備過程如下：用溶劑提取粉碎后的美洲大蠊蟲體干品，濃縮回收溶劑，得到的濃縮液經大孔吸附樹脂材料柱層析，水洗，然后用醇溶劑洗脫，所得洗脫液經減壓濃縮至無醇味，干燥后得到產品CⅡ-3[6]。實驗前受試藥物用生理鹽水分別配制成不同濃度的藥液，然后用0.22 μm的微孔濾膜進行過濾滅菌。

1.2 動物與試劑 家兔42只，體重1.5～2.0kg，由大理大學實驗動物中心提供，許可證號SYXK(滇)2011-0004，普通級別。過氧化氫酶(CAT，批號：20150707)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px，批號：20150421)、髓過氧化物酶(MPO，批號：20150415)、總抗氧化能力(T-AOC，批號：20150706)等試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；XFA6000動物血細胞分析儀用稀釋液(批號：PD1501)、HB探針清洗液(批號：PB9407)；ANI-3D溶血劑(批號：PF2402)；HB含酶清洗液(批號：PB7501)等購自南京普朗醫(yī)療設備有限公司。

1.3 儀器 TL-16R高速冷凍離心機(上海市離心機機械研究所)；EMP-168G半自動生化分析儀(深圳市恩普電子技術有限公司)；XFA6000全自動動物血細胞分析儀(南京普朗醫(yī)療設備有限公司)。

2 方法

2.1 單次給藥對家兔血細胞含量的影響 體重1.5～2.0kg健康雄性家兔18只，隨機分為3組，每組6只，即CⅡ-3高(16mg/kg)、中(8mg/kg)、低(4mg/kg)劑量組。各組家兔按給藥量2mL/kg通過耳緣靜脈給藥1次，分別于給藥前，給藥后5、15、30、60、120、240min耳緣靜脈采血20μL，全自動血細胞分析儀上檢測不同時間點家兔血液中白細胞、紅細胞、血小板等含量的變化。

2.2 連續(xù)給藥對家兔血清中抗氧化因子含量的影響 體重1.5～2.0kg健康雄性家兔24只，按體重隨機分為4組，每組6只，分別為3個給藥組(與2.1中相同)和1個生理鹽水對照組(NS組)。給藥組家兔每日耳緣靜脈給藥，給藥量均為2mL/kg，NS組給予生理鹽水，連續(xù)給藥5d。末次給藥后24 h，心臟采血5 mL，并分離血清，參照試劑盒說明書分別測定血清中過氧化氫酶(Catalase；CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(Myeloperoxidase；GSH-PX)、髓過氧化物酶(Myeloperodidase；MPO)的含量以及血清總抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity ；T-AOC)的活性。

3 結果

3.1 單次給藥美洲大蠊提取物CⅡ-3對家兔血細胞含量的影響

3.1.1 單次給藥后CⅡ-3對家兔白細胞含量的影響 與給藥前比較，給藥后30、60min時，高劑量組家兔血液中白細胞含量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結果見表1。

3.1.2 單次給藥CⅡ-3對家兔紅細胞含量的影響 與給藥前比較，給藥后240min時高劑量CⅡ-3組紅細胞數量的減少較明顯，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結果見表 2。

3.1.3 單次給藥CⅡ-3對家兔血小板含量的影響 與給藥前比較，CⅡ-3各劑量組對家兔血小板的影響不明顯，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結果見表 3。

注：與給藥前比較，*P<0.05。

注：與給藥前比較，*P<0.05。

組別給藥前/×109/L給藥后/×109/L5min15min30min60min120min240min低劑量組327.8±146.4344.8±127.4354.8±109.9214.5±59.6284.7±95.9269.2±94.9287.2±94.9中劑量組312.3±89.5335.8±68.3242.2±160.9262.3±148.0345.3±87.9290.2±68.6305.5±68.1高劑量組356.2±97.1318.8±93.4331.3±90.2 265.8±96.1278.8±80.7362.3±105.0244.7±144.0

3.2 多次給藥CⅡ-3對正常家兔血清中抗氧化因子含量的影響 與NS組比較，CⅡ-3能夠明顯增強正常家兔血清中MPO的活性,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。低劑量、中劑量CⅡ-3能使血清中CAT的含量顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，中劑量CⅡ-3還可以顯著提高血清中T-AOC的活性，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；另外，高劑量CⅡ-3也能提高血清中GSH-PX的含量，但差異不具有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結果見表4。

注：與NS組比較，*P<0.05。

4 討論

血常規(guī)檢查是血液細胞部分的檢查，也是臨床一項基本的常規(guī)檢查[7-8]。根據其數量和分布的變化，可以作為疾病診斷的輔助手段。紅細胞各項參數出現異常時，可對一些疾病的診斷提供依據。白細胞可以保護機體避免各種病毒性和細菌性感染，以及其他異物的入侵[9]。有證據表明[10]，血小板對急性炎癥和損傷，包括類風濕性關節(jié)炎、腦型瘧和急性肺損傷等起主要作用。試驗中，高劑量CⅡ-3能夠降低正常家兔血液中白細胞、紅細胞的數量，提示其具有一定的抗炎作用。

過氧化氫酶(CAT)能夠刺激H2O2生成水并且可以清除機體氫過氧化物，且過氧化氫酶利用H2O2可以氧化一些毒素，包括酚類、甲酸、甲醛和酒精等[11]。過氧化氫作為機體代謝過程中產生的廢物，能夠對機體造成損害。為了避免這種損害，過氧化氫必須被快速地轉化為其他無害或毒性較小的物質，而過氧化氫酶就是常常被細胞用來催化過氧化氫分解的工具。實驗結果顯示，與NS組相比，低、中劑量CⅡ-3能夠明顯增強家兔血清中過氧化物酶的活力(P<0.05)。谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)是機體內廣泛存在的抗氧化酶，它在信號平衡、免疫調節(jié)[12]，以及清除氫過氧化物，避免氧化損傷中發(fā)揮重要作用[13-14]。實驗中，中、高劑量CⅡ-3可以增加家兔血清中谷胱甘肽過氧化物酶的含量。髓過氧化物酶(MPO)存在于吞噬細胞中，是抗微生物系統(tǒng)和炎癥調節(jié)的基本成分[15]，其活性的變化可對早期組織損傷做出較敏感的反應[16]。作為中性粒細胞和單核細胞的標志酶[17]，其水平與細胞數量成正比，與血常規(guī)中的中性粒細胞和單核細胞數的增加一致；且根據實驗發(fā)現，各劑量CⅡ-3均能明顯提高家兔血清中MPO的活性(P<0.05)。而從整體抗氧化水平而言，總抗氧化能力(T-AOC)對防御體的抗氧化作用主要通過消除自由基和活性氧，分解過氧化物，去除催化作用的金屬離子等來實現。結果發(fā)現，中劑量CⅡ-3能夠明顯增加家兔血清中T-AOC水平(P<0.05)。根據所測定家兔血清中抗氧化因子的活性和水平，可以認為CⅡ-3具有一定的體內抗氧化作用。

實驗通過對正常家兔外周血細胞含量及抗氧化因子進行測定，結果顯示，給予美洲大蠊提取物CⅡ-3后，正常家兔血液中白細胞、紅細胞數量減少，對抗氧化因子MPO、CAT、GSH-PX、T-AOC具有一定的提高作用，從而表明美洲大蠊提取物CⅡ-3具有一定的抗炎、抗氧化作用，這一結果將為美洲大蠊的下一步研究提供理論依據。

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(編輯：梁志慶)

The Effect of CⅡ-3 Extracted fromPeriplanetaamericanaL. on Blood Cell Parameters and Antioxidant Capacity of Rabbits

SHAO Weili1WU Daoxun1PENG Fang1,2LIU Guangming1,2CHEN Junya1,2WANG Tao3*

1.College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali 671000，China;2.Yunnan Provincial Key Laboratory of Entomological Biopharmaceutical R&D, Dali 671000，China;3.College of Basic Medical Sciences, Dali University, Dali 671000, China

Objective To study the effects of CⅡ-3 extracted fromPeriplanetaamericanL. on the blood cell parameters and serum antioxidant capacity of normal rabbits. Methods The level of blood cell parameters and serum antioxidant factors of all dose groups were determined after the ear margin vein of normal rdbbits was injected with high(16mg/kg),Medium(8mg/kg) and low-dose(4mg/kg) of CⅡ-3.Results After the treatment, high dose CⅡ-3 could significantly reduce the number of white blood cells and red blood cells in normal rabbits (P<0.05); compared with the NS group, the activity of CAT, MPO, T-AOC in CⅡ-3 groups were higher (P<0.05). Conclusion CⅡ-3 extracted fromPeriplanetaamericanaL. has a certain anti-inflammation and anti-oxidation effects.

PeriplanetaamericanaL.; Blood Cell Parameters; Anti-Infammation; Anti-Oxidation

2010-9-22

國家自然科學基金(81560600)；云南省昆蟲生物醫(yī)藥研發(fā)重點實驗室開放課題(201406-04)。

邵維莉(1992-)，女，漢族，碩士，研究方向為中藥藥理學。E-mail：770892271@qq.com

王濤(1975-)，女，白族，本科，實驗師，研究方向為微生物與免疫學。E-mail：1977757178@qq.com

R

A

1007-8517(2016)23-0036-03