農藥殘留快速檢測方法及經驗探討

譚澤芬，劉紹蓮

（永勝縣農產品質量安全檢測中心，云南 麗江 674200）

農藥殘留快速檢測方法及經驗探討

譚澤芬，劉紹蓮

（永勝縣農產品質量安全檢測中心，云南 麗江 674200）

通過介紹農藥殘留的快速檢測方法，具體分析了不同檢測環節對檢驗結果的影響，同時提出了在操作中遇到具體問題的處理方式以及注意事項，供參考借鑒。

農藥殘留；檢測方法；經驗

用農藥殘留速測儀檢測農藥殘留，方便快捷、前處理簡單、對檢測人員要求低、操作簡便且靈敏度高，便于農藥殘留檢測部門開展快速檢測工作。但目前速測儀廠家多、型號多，僅永勝縣農產品質量安全檢測中就有3個廠家的速測儀：PR-410型、海葒興HHXSI-24NC以及CL-BIII型等。

但萬變不離其宗，根據多年的工作經驗，速測儀的原理相同，操作步驟大致一樣，只是試劑、樣品的取樣量不同而已，快速檢測技術有一定的技巧可循，掌握了這些方法，對農藥殘留快速檢測工作就能透徹理解、準確操作，有效地做好快速檢測工作，從而達到對農產品質量安全有效監管的目的。

1 檢測范圍

所有農藥殘留速測儀都只檢測有機磷類和氨基甲酸酯類兩類農藥，因現階段我國有機磷類和氨基甲酸酯類農藥使用量約占95%以上，且在蔬菜和水果上使用最多，也是最容易引起中毒的兩大類農藥，是國家重點監控的目標，為此只要監管好這兩類農藥，就基本可避免食用蔬菜和水果中毒事件發生。

2 檢測原理

乙酰膽堿酯酶（或丁酰膽堿酯酶）水解后，水解產物碘化硫代乙酰膽堿與顯色劑二硫雙硝基苯甲酸（DTNB）反應生成黃色物質，而有機磷類和氨基甲酸酯類農藥可以抑制乙酰膽堿酯酶的活性，使這種酶不能被水解或水解程度下降，從而無顯色反應或黃色產物減少，用此判斷有機磷類和氨基甲酸酯類農藥是否存在。

在反應完成后，用分光光度計測定黃色產物隨時間變化的吸光值，計算出抑制率，以此判斷蔬菜和水果中含有機磷類和氨基甲酸酯類殘留的情況。根據抑制率來判斷檢測結果，依據農藥含量做出是否合格的判斷。

抑制率（%）=△Ao-△At/△Ao×100%

式中：△Ao——對照液反應后吸光度的變化值；

△At——樣品溶液反應后吸光度的變化值。

3 檢測試劑的準備

3.1 緩沖液的配制

將緩沖試劑倒入燒杯中，加入規定量的娃哈哈純凈水或二級及以上的超純水溶解，混勻即可。

3.2 底物

底物用規定量的緩沖液溶解。

3.3 酶和顯色劑

如不是溶液，都要用規定量的配制好的緩沖液溶解后才可使用。

配制好的底物、酶及顯色劑需放入冰箱冷藏（0～5℃）切勿冷凍結冰。配好的緩沖液常溫保存即可。

4 空白對照及檢測樣品的制備

不同型號的儀器設備的農殘速測儀，其空白對照及檢測樣品的制備順序都相同，都是按酶—緩沖液（待測液）—顯色劑—底物的順序加入，不同的只是酶、顯色劑及底物的取用量不同，樣品的取樣量不同而已。下面以海葒興HHXSI－24NC速測儀為例來說明對照及樣品的制備。

4.1 空白對照的制備

取酶100 μL于軋口瓶中（或者試管），加入緩沖液2.5 mL，再加入顯色劑100 μL、底物20 μL，搖勻后立即倒入比色皿中，放入儀器指定通道，按操作進行測量。

4.2 檢測樣品的制備

稱取2.0 g樣品于三角瓶中，加入10 mL緩沖液（如稱取4.0 g樣品，則加入緩沖液20 mL），搖勻振蕩1 min，稍靜置后，倒出樣液備測。取一軋口瓶（或試管），加入100 μL酶、2.5 mL待測液，混勻靜置10 min，再加入顯色劑100 μL、底物20 μL，搖勻后立即倒入比色皿中，放入儀器指定通道，按操作進行測量即可。

5 碰到的問題及處理

在檢測中，時常碰到以下問題，可通過這些方法進行處理。

5.1 對照值偏小

儀器工作以前，應先預熱5～10 min，使儀器狀態穩定；其次，將顯色劑和底物加入提取液后的時間嚴格控制，加入底物后應立即檢測，盡量縮短操作時間。

5.2 樣品吸光值偏高

這現象是由于酶本身活性低、樣品待測液顏色深以及反應中化學和物理干擾所造成。解決辦法：①將酶和其他試劑恢復至室溫，酶用前要搖勻；②制樣時樣品切成見方為宜，不可過碎，以免色素、纖維素等成分釋放。果實類蔬菜如西紅柿等應避免汁水帶入樣品中導致試樣混濁，爛葉、枯葉中的某些成分也會導致溶液混濁，干擾測定；③發現樣品混濁時，適當增加靜置時間，可消除上述不利影響的發生；④嚴格控制提取時間，時間過短不能有效提取蔬菜表面的農藥殘留，時間過長會把蔬菜中的色素提取。

5.3 檢測結果中抑制率不正常

對照測試時間與樣品測試時間相隔太久，導致對照與樣品測試溫度條件相差較大；其次，跟試劑的取用量是否準確有關。

5.4 辛辣蔬菜等農藥殘留假陽性問題

某些蔬菜如蔥（含有揮發性硫化物）、姜（含有姜辣素）以及蒜類（含硫揮發物，如硫化亞磺酸）等，蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質，會引起干擾產生假陽性。可采取增大樣品切塊，減少浸提時間的方法。

6 注意事項

6.1 移液槍要正確使用

移液槍使用的好壞，決定著試劑的取用量是否準確。使用時，吸頭管要牢固裝好，取樣時只按壓至第一停點，將吸頭置于液面下，慢慢松開，千萬不要按壓到底取液，會導致取液量偏大。為避免損壞液槍，移液槍的移液量不能超出其范圍，吸頭內含有液體時不可將移液槍水平放置，不使用時，將量程調為最大。

6.2 酶試劑的保存及使用

平常要在0～5℃環境條件下冷藏保存，酶試劑使用前要晃均勻，即用即取，要防止其他物質的污染，以免溶液中毒失效。

6.3 試劑“只出不進”

每次測試時，從試劑瓶中抽取的試劑不管是否使用，只要吸出來了，用不上或用不了，即使造成浪費也不要打回去。否則容易污染整瓶試劑，造成更大的損失，甚至影響以后所有的測試，產生錯誤的測試數據。

1005-2690（2017）04-0124-02

：S481+.8

：A

2017-03-06）