基線等比增減設計法優選黃芪注射液及燈盞細辛注射液治療氣虛血瘀證小鼠聯合用藥配比*

李佶操，王奉光，王 葵，張 渝，鄧 睿，盛艷梅

成都醫學院 藥學院(成都 610083)

·論 著·

基線等比增減設計法優選黃芪注射液及燈盞細辛注射液治療氣虛血瘀證小鼠聯合用藥配比*

李佶操，王奉光，王 葵，張 渝，鄧 睿，盛艷梅△

成都醫學院 藥學院(成都 610083)

目的 考察不同配比的黃芪注射液、燈盞細辛注射液聯合使用對氣虛血瘀證小鼠凝血功能及血脂水平等的影響，優選出最佳配比。方法 建立氣虛血瘀模型小鼠，結合基線等比增減設計法，將實驗小鼠分成正常對照組、模型對照組及黃芪-燈盞細辛注射液(10∶0、10∶3、10∶6、10∶10、1∶10、0∶10)配比組，觀察給藥前后小鼠體征變化，并檢測小鼠凝血時間及血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C水平。結果 與模型組比較，除黃芪∶燈盞(10∶0)差異無統計學意義(P>0.05)外，其余各配比組均能顯著延長凝血時間，差異有統計學意義(P<0.01或0.05)；各配比組除對HDL-C無明顯影響外，均能顯著降低TG、TC、LDL-C水平，差異有統計學意義(P<0.01或0.05)，均以黃芪∶燈盞(10∶6)組作用明顯。結論 黃芪-燈盞細辛注射液聯用能改善小鼠的氣虛血瘀癥狀，較單用效果好，最佳配比為黃芪∶燈盞(10∶6)。

黃芪注射液； 燈盞細辛注射液； 聯用； 氣虛血瘀證

缺血性腦病，中醫稱為“缺血性腦卒中”，好發于中老年人，是人類最常見的三大致死原因之一[1]。中醫認為氣虛血瘀是缺血性腦病的主要病機，臨床常以益氣活血為其治法，將黃芪和燈盞細辛注射液聯合應用，在改善患者神經損傷引起的多種臨床癥狀，促進神經功能恢復方面取得了優于單用組或西醫對照組的療效[2-5]，但二者的最佳聯用比例尚不明確。本研究以“黃芪-燈盞細辛”合用的益氣活血作用為研究重點，擬建立氣虛血瘀證動物模型，結合基線等比增減設計法研究黃芪和燈盞細辛聯用對氣虛血瘀模型小鼠的療效，并優選出最佳配比，以期為后續研究及氣虛血瘀證缺血性腦卒中的臨床合理用藥提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑 黃芪注射液(黑龍江珍寶島藥業股份有限公司生產，批號：20150409)，燈盞細辛注射液(云南生物谷藥業股份有限公司生產，批號：20150532)；脂肪乳劑(每100 mL由豬油 20 g、膽固醇 10 g、膽鹽 2 g、吐溫-80 20 mL、1，2-丙二醇 20 mL及蒸餾水適量配制而成)。低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)試劑盒(批號：20151027)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒(批號：20151027)，總膽固醇(TC)試劑盒(批號：20151026)，甘油三酯(TG)測試盒(批號：20151028)均購自南京建成生物工程研究所。

1.1.2 實驗動物 健康雄性ICR小鼠數只，體質量(22±2)g，由四川省醫學科學院·四川省人民醫院實驗動物研究所提供，合格證號：SCXK[川]2013-15，實驗前適應性飼養1周。

1.1.3 主要儀器 酶標儀(Biotek Powerwave XS2)、離心機(北京醫用離心機廠)等。

1.2 實驗方法

1.2.1 氣虛血瘀證模型小鼠的制備[6-8]將實驗小鼠每晚22:00給予飼料2 g/每只/每天，上午10:00按5 mL/kg灌胃脂肪乳后，11:00左右游泳，分批置于水深約30 cm,水溫(14.0±0.5)℃水中，以木條撥打強迫其不斷游泳直到小鼠3～5 s無法浮出水面，將小鼠撈出，不予保溫措施及擦拭水跡，關閉門窗任其暴露于空氣中自然晾干，連續造模10 d。

1.2.2 分組與給藥 采用基線等比增減設計法[9-10]進行動物分組與給藥，將上述造模成功的小鼠隨機分為模型對照組、試驗組(按黃芪注射液與燈盞細辛注射液聯合用藥配比的不同共分為7組，具體配比見表1)，另設正常對照組。每組10只，藥物劑量參照臨床用藥劑量換算，給藥組按照0.3 mL/100 g相應藥液于每晚18:00腹腔注射給予。模型對照組與正常對照組均給予相應體積生理鹽水，連續給藥5 d。

1.3 評價指標

1.3.1 體征觀察 觀察給藥前后各組小鼠的活動情況、精神、毛發、糞便、舌質、眼球顏色、尾部是否出現瘀點或瘀斑等癥狀。

1.3.2 凝血時間測定 末次給藥后采用毛細玻璃管從眼眶后靜脈叢取血，血液進入吸管立即計時，每隔10 s折一小段，直至折斷處出現血絲，即記錄為凝血時間。

1.3.3 生化指標檢測 第2天采用摘眼球取血法收集血液，離心(3 000 r/min，10 min)，保存血清備用。分別按照試劑盒說明書方法檢測TG、TC、LDL-C、HDL-C含量。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 體征觀察

參照任建勛等[8]的評價方法，造模成功的小鼠均存在不同程度氣虛血瘀表現：如精神萎靡、毛發枯黃或結穗或脫落、稀便等氣虛癥狀明顯，且伴舌質暗淡或絳紫、尾部出現瘀點或瘀斑等血瘀表征，給藥5 d后各藥物組的氣虛血瘀癥狀均較模型組有較明顯改善。

2.2 不同給藥組小鼠凝血時間比較

末次給藥后每組隨機選取6只小鼠，采用毛細管法進行凝血時間測定。結果顯示：模型組的凝血時間明顯低于正常組，表明該模型制備是成功的；與模型組比較，黃∶燈(10∶0)對凝血時間無明顯影響，差異無統計學意義(P>0.05)，其余各配比組均能明顯延長凝血時間，差異有統計學意義(P<0.05或0.01)；與黃∶燈(10∶6)比較，各受試藥組除(10∶1)、(10∶10)組無明顯差異外，其余組均有統計學意義，故對凝血時間的影響，尤以黃∶燈(10∶6)作用更明顯(表1)。

2.3 不同給藥組小鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C水平的比較

將各組血清樣品分別按照TG、TC、LDL-C、HDL-C試劑盒說明書方法檢測，并計算。結果顯示：與正常組比較，模型組小鼠的TG、TC、LDL-C明顯升高，而HDL-C明顯降低，差異有統計學意義(P<0.01)，表明采用寒濕饑餓加高脂飼料喂養制作的氣虛血瘀模型是成功的。與模型組比較，除對HDL-C無明顯升高作用外，各配比組均能明顯降低TG、TC、LDL-C水平，且差異有統計學意義(P<0.01或0.05)，聯用較單用療效優，綜合評價以黃∶燈(10∶6))組作用更明顯(表2)。

表1 不同給藥組小鼠凝血時間比較

注:與模型對照組比較，#P<0.05,##P<0.01；與黃∶燈(10∶6)比較，*P<0.05,**P<0.01

表2 不同給藥組小鼠TG、TC、LDL-C、HDL-C的比較

注:與模型對照組比較，#P<0.05,##P<0.01

3 討論

黃芪具有益氣固表、利水消腫等功效，其主要含有黃芪皂苷、多糖、黃酮等多個活性成分，現代臨床常用黃芪注射液治療缺血性腦血管疾病，有較好療效，其主要物質基礎為皂苷類成分。燈盞細辛具有祛風散寒，活血通絡止痛的功效，其主要含有黃酮、咖啡酸酯、酚酸類化合物等，在心腦血管疾病中療效確切。臨床在益氣活血法指導下，將黃芪、燈盞細辛注射液聯合應用于腦卒中患者，在改善神經損傷引起的多種臨床癥狀方面取得了優于單用組或西醫對照組的療效。

本研究考察了燈盞細辛注射液與黃芪注射液聯用對氣虛血瘀證小鼠凝血功能及血脂水平等的影響，結果表明兩藥不同配比對氣血血瘀小鼠的凝血時間及TG、TC、LDL-C等指標均有不同程度的改善作用，且兩藥聯用較單用組作用明顯，其中相對最佳配比為黃∶燈(10∶6)，體現了益氣活血法改善氣虛血瘀證的協同作用，為后續課題的開展奠定了實驗基礎。課題組將在該模型基礎上建立腦缺血再灌注損傷動物模型，進一步評價黃芪與燈盞細辛聯用對氣虛血瘀證腦缺血再灌注損傷大鼠的保護作用，并確證其最優配比及相關機制。

[1]Dajas F, Rivera-Megret F, Blasina F,etal. Neuroprotection by flavonoids[J]. Braz J Med Biol Res,2003, 36(12): 1613-1620.

[2]劉清， 劉曉楓，李強.燈盞細辛注射液合黃芪注射液治療缺血性腦卒中107例臨床研究[J]. 中國初級衛生保健,2004, 18(7): 81-82.

[3]羅翌, 葉燁,梅廣源,等.黃芪注射液合燈盞細辛注射液治療急性腦梗死40例療效觀察[J].新中醫,2005,37(5):44-45.

[4]蘇露煜, 李恒,李登科.黃芪和燈盞細辛注射液聯合治療腦梗塞45例[J].吉林中醫藥,2007,27(4):23-24.

[5]王大偉， 張宏業，羅翌，等. 益氣活血法對缺血性腦卒中急性期(氣虛血癖證)神經保護作用的影響[J].新中醫,2006,38(9):31-32.

[6]王鍵， 趙輝，李凈，等.多因素復合制作氣虛血瘀證腦缺血動物模型的實驗研究[J].中國實驗動物學報,2001,9(4):216-220.

[7]婁金麗， 張允嶺，鄭宏，等.氣虛血瘀證動物模型研究的思路與方法[J].北京中醫藥大學學報，2006,29(2):87-90.

[8]任建勛， 林成仁，劉建勛，等. 多因素復合刺激誘導建立大鼠氣虛血瘀證動物模型的探索性研究[J]. 中國中藥雜志.2011,36(1):72-76.

[9]唐志書， 郭立瑋，王斌，等. 基線等比增減設計法優選PNS/TGCO組分對實驗性氣虛血瘀型冠心病的影響研究[J]. 中藥材,2010，33(9):1439-1442.

[10] 王霜， 趙興冉，南星梅，等. 基于基線等比增減設計法優選葛根-黃連抗消渴最佳配比[J]. 中國實驗方劑學雜志. 2014,20(20): 128-131.

[11] 盛艷梅， 陳磊，謝興亮. 基于基線等比增減設計法優選黃芪多糖-皂苷的免疫調節最佳配比[J].中國醫院藥學雜志, 2016.36(1)：59-62.

The Effect of Different Ratios of Astragalus Injection and Erigeron Breviscapus Injection on the Mice with Syndrome of Qi Deficiency and Blood Stasis on the Basis of Increase-decrease Baseline Geometric Proportion Design Method

LiJicao,WangFengguang,WangKui,ZhangYu,DengRui,ShengYanmei△.

SchoolofPharmacy,ChengduMedicalCollege,Chengdu610083,China

Objective To observe the effect of different ratios of astragalus injection (AT) and Erigeron breviscapus injection (EB) on the mice with syndrome of Qi deficiency and blood stasis, and explore the optimum ratio. Methods The mouse models with syndrome of Qi deficiency and blood stasis were established and randomly divided into the control group, the model group, and the treatment groups with different AT-EB ratios including 10∶0, 10∶3, 10∶6, 10∶10, 1∶10, 0∶10 on the basis of the increase-decrease baseline geometric proportion design method. Then the clotting time and the TG, TC, LDL-C and HDL-C levels of serum were detected．Results Compared with the model group, The treatment groups with different AT-EB ratios can significantly prolong the clotting time (P<0.01 or 0.05) except that with the ratio of 10∶0. the level of HDL-C wasn′t changed significantly, but the levels of TG, TC and LDL-C decreased significantly in all the treatment groups with different ratios (P<0.01 or 0.05), and the treatment group with the ratio 10∶6 showed better effect than the other treatments. Conclusion The combined therapy of astragalus injection and erigeron breviscapus injection can improve the syndrome of Qi deficiency and blood stasis in mice to different degrees, and the combined administration has better effect than the single one. The optimum ratio is 10∶6.

Astragalus injection; Erigeron breviscapus injection; Combination; Syndrome of Qi deficiency and blood stasis

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20161125.1107.012.html

10.3969/j.issn.1674-2257.2016.06.004

國家自然科學基金資助項目(No:81403311); 國家級大學生創新創業訓練項目(No:201513705026)

R 285.5

A

△通信作者： 盛艷梅，E-mail：467131233@qq.com