脂多糖促進人結膜上皮細胞IL-6的表達

叢賈囡,宋占晨,曲 忻*

(1.長春市中心醫院 眼科,吉林 長春130061；2.白城市醫院 耳鼻咽喉科)

脂多糖促進人結膜上皮細胞IL-6的表達

叢賈囡1,宋占晨2,曲 忻1*

(1.長春市中心醫院 眼科,吉林 長春130061；2.白城市醫院 耳鼻咽喉科)

脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種成分，當細菌死亡溶解釋放出來，可引起微循環障礙、內毒素釋放及血管內凝血等。本研究擬探討脂多糖能否促進人結膜上皮細胞IL-6的表達與釋放從而放大結膜炎性反應。

1 材料與方法

1.1 材料和來源

原代培養的人結膜上皮細胞均來自于長春市中心醫院眼科手術中獲得的結膜組織分離培養。

1.2 結膜上皮細胞的培養處理

獲得原代培養的人結膜上皮細胞培養到3-4代。在24孔板內培養細胞至單層細胞融合。用PBS緩沖液洗滌細胞，加入0.25%的胰蛋白酶及0.06%的EDTA液以消化貼壁結膜細胞。用倒置顯微鏡觀察細胞。加入終止液終止消化。調整結膜上皮細胞濃度為5×104/ml[1]。

1.3 LPS對人結膜上皮細胞的刺激

取上述培養好的人結膜上皮細胞，加入LPS至濃度為1 μg/ml，10 μg/ml及100 μg/ml，對照組加入PBS緩沖液。分別于12 h及24 h后，利用分光光度計檢測培養液吸光度。然后離心培養液，獲得上清液，用以檢測IL-6的濃度。

1.4 酶聯免疫吸附試驗對IL-6的檢測

采用ELISA方法檢測上清液中IL-6的水平，方法按試劑盒要求執行。試劑盒為武漢博士德公司產品。

1.5 統計學方法

實驗結果用均數±標準差表示。采用SPSS13.0統計軟件進行統計學分析。采用單因素方差分析不同濃度LPS對IL-6水平的影響。

2 結果

不同濃度LPS作用12及24小時后對人結膜上皮細胞分泌IL-6水平的結果見表1。加入LPS后12及24小時，對照組光吸收值無明顯差異(P>0.05)，證明細胞數沒有差異。兩個時間點各濃度實驗組IL-6水平明顯高于對照組,與對照組相比差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

急性結膜炎臨床表現為突發結膜充血，燒灼感、癢、分泌物多，要確定結膜炎的病源需作分泌物涂片進行細菌和細胞學檢查。LPS是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的重要成分。其被證實參與對小膠質細胞在內多種細胞的促炎作用，提高作用細胞分泌一氧化氮及IL-6等炎癥因子的表達[2]。還有研究發現，積雪草酸能夠抑制人結膜上皮細胞在炎癥信號刺激下出現一系列細胞因子的變化[3],包括NF-kappaB及p-ERK等細胞信號途徑會被激活，這均可能參與到IL-6的表達調節過程[4]。本研究結果表明，12及24小時兩個時間點各濃度實驗組IL-6水平明顯高于對照組，且與LPS濃度及作用時間具有相關性。提示脂多糖能夠誘導的人結膜上皮細胞炎癥因子IL-6的分泌,其對結膜上皮細胞有直接促炎作用。

[1]鄭健樑，盧 蓉，張 潔， 等.人結膜上皮細胞的培養鑒定及液氮凍存[J].眼科學報,2000,16(2):135.

[2]趙建云，鄧展進，劉瑞珍.HU308對脂多糖誘導小膠質細胞分泌NO及IL-6的影響[J].中國醫藥科學，2014,4(5):36.

[3]Hua XM,Ze BC,Wang B,et al.The anti-inflammatory effects of asiatic acid in lipopolysaccharide-stimulated human corneal epithelial cells[J].Int J Ophthalmol,2017,10(2):179.

[4]Park JY,Chung TW,Jeong YJ,et al.Ascofuranone inhibits lipopolysaccharide-induced inflammatory response via NF-kappaB and AP-1,p-ERK,TNF-α,IL-6 and IL-1β in RAW 264.7 macrophages[J].PLoS One,2017 ,12(2):e0171322.

*通訊作者

1007-4287(2017)09-1403-01

2016-04-14)