繡球菌多糖及其功能研究*

郝正祺，王榮榮，馮翠萍**，常明昌，3，孟俊龍，劉靖宇，程紅艷（．山西農業大學食品科學與工程學院，山西 太谷 03080；．信陽農林學院食品學院河南 信陽 6000；3．山西省食用菌工程技術研究中心，山西 太谷 03080；．山西農業大學資源環境學院，山西 太谷 03080）

繡球菌多糖及其功能研究*

郝正祺1，王榮榮2，馮翠萍1**，常明昌1，3，孟俊龍1，劉靖宇1，程紅艷4
（1．山西農業大學食品科學與工程學院，山西 太谷 030801；2．信陽農林學院食品學院河南 信陽 464000；3．山西省食用菌工程技術研究中心，山西 太谷 030801；4．山西農業大學資源環境學院，山西 太谷 030801）

為開發繡球菌多糖功能成分，本試驗采用聚能超聲波法進行提取，并對多糖體外抗氧化、清除亞硝酸鹽和阻斷亞硝基的合成、抑菌等功能進行研究。結果表明，試驗可提取出純度為83．30%的多糖，該多糖具有抗氧化、抑菌、清除亞硝酸鹽和阻斷亞硝基作用，并隨著濃度的增加作用增強。當濃度為8 mg·mL-1時，總還原力吸光值為0．33，脂質過氧化抑制率和DPPH·、H2O2·、OH-·、O2-·的清除率別為30．20%、94．83%、85．00%、95．23%、27．23%；對亞硝酸鹽的清除率以及亞硝基合成的阻斷率分別為61．98%和31．82%。在試驗濃度范圍內，對單增李斯特菌和鼠傷寒沙門氏菌MIC值在0．5 mg·mL-1～1 mg·mL-1，對金黃色葡萄球菌的MIC值在1 mg·mL-1～2 mg·mL-1；對福氏志賀氏菌和大腸埃希氏桿菌的MIC值在2 mg·mL-1～4 mg·mL-1。說明繡球菌多糖能作為抗氧化劑和腸道益生元產品原料進行開發，并為其生理功能調控機制的進一步研究提供依據。

繡球菌多糖；聚能超聲波法；自由基；亞硝基；致病菌

繡球菌（Sparassis crispa） 又名繡球菇、繡球蕈，是一種珍稀名貴的食藥同源真菌[1]。繡球菌子實體含有40%～43．6%的多糖，具有提高機體免疫力、抗腫瘤、抗病毒等功效[2-5]。當前多糖的提取方法大多為水提醇沉[6]，但該法提取效率低。聚能超聲波處理能夠加快物質運動速率、更好地破碎細胞壁、加速細胞內容物的釋放[7]，本試驗采用水提醇沉結合聚能超聲波技術提取繡球菌多糖，并對繡球菌多糖清除自由基的能力、抑制脂質過氧化能力、總還原能力、抑制致病菌作用、清除亞硝酸鹽以及阻斷亞硝胺合成能力進行分析測定，為其作為功能食品原料開發以及生理功能調控機制研究提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1．1．1 原料

繡球菌（Sparassis crispa），由山西省清徐縣太和食用菌栽培基地提供。

1．1．2 菌株

金黃色葡萄球菌、單增李斯特菌、鼠傷寒沙門氏菌、福氏志賀氏菌、大腸埃希氏桿菌，均由山西農業大學食品安全實驗室提供。

1．1．3 主要試劑

DPPH（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）、Tris購自美國Sigma公司；其他試劑均為國產分析純。

1.2 方法

1．2．1 多糖提取工藝流程

繡球菌子實體（干）→粉碎過200目篩→料水比1∶40（g∶mL） →超聲波處理（1 200 w，20 min）→離心→旋蒸到約15 mL→加3倍體積無水乙醇沉淀→離心→丙酮處理→離心→乙醚處理→離心→收集多糖→Sevage復合酶法除蛋白→冷凍干燥→稱量→測定繡球菌多糖純度。

1．2．2 多糖含量測定

按照參考文獻 [8]，采用苯酚-硫酸法進行多糖測定。

1．2．3 多糖溶液的配制

配制8 mg·mL-1多糖水溶液，2倍梯度稀釋成4 mg·mL-1、2 mg·mL-1、1 mg·mL-1、0．5 mg·mL-1和0．25 mg·mL-1的溶液，備用。

1．2．4 繡球菌多糖功能的研究

（1）繡球菌多糖的體外抗氧化作用

按照參照文獻 [9]方法進行各指標測定。清除DPPH·能力，即清除率（P1）公式為：

式中：A0表示無水甲醇吸光值；A表示樣液添加DPPH·和無水甲醇的吸光值；Ab表示樣液添加無水甲醇而未添加DPPH·的吸光值。

清除H2O2·能力：取不同濃度的多糖溶液5 mL，分別加入pH7．4的磷酸鹽緩沖液配置的10 mmol·L-1的H2O2溶液5 mL，混勻后在230 nm處測定其吸光值。清除率（P2）公式為：

式中：A1表示蒸餾水和H2O2溶液的吸光值；A2表示樣液添加H2O2溶液的吸光值；A3表示樣液添加磷酸鹽緩沖液而未添加H2O2溶液的吸光值。

清除OH-·能力，即清除率（P3）公式為：

式中：A4表示蒸餾水做參比溶液的吸光值；A5表示多糖反應液的吸光值。

清除O2-·能力，即清除率（P4）公式為：

式中：S表示鄰苯三酚自氧化的反應速率；Si表示加入樣品后鄰苯三酚自氧化的反應速率。

總還原力的測定，體外脂質過氧化抑制率（P5）公式為：

式中：A6表示以蒸餾水代替多糖反應液的吸光值；Ai表示多糖反應液的吸光值。

（2）多糖的抑菌活性測定

按照參考文獻 [10]，采用牛津杯法進行測定。

（3）多糖對亞硝酸鹽的清除作用以及對亞硝胺合成的阻斷作用

按照參照文獻 [11]方法進行各指標測定。多糖對亞硝酸鹽的清除作用，即清除率（P6）公式為：

式中：A7表示不加繡球菌多糖的空白吸光值；Ax表示不同質量濃度繡球菌多糖反應液的吸光值。

多糖對亞硝胺合成的阻斷作用，即亞硝基合成阻斷率（P7）公式為：式中：A8表示不加繡球菌多糖的空白吸光值；A9表示不同質量濃度多糖反應液的吸光值。

2 結果與分析

2.1 多糖的純度

通過苯酚硫酸法檢測，多糖純度為83．30%。

2.2 繡球菌多糖的體外抗氧化作用、清除亞硝酸鹽作用以及阻斷亞硝基作用

繡球菌多糖的抗氧化作用、清除亞硝酸鹽以及阻斷亞硝基合成的作用見表1。

表1 繡球菌多糖的抗氧化作用、清除亞硝酸鹽以及阻斷亞硝基合成的作用Tab．1 Antioxidant,NaNO2scavenging and nictrosamine synthesis disconnecting of Sparassis crispa polysaccharide

由表1可知，繡球菌多糖具有抗氧化、抑菌、清除亞硝酸鹽和阻斷亞硝基作用，并隨著濃度的增加作用增強。當濃度為8 mg·mL-1時，總還原力吸光值為0．33，脂質過氧化抑制率和DPPH·、H2O2·、OH-·、O2-·的清除率別為 30．20%、94．83%、 85．00%、95．23%、27．23%。對亞硝酸鹽的清除率以及亞硝基合成的阻斷率分別為61．98%和31．82%。

2.3 抑菌效果

繡球菌多糖對供試菌的抑菌圈直徑影響見表2。

表2 繡球菌多糖對供試菌的抑菌圈直徑Tab．2 Antimicrobial diameters of Sparassis crispa polysaccharide against tested strains

由表2可知，繡球菌多糖對金黃色葡萄球菌、單增利斯特菌、鼠傷寒沙門氏菌、福氏志賀氏菌、大腸埃希氏桿菌均有一定的抑制效果，對單增李斯特菌和鼠傷寒沙門氏菌的MIC值在0．5 mg·mL-1～1 mg·mL-1，金黃色葡萄球菌MIC值在1 mg·mL-1～2 mg·mL-1，福氏志賀氏菌和大腸埃希氏桿菌MIC值在2 mg·mL-1～4 mg·mL-1。

3 討論

本試驗結果表明，繡球菌多糖具有抗氧化作用，禹國龍等[12]研究也發現繡球菌多糖對羥基自由基、超氧陰離子自由基具有良好的清除作用，說明繡球菌多糖可作為外源性的抗氧化劑，其抗氧化機制除了直接參與消除自由基途徑外，還可能參與調動或激活機體的內源性抗氧化劑，避免或減輕自由基對機體的損傷[13]。亞硝酸鹽具有潛在的致癌作用，本試驗結果表明繡球菌多糖具有較強的清除亞硝酸鹽的能力，因此該多糖可作為預防亞硝酸鹽潛在致癌作用的功能產品原料。繡球菌多糖對常見的食源性致病菌具有一定的抑制效果，亢爽等[14]也發現，一定濃度的繡球菌多糖對細菌及少數真菌具有一定抑制作用，繡球菌多糖可作為腸道益生元產品開發，抑制人體腸道中有害菌生長。

4 結論

聚能超聲波提取出純度為83．30%的繡球菌多糖，具有一定的清除自由基、亞硝酸鹽，阻斷亞硝基合成以及抑菌能力，其在試驗濃度范圍內隨濃度的增加而增強。可作為功能食品原料開發，其生理功能調節機制有待進一步研究。

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[5]Harada T,Nagi Miura N,Adachi Y,et al．Antibody to soluble 1,3/1,6-Beta-glucan,scg in sera of naive dba/2 mice[J]．Biological and Pharmaceutical Bulletin,2003,26 （8）:1225-1228．

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[14]亢爽，劉娜，張麗霞．繡球菌水溶多糖的提取及其抑菌效果[J]．安徽農業科學，2015，43（22）：1-2．

Research of Sparassis crispa Polysaccharide and Its Function

HAO Zheng-qi1,WANG Rong-rong2,FENG Cui-ping1,CHANG Ming-chang1,3,MENG Jun-long1,LIU Jing-yu1, CHENG Hong-yan4
（1．College of Food Science and Engineering,Shanxi Agricultural University,Taigu 030801,China;2．College of Food,Xinyang College of Agriculture and Forestry,Xinyang 464000,China;3．Shanxi Research Station for Engineering Technology of Edible Fungi,Taigu 030801,China;4．College of Resource and Engineering,Shanxi Agricultural University,Taigu 030801,China）

To develop functional components of Sparassis crispa polysaccharide,the antioxidant ability,NaNO2scavenging and nictrosamine synthesis disconnecting activity,bacteriostasis using S.crispa polysaccharide by energy-gathered ultrasonic extraction as material was studied in this experiment．The results showed that with increasing concentrations of polysaccharide function enhancement,at 8 mg·mL-1polysaccharide concentration,the absorbance of total ferricyanide reducing activity was 0．33．The lipid oxidation inhibiting rate was 30．20%．The scavenging activity of DPPH·,H2O2·,OH-·and O2-·were 94．83%, 85．00%,95．23%and 27．23%respectively．The NaNO2scavenging and nictrosamine synthesis disconnecting activity were 61．98%and 31．82%．S.crispa polysaccharide had inhibitory effect on bacterium．The MIC of Salmonella typhimurium and Listeria monocytogenes were 0．5 mg·mL-1～1 mg·mL-1,the MIC of Staphylococcus aureus was 1 mg·mL-1～2 mg·mL-1,and the MIC of Escherichia coli and Shigella flexneri were 2 mg·mL-1～4 mg·mL-1．S.crispa polysaccharide,as an antioxidant and intestinal prebiotic materia,provided the theoretical basis for further study of the physiological functions in regulatory mechanisms．

Sparassis crispa polysaccharide;energy-gathered ultrasonic;free radical;nitroso-group;pathogenic bacteria

S646.9

：A

1003-8310（2017）01-0048-04

10．13629/j．cnki．53-1054．2017．01．011

山西省煤基重點科技攻關項目（FT2014-03-01）；山西農業大學博士科研啟動經費項目（No．412564）。

郝正祺（1992-），男，在讀碩士研究生，研究方向：食品科學。E-mail:172048172＠qq．com

**通信作者：馮翠萍（1970-），女，博士，教授，主要從事食品加工與安全研究。E-mail:ndfcp＠163．com

2016-11-16