HPLC在中藥研究中的應(yīng)用

金鳳華

·綜述·

HPLC在中藥研究中的應(yīng)用

金鳳華

闡述高效液相色譜法(HPLC)在中藥方面的應(yīng)用, 包括炮制、指紋圖譜、有效成分的測定、藥理等。

高效液相色譜法；中藥研究；應(yīng)用

高效液相色譜法(high performance liquid chromatography, HPLC)起源于上世紀(jì)70年代, 自誕生后發(fā)展快速, 主要是分析、分離多成分的儀器技術(shù), 其特點在于方便、靈敏、準(zhǔn)確、快速。目前在各大領(lǐng)域, 包括醫(yī)藥、化工、軍事、食品等。進(jìn)入新世紀(jì)后, 廣泛應(yīng)用于前沿學(xué)科, 如生物基因工程、新能源等, 隨著計算機軟件技術(shù)的普及, 各種檢測設(shè)備的合作運用, HPLC的運用范圍也得到了拓展, 是當(dāng)前科技發(fā)展不可缺少的重要儀器設(shè)備。高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)并不復(fù)雜, 主要包括檢測器、輸液泵、色譜柱、樣品進(jìn)入口等, 流動相可為單一溶劑, 也可為比例不同的混合溶劑, 流動相通過泵可直接填充至色譜柱并注入樣品溶液, 通過流動相融入到柱內(nèi),在填充劑上分離, 之后各個成分可以先后流入到檢測器內(nèi)并記錄下其色譜圖, 開展定量、定性的分析。以其高效、穩(wěn)定、可靠的特點, 在中藥研究中占有不可替代的地位。本文就近年來HPLC技術(shù)在中藥有效成分測定、中藥指紋圖譜研究、中藥炮制和中藥藥理等方面的應(yīng)用作一簡要介紹。

1 中藥有效成分測定

HPLC在中藥有效成分分析中最常見, 特別是其樣品的純化技術(shù), 如液液、臨界、液固萃取等, 讓其具有高分離效率, HPLC法可以更加精準(zhǔn)的對中藥成分進(jìn)行測定。例如, 2015年版《中國藥典》采用HPLC法, 分析柱為C18, 流動相包括甲醇、水等, 以此來測定骨碎補、丹參、香加皮、護(hù)肝片、小兒消炎栓等有效成分含量［1］。有文獻(xiàn)報道證明HPLC法分離測定中藥中的有效成分, 如生物堿類、甙類、黃酮類等均非常準(zhǔn)確、有效, 例如, 測銀杏葉中黃酮成分可采用高效液相一二極管陣列檢測器分離檢測法［2］, 測定銀杏葉提取物中內(nèi)酯、黃酮含量則可采用高效液相/蒸發(fā)激光散射檢測器［3］。包括紅豆杉中紫杉醇含量、清胃片中黃芩苷的含量等［4］。通過實驗證明均取得了令人滿意的結(jié)果, 有著極好的操作性［5］,并且還有部分已錄入到了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)［6］。

2 中藥指紋圖譜研究

正相HPLC法、反相HPLC技術(shù)均已達(dá)到一定標(biāo)準(zhǔn), 分離效果好、準(zhǔn)確性高、分析快, 已被運用到中藥材、制劑定量、定性的分析中。當(dāng)前, 檢測中藥指紋圖譜的首選方法主要就是反相HPLC技術(shù)。

中藥HPLC指紋圖譜指中成藥、中藥材在進(jìn)行一定科學(xué)處理后, 采用HPLC分析可以得到提示此藥中共有峰值的圖譜。一般來說指紋圖譜包括兩層內(nèi)容：一是要反映出此藥與其他物質(zhì)間的差別；二是對于中藥材還可反應(yīng)出采收時節(jié)或是生產(chǎn)地不同而有的差異點, 對中成藥而言則可展現(xiàn)同一個產(chǎn)品不同批次的區(qū)別。差異小則代表穩(wěn)定性高。

郭澄等［7］運用指紋圖譜, 對中藥螻蛄品種、混亂品種間、皺瘤海鞘有效部位開展鑒定。有文獻(xiàn)以報告, 參照物-丹皮酚、流動相-甲醇-水, 進(jìn)行連續(xù)梯度洗脫測定10批牡丹皮藥材指紋圖譜。以此構(gòu)建起了規(guī)范化種植藥用牡丹皮的HPLC指紋圖譜, 穩(wěn)定性、精密度都比較高, 也為丹皮藥材的質(zhì)控提供參考。有文獻(xiàn)報告, 利用高效液相/紫外檢測 、高效液相/熒光檢測、高效液相/蒸發(fā)光散射檢測指紋圖譜, 對于制首烏、枳殼超微粉甲醇提取物、七葉皂苷鈉、三七藥開展測定工作。例如, 運用DAD可以得到3D圖譜,可見可適用成分復(fù)雜的, 紫外光區(qū)有吸收的藥物。有學(xué)者則采用3DHPLC指紋圖譜對黃連粉針劑、黃連解毒湯制劑進(jìn)行質(zhì)量控制。并且還有烏拉爾甘草、甘草根莖的乙醇提取物的HPLC指紋圖譜的有關(guān)文獻(xiàn)［8-11］。宋金春等［12］則采用RPHPLC, 分析構(gòu)建了如下藥材HPLC指紋圖譜分析法：川芎、野菊花、山楂等, 此方法可靠性強、重現(xiàn)性好, 可以對這些藥材質(zhì)量進(jìn)行有效控制。

3 中藥炮制研究

有學(xué)者采用高效的液相法對肉豆蔻及炮制品揮發(fā)油中肉豆蔻醚、黃樟醚展開測定, 方法快速、準(zhǔn)確, 也證明了肉豆蔻醚在炮制后會有不同程度的減少, 可降低毒性, 交對炮制機理進(jìn)行了簡單描述［10］。相關(guān)學(xué)者則采用高效液相法, 測定白附生品、不同的炮制品中次烏頭堿含量, 實驗證明了煮后可讓烏頭堿下降, 下降率可達(dá)98%, 而蒸后的下降率更高,達(dá)100%, 這也說明了炮制解毒機理主要是讓中藥材中的毒性成分含量下降, 此測定也為炮制工作打下了扎實的基礎(chǔ)［13］。

4 中藥藥理研究

李艷等［14］實驗表明, 限制大鼠活動空間, 以此導(dǎo)致的反復(fù)心理應(yīng)激大鼠血漿多巴胺(DA)、5-羥色氨(5-HT)、下丘腦DA和5-HT含量明顯降低。而去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(E)含量則相反, 有上升的形式。運用加味四逆散, 可以在一定程度上提升應(yīng)激大鼠下丘腦和血漿中DA、5-HT含量, 與人參總皂苷相比, 起效更多。同時也可減少血漿中NE、E含量, 這也證明了味四逆散能明顯提升應(yīng)激能力, 這機制和升高中樞和血漿中DA及5-HT含量, 降低血漿中NE和E含量有關(guān)。

文愛東等［15］結(jié)果證明, 阿魏酸在脾虛血瘀組大鼠體內(nèi)分布容積明顯降低, 消除速度也明顯降低, 曲線下面積增加,多劑量注射阿魏酸后脾虛血瘀組大鼠血漿和近段空腸組織中胃動素含量顯降, 降結(jié)腸和直腸組織中前列腺素的含量顯著升高。從這里可以看出, 明阿魏酸在正常及血瘀證大鼠體內(nèi)藥動學(xué)中存在著差異性, 阿魏酸治療血瘀證的作用和調(diào)節(jié)胃腸激素平衡有一定的關(guān)系。

5 討論

幾千年過去了, 國藥中藥世世代代傳承下來, 在各種疾病的治療、保健、養(yǎng)生中, 都有非同一般的效果［16,17］。但是,從根本上來說, 中藥成分復(fù)雜、多元, 在一定程度上限制了其在臨床上的發(fā)展, 中藥品種確實是不斷推出新品, 但質(zhì)量卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)未能實現(xiàn)科學(xué)的量化, 所有的問題都要依靠先進(jìn)、靈敏、精密的儀器來逐步解決。而HPLC在中藥有效成分測定、中藥質(zhì)量控制、中藥新劑型研究等方面均有廣泛的運用, 其分離效果好、分析速極快, 同時不用耗費大量的樣品就可以進(jìn)行測定［18-20］。伴隨和質(zhì)譜、質(zhì)譜串聯(lián)等聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展、完善, HPLC一定會在中藥活性成分鑒定、有效成分分析、中藥以及制劑生產(chǎn)質(zhì)量質(zhì)控等方面起到重要的作用, 是未來分離、含量測定等的第一選擇方法。

［1］國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(2015年版).一部. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社, 2015∶254.

［2］田南卉, 張鯤. 高效液相色譜法蒸發(fā)激光散射檢測器測定銀杏葉提取物中內(nèi)酯的含量. 藥物分析雜志, 1997(4)∶282-283.

［3］王喜軍, 孫暉. 茵陳蒿湯的三維HPLC分析. 中成藥, 1993(12)∶33-35.

［4］陶巧鳳, 黃宗玉, 范秀林. 高效液相色譜法測定銀杏葉制劑中黃酮含量. 中成藥, 1993(12)∶14-15.

［5］陶巧鳳.高效液相色譜法測定清胃片中黃苓甙含量.現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 1996, 13(增刊)∶33.

［6］牟德海, 周治發(fā).反相HPLC法分析紅豆杉樹皮和樹葉中紫杉醇及其類似物含量的研究.分析測試學(xué)報, 1997, 16(16)∶8.

［7］郭澄, 魏道智, 鄭漢臣.中藥螻蛄的高效液相指紋圖譜研究.藥學(xué)實踐雜志, 2005, 23(6)∶ 366-369.

［8］謝培山.中藥色譜指紋圖譜.北京∶ 人民衛(wèi)生出版社, 2005∶74.

［9］王璽, 王文宇, 張克榮, 等.中藥HPLC指紋圖譜相似性研究的探討.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報, 2003, 20(5)∶361-362.

［10］葉皓, 沈順, 張祥民.液相指紋圖譜結(jié)合歐氏距離對野菊花質(zhì)量控制的研究.世界科技研究與發(fā)展, 2006, 28(2)∶72.

［11］湯樹良, 楊濱, 黃璐琦, 等.山楂高效液相指紋圖譜研究.中國實驗方劑學(xué)雜志, 2004, 10(4)∶9-13.

［12］宋金春, 胡傳芹, 劉紅, 等.川芎高效液相指紋圖譜的建立.中國藥房, 2005, 16(9)∶716-718.

［13］龍全江, 江葳葳, 熊健, 等.高效液相色譜在中藥研究應(yīng)用中的新進(jìn)展.甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 1999, 16(4)∶44-46.

［14］李艷, 嚴(yán)燦, 史亞飛, 等.反復(fù)心理應(yīng)激大鼠血漿和下丘腦單胺神經(jīng)遞質(zhì)的變化及加味四逆散的影響.中藥藥理與臨床, 2002, 18(1)∶1-3.

［15］文愛東, 黃熙, 任平, 等.阿魏酸在正常和脾虛血淤大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)及對胃腸激素的影響.中國藥學(xué)雜志, 2001, 36(9)∶594.

［16］邵清松, 胡潤淮. 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用. 中醫(yī)藥學(xué)報, 2007, 35(3)∶44-47.

［17］王芳. 高效液相色譜在中藥研究中的應(yīng)用進(jìn)展. 現(xiàn)代中藥研究與實踐, 2002, 16(3)∶44-46.

［18］劉力, 張大方, 李超英, 等. 高效液相色譜法在中藥研究中的應(yīng)用. 長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 1994(1)∶62-63.

［19］吳恒, 陳禮明, 張善堂. 高效液相色譜在中藥研究中的應(yīng)用.安徽醫(yī)藥, 2009, 13(8)∶863-866.

［20］王慧森, 劉明, 李更生. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法在中藥研究中的應(yīng)用. 中醫(yī)研究, 2008, 21(8)∶61-62.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.02.098

2016-12-26］

238000 合肥市食品藥品檢驗中心