關于肝炎臨床檢驗技術發展現狀與展望

嚴廣友

【摘要】丙型肝炎首次檢測方法丙肝病毒-HCV檢測法于1989年正式被提出，丙型肝炎病毒（HCV）醫學檢測研究和實踐越來越深入。該研究為了解丙肝病毒檢驗技術發展與研究現狀，對近年來的相關研究報道進行了綜述，此類病毒的檢驗手段主要涵蓋了HCV抗原檢測技術、HCV-RNA核算擴增檢測技術、抗-HCV檢測以及HCV核心抗原和抗-HCV檢測等類。了解不同HCV檢驗技術研究和應用現狀、進展，是加快HCV檢驗技術研究改良以及更好地運用HCV檢驗技術、改善HCV臨床診療水平與效益的關鍵所在。

【關鍵詞】抗原檢測；核心抗原；核酸檢測技術（NAT）

丙型肝炎是丙型肝炎病毒（HCV）感染所致的典型全球性傳染性疾病，HCV傳播途徑較多，并且有許多綜合途徑或隱性途徑。由于目前臨床上尚未研制出專門有效的丙型肝炎疫苗，因而需找靈敏的HCV檢驗途徑、積極預防并及早發現HCV感染是避免丙型肝炎發病、影響人類健康的最佳方式。該研究為尋求有效可靠的HCV檢驗方式，對近年來研究較多的HCV抗原檢測技術、HCV-RNA核算擴增檢測技術、抗-HCV檢測以及HCV核心抗原和抗-HCV檢測手段應用現狀及研究進展進行了綜述。

1抗-HCV檢驗技術

抗-HCV檢測技術是最早出現、研究和應用時間最久的HCV檢測技術，此種方式是歷經十幾年不斷嘗試、改良得到的有效檢測方式，并進一步演變出ELISA、雙抗原加薪、充足免疫印跡法（RIBA）、蛋白芯片檢測法、間接酶聯免疫吸附試驗f間接ELISA）、免疫層析法等多種實用可靠的方式。提及的這些各類檢測手段中，重組免疫印跡法（RIBA）尤以極高的靈敏度得到一致認可，并且已經成為抗體檢測的最佳標準：蛋白芯片的正確使用可靈敏得出準確的抗-HCV分型；ELISA則因其簡單的操作、成本較低的設備材料和較滿意的檢測結果而成為目前應用最廣、最實用的抗-HCV檢測技術。

2 HCV-RNA核酸擴增檢測技術（NAT）

有一項HCV復制活躍相對準確的指標，即為外周血中檢出HCVRNA，HCV感染發生的14 d內即可檢測發現HCVRNA，而感染恢復之前的血清改物質水平再次達到新高峰。當前，NAT檢測技術已經成為部分臨床工作者使用的HCV感染確認途徑使用。HCV RNA水平會隨飲食情況發生變化，當攝入食物蛋白、脂肪含量高時，其更易因結合脂蛋白、脂質而導致檢出水平遠遠低于日常水平，這也是導致檢查不準確的一種常見原因一。此外，NAT檢測技術操作過程需要高標準的設備予以支持、經驗豐富的操作人員予以配合，而且檢查結果可能因為檢查過程意外污染而呈現假陽性而影響檢查結果準確度，因而此種檢驗方式在實際臨床工作中或實驗室研究中都難以真正大范圍推廣應用，普及難度較高。NAT檢驗技術的不同廠商研發出的方法和相關設備不盡相同，PCR測定方式相對適用于更多的條件及患者，使用效果最被認可，目前尤以套式PCR技術最佳，目前應用較多、效果最滿意的當屬熒光定量PCR技術，此種技術檢測HCV感染時，有較高靈敏度，而且有自動定量檢測手段更方便使用，近年來關于NAT技術應用的最新研究先后發現了基因芯片技術、環介導等溫基因擴增技術（LAMP），前者操作簡單、對儀器設備和材料要求不高，應用前景廣闊。

3 HCV抗原檢測技術

隨著HCV抗原檢測技術的不斷更新和相關研究的不斷深入，有學者提出抗原抗體復合物解離劑、單克隆抗體的加緊研究和應用是改良HCV抗原檢測現有技術的關鍵所在。近些年，西方一些研究嘗試推出定量、定性法相關的雙抗體夾心法對血清標本中游離HCV或總HCV核心抗原ELISA試劑盒。上述新型檢驗技術相比RT-PCR技術進一步簡化了操作、增強了環境適應性、縮短了檢驗所需時間，假陽性率也進一步得到控制，可以說，此種新的檢驗技術很大程度上克服了原有技術的短板，尤其適用于HCV血清學轉換前期的抗-HCV陽性感染病毒血癥分析、急性丙型肝炎診斷工作和HCV感染者就醫過程中病毒血癥跟蹤觀察等工作。另外，HCV核心區基因變異與HCV核心抗原檢測結果有直接而復雜的聯系，抗原檢測敏感度并非一成不變。因而，對當前推廣的試劑盒進行改良，就需要著重提升單克隆抗體的天然抗原構象表位親和力。

4同時檢測抗-HCV與HCV核心抗原技術

抗原抗體聯合檢驗技術是臨床專家經過反復實踐分析，探索出的血清學、HCV篩查試劑盒聯合檢測新技術，當前相對成熟的成果是HCV核心抗原和外周蛋白抗體及部分核心抗體相結合的檢測試劑盒。HCV核心抗原是HCV感染者體內出現的早期感染指標，幾乎與HCVRNA同時出現，這體現了核心抗原和HCV RNA的動力學變化密切相關。

HCV核心抗原側測定分析主要依靠血清樣品HCV核心抗原水平定量檢測或雙抗體夾心法定性檢測。此種檢驗技術極少因樣品內所含抗-HCV影響而出現精確度降低現象，結果相對可靠靈敏，此種技術可應用于HCV早期急性丙型肝炎的臨床診斷。不久的將來，市場上將會出現越來越多的聯合檢測類試劑盒，通過兩步檢測實現篩查、診斷和輔助治療工作，縮短檢驗所需時間是日后亟需解決的難題。

5總結

綜上所述，HCV檢驗技術主要有HCV抗原檢測技術、HCV-RNA核算擴增檢測技術、抗-HCV檢測以及HCV核心抗原和抗-HCV檢測共4種類型，各有優劣，且都在不斷改良和發展中。日后，臨床上除了需要研究更多新的檢驗技術，還需要解決檢驗用時長、靈敏度低、結果易受影響等問題。