窄譜中波紫外線耐受白癜風皮損區SCF、IL—6表達的臨床研究

羅光浦

【摘要】目的：探討窄譜中波紫外線（NarrowBandUltraviolet，NB-UVB）對白癜風患者皮損內SCF及IL-6的影響。方法：選取30例白癜風患者，應用ELISA、RT-PCR等方法測定在窄譜中波紫外線治療前A1組（未經照射組）及治療后A2組（顯效期皮損組）、A3組（平臺期皮損組）SCF及IL-5含量及角質形成細胞SCF mRNA及IL-5 mRNA的表達量。同時測定正常皮膚對照組SCF及IL-6含量及角質形成細胞SCF mRNA及IL-6 mRNA的表達量。結果：A1組與正常皮膚對照組相比，IL-6及IL-6mRNA平均水平明顯降低，SCF及SCFmRNA平均水平明顯偏高。窄譜紫外線照射2 0次后，A 3組與正常皮膚對照組相比，IL-6及IL-6mRNA平均水平差異無統計學意義，SCF及SCFmRNA平均水平差異無統計學意義。窄譜紫外線照射2 0次及1 0次后，A 3組與A2組相比，IL-6及IL-6mRNA平均水平升高，差異有統計學意義（P<0.05），SCF及SCFmRNA平均水平下降，差異有統計學意義（P<0.05）。結論：IL-6在經UVB照射1 0次及2 0次后逐步恢復至正常水平，可能是UVB治療白癜風的機制之一。SCF在經UVB照射20次后其含量下降，可能是白癜風患者進入平臺期的原因之一。

【關鍵詞】NB-UVB；白癜風；SCF；IL-6

窄譜中波紫外線在皮膚科對多種疾病的治療均有較為顯著的效果，尤其在治療白癜風時，受到皮膚科醫生的青睞。既往研究證實，窄譜中波紫外線可刺激KC產生細胞因子如SCF、IL-6等，并以旁分泌作用的方式誘導Mc的黑素生成。

1資料與方法

1.1一般資料

入選的30例患者均來自我科2014年3月至2016年1月就診的白癜風患者。男17例，女13例（年齡15-45歲），平均（27.7±2.8）歲。病程6個月至11年。平均（4.12±3.16）年。選取10個健康人作為對照組。所有參加者均知情同意，治療方案經本院倫理委員會討論通過。

1.2方法

1.2.1皮損選擇及干預措施

每名患者的腹部皮損均選三處：分別標記為A1組（未經照射組）、A2組（顯效期皮損組）、A3組（平臺期皮損組）或選取一個皮損分為3處：分別標記為A1組（A1在行照射治療前進行遮蓋）、A2組、A3組。A1組皮損不進行照射，A2組皮損照射治療10次，A3組皮損照射治療20次。另選10個健康人作為正常皮膚對照組，男6名，女4名，年齡23-39歲，平均25.88±5.32歲。根據患者最小紅斑量值，設立起始照射量，A2組、A3組皮損起始照射劑量、照射間隔時間、每次照射劑量增幅均相同。采用德國Waldmann（沃曼1公司的UV1001KLNB-UVB皮膚病治療系統，所有患者單純接受311nnmUVB，隔日照射。如再次照射時出現輕度紅斑、瘙癢，照射劑量不變，直至癥狀消失。如有疼痛性紅斑、水皰，待皮損消失后再進行皮損照射，照射劑量減少0.1J/cm2。

1.2.2負壓吸引發皰提取皰液

A1組：采用BY--1I型皮膚分離儀負壓吸引發皰，受皮區選擇健康腹部皮膚，白斑區和供皮區先用75%乙醇消毒后同時發皰。負壓設定為50 kPa，溫度設定為50℃，完整、飽滿的水皰形成后，用1mL滅菌注射器分別收集兩處皰液（棄去血性皰液1，置-70℃冰箱；應用眼科剪，剪取皰壁，備用。正常皮膚對照組發皰方法同上。

A2區：選擇目前正處于復色良好的顯效期皮損（連續4次之內明顯復色者），采用以上1步完全相同的負壓、溫度等條件，獲取皰液及皰壁，備用。

A3區：選擇平臺期皮損（已連續8次以上復色無進展的），采用以上1步完全相同的負壓、溫度等條件，獲取皰液及皰壁，備用。

1.2.3實驗方法

應用雙抗夾心ELISA方法，檢測正常皮膚對照組及A1組、A2組、A3組SCF及IL-6含量。

1.2.4引物設計

應用RT-PCR技術分別檢測正常皮膚對照組、A1組、A2組、A3組角質形成細胞SCF及IL-6 mRNA的表達量；用超純RNA提取試劑盒提取組織樣本中總RNA。實驗操作按產品說明書進行。采用PCR儀進行擴增，引物序列如下：SCF引物：上游引物：5′-GATGTTTTGECAAGTCATTGTTGG-3′。下游引物：5′-AETGAETETGGAATETTTETEAGG-3′。IL-6引物：上游引物：5′-GAGACGCCTTGAAGTAACTG-3′。下游引物：5′-AACCAAAGATGTTCTGAACTGA-3′。

1.2.5統計學方法

應用SPSS 13.0軟件對實驗數據進行處理。采用配對樣本t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 A1、A2、A3組與正常皮膚IL-6、SCF的表達比較結果

見表1。

2.2 A1、A2、A3組與正常皮膚，IL-6mlKNA及SCFmRNA比較結果

見表2。

3討論

有研究表明，多數學者認為除節段型白癜風外，白癜風的發生與自身免疫密切相關，而角質形成細胞（KC，keratinocyte）在其中起到了關鍵作用。KC通過釋放細胞因子調節MC細胞的生長、分化、增殖、凋亡及黑素的產生及轉運。既往研究表明，IL-6作為KC分泌的重要細胞因子，與白癜風的發生密切相關。我們的研究發現白癜風未照射區皮損內IL-6及IL-6mRNA與正常皮膚對照組相比明顯降低，提示其降低可能與KC功能受損有關，與Tu等的研究相反。白癜風未照射區皮損內SCF及SCFmRNA與正常皮膚對照組相比明顯升高，與Kitamura等研究一致。

NB-UVB照射能促進KC分泌多種細胞因子，并誘導T細胞凋亡、抑制前炎癥因子的釋放，通過影響細胞因子的相互作用調節表皮黑素細胞的功能，促進黑色素生成。我們的研究發現，經NB-UVB照射10次、20次后，白癜風皮損內IL-6及IL-6mRNA持續升高，基本接近正常水平，可能為NB-UVB照射治療白癜風的機制之一。這與Eberlein-KonigB等通過體外實驗研究UVB對人類鱗癌細胞分泌IL-6的實驗結果基本一致。但目前KC分泌IL-6的機制尚不清楚，有待進一步研究。

窄譜紫外線照射20次及10次后，白癜風皮損內SCF及SCFmRNA平均水平下降，是否由于UVB照射治療使部分KC凋亡，因而導致SCF及SCFmRNA表達平均水平降低尚有待于進一步研究。SCF與MC關系密切，在經UVB照射20次后其水平的下降可能影響MC增殖與遷移，這可能是白癜風皮損進入平臺期的原因之一。