牛乳鐵蛋白肽及其衍生肽生物活性與研究進(jìn)展

郭愛(ài)珍，呂自力，鐘浩，胡曼，王亮

（1.江蘇大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013,2.成都中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院成都610041）

牛乳鐵蛋白肽及其衍生肽生物活性與研究進(jìn)展

郭愛(ài)珍1，呂自力2，鐘浩1，胡曼1，王亮1

（1.江蘇大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013,2.成都中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院成都610041）

牛乳鐵蛋白肽（LfcinB）是牛乳鐵蛋白N-端在正常的消化環(huán)境下水解產(chǎn)生的25個(gè)氨基酸殘基的短肽，具有廣譜高效的抗細(xì)菌性，抗病毒，抗腫瘤等多種生物活性。作為一種新型抗菌肽，LfcinB及其衍生肽具有很大的研究?jī)r(jià)值和潛在的應(yīng)用價(jià)值。對(duì)其結(jié)構(gòu)及生物學(xué)活性進(jìn)行介紹，并對(duì)近年來(lái)采用基因工程技術(shù)表達(dá)LfcinB及其衍生肽的方法技術(shù)進(jìn)行了綜述。

牛乳鐵蛋白肽；衍生肽；生物活性；基因工程

0 引 言

乳鐵蛋白是廣泛存在于哺乳動(dòng)物乳腺的天然轉(zhuǎn)鐵糖蛋白，與血漿中鐵離子的傳遞密切相關(guān)。牛乳鐵蛋白（bovine lactoferrin,LfB）是鐵傳遞蛋白家族成員之一，由689個(gè)氨基酸殘基組成，分子量約為80 ku，具有高效抗菌，消炎，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫等生物功能。牛乳鐵蛋白肽（bovine Lactoferricin，LfcinB）最初是由日本學(xué)者Bellamy W[1,2]等人從牛乳鐵蛋白N端17-41處獲得的陽(yáng)離子抗菌肽，分子量3126.4 u，疏水殘基比例48%，電荷數(shù)+8，顯示其抗菌活性是天然LfB的400多倍。LfcinB是一種新型的兩親性陽(yáng)離子抗菌肽，疏水性與正電荷數(shù)是決定其抗菌效果的主要因素[3]。通過(guò)調(diào)整LfcinB正電荷數(shù)以及疏水性比例獲得的牛乳鐵蛋白肽衍生肽LfcinBD越來(lái)越多的運(yùn)用于基因工程技術(shù)中使其高效大量表達(dá)。由于LfcinB及其衍生肽的廣譜抗菌性，抗病毒，抗腫瘤，良好的耐熱性，無(wú)抗原性，對(duì)腸道有益菌無(wú)害等眾多生物學(xué)活性，作為食品保存劑、抗氧化劑、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑、免疫強(qiáng)化劑、免疫調(diào)節(jié)劑等在食品領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用[4]。

1 牛乳鐵蛋白肽及其結(jié)構(gòu)

安美忱等人利用高效液相色譜-基質(zhì)輔助激光解吸電離串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜分離得到高活性的LfcinB，相對(duì)分子質(zhì)量為3124.89，蛋白質(zhì)量濃度為18.20μg/mL[5]。LfcinB含25個(gè)氨基酸殘基：FKCRRWQWRMKKLGAPSITCVRRAF，具有廣譜抗菌、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)等作用。包括2個(gè)色氨酸，5個(gè)精氨酸和3個(gè)賴氨酸等正電荷氨基酸，p I約為11.84。其中在兩個(gè)半胱氨酸殘基處通過(guò)二硫鍵連接成環(huán)狀，如圖1所示。LfcinB在牛乳鐵蛋白分子中呈α螺旋結(jié)構(gòu),當(dāng)解離下來(lái)后α螺旋結(jié)構(gòu)消失轉(zhuǎn)變成以β折疊為主的兩親性結(jié)構(gòu)，利用RCSB Protein Data Bank-RCSB PDB數(shù)據(jù)庫(kù)分析LfcinB結(jié)構(gòu)（圖2）也表明，LfcinB是兩親性分子結(jié)構(gòu)，疏水性和親水性氨基酸分別排列于β折疊片層的兩側(cè)，而這種結(jié)構(gòu)對(duì)于LfcinB發(fā)揮其強(qiáng)大的抗菌功能是至關(guān)重要的[6]。

圖1 LfcinB一級(jí)結(jié)構(gòu)：紅色代表帶正電荷氨基酸

圖2 LfcinB二級(jí)結(jié)構(gòu)

2 牛乳鐵蛋白肽及其衍生肽的生物學(xué)活性

作為一種有生物活性的短抗菌肽，LfcinB具有普通抗生素所不具有的一些優(yōu)點(diǎn)，例如廣譜抗菌性能和不易產(chǎn)生耐藥性問(wèn)題等特點(diǎn)。而且，它在抑制病毒、真菌和腫瘤細(xì)胞的方面也有一定的生物活性，同時(shí)，對(duì)真核細(xì)胞幾乎是無(wú)毒性的。

2.1 廣譜抗菌性

LfcinB除不能參與鐵代謝外，具備完整乳鐵蛋白的所有生物學(xué)活性。有研究表明，雖然其抗病毒能力不如完整乳鐵蛋白，但其抗菌性卻比完整乳鐵蛋白強(qiáng)400多倍[1,7]。LfcinB抗菌活性主要表現(xiàn)為廣譜的抑菌和殺菌作用。正電荷氨基酸是抗菌肽與負(fù)電荷的細(xì)菌細(xì)胞壁及細(xì)胞質(zhì)膜直接作用發(fā)揮抗菌效果所必需的，而與脂雙層親脂區(qū)域相互作用需要疏水氨基酸殘基的參與，以產(chǎn)生孔洞或其它的去穩(wěn)結(jié)構(gòu)導(dǎo)致膜的去極化或局部瓦解甚至細(xì)菌死亡。

Bellamy等[8]研究了LfcinB的抗菌譜和抗菌效果，所選擇包括G+和G-、桿菌和球菌、專性需氧菌，兼性厭氧菌和專性厭氧菌，如大腸桿菌（Escherichiacoli）、腸炎沙門氏菌（Salmonella enteritidis）、奇異變形桿菌（Proteus mirabilis）、腸炎沙門氏菌（Salmonella enteritidis）、肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、突變鏈球菌（Streptococcus mutans）、白喉棒狀桿菌（Corynebacterium diphtheriae）、雙歧桿菌（Bifidobacterium）等28種菌株。結(jié)果如表1所示。

由表1可以看出，除對(duì)熒光假單胞菌和糞腸道球菌沒(méi)有抑菌作用外，對(duì)其他生長(zhǎng)的檢測(cè)菌株均有不同程度的抑制作用，而且抑菌效果與培養(yǎng)基和菌株有關(guān)，其有效抑菌質(zhì)量濃度范圍在0.6～45μg/mL之間，且G+對(duì)LfcinB比G—更為敏感。

表1 牛乳鐵蛋白肽主要抗菌譜

LfcinB除了對(duì)大多數(shù)細(xì)菌有抑殺作用外，還對(duì)某些真菌有抑制作用[9,10]，如白色念珠菌等，對(duì)白色念珠菌JCM-2900、白色念珠菌JCM-1542T的最小抑菌濃度（MIC）均為18μg/mL。

2.2 抗病毒生物活性

較完整的乳鐵蛋白來(lái)說(shuō)，LfcinB的抗細(xì)菌性和抗真菌性高得多，但LfcinB在體外的抗病毒活性卻較乳鐵蛋白低，大概是完整乳鐵蛋白的1/7。由于分子環(huán)狀結(jié)構(gòu)對(duì)Lfcin抗病毒活性十分重要，而線性化的LfcinB和LfcinH則抗病毒活性喪失[11]。具體的LfcinB抗病毒作用機(jī)制還不是很清楚，可能是LfcinB與細(xì)胞表面的病毒受體或共受體相互作用，從而降低病毒的感染率。但病毒感染包括吸附、侵入、脫殼、生物合成、組裝和釋放多個(gè)階段，而最有效的抗病毒藥劑是能夠影響吸附以及核酸復(fù)制階段從而發(fā)揮作用。Andersen等[12]研究發(fā)現(xiàn)，LfcinB與阿昔洛韋聯(lián)合使用，能夠增強(qiáng)阿昔洛韋的抗病毒作用。張曉宇等[13]用pljm 1-LfcinB載體、△8.91載體、pvsvg載體三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞293T細(xì)胞，包裝產(chǎn)生重組慢病毒載體，得到懸液滴度為2×108TU/mL的濃縮病毒，Western blot檢測(cè)到目的肽的成功表達(dá)，為進(jìn)一步研究LfcinB在抗癌細(xì)胞作用機(jī)制和基因治療奠定了基礎(chǔ)。多個(gè)研究均表明，LfcinB具有一定的抗病毒功能，具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的探討。

2.3 抗腫瘤生物活性

關(guān)于LfcinB抗腫瘤作用的研究主要都集中于探討其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用機(jī)制[14]，作為一種陽(yáng)離子抗菌肽，其可通過(guò)與腫瘤細(xì)胞暴露出的帶凈負(fù)電荷的磷脂酰絲氨酸PS結(jié)合，以及腫瘤細(xì)胞質(zhì)膜磷脂頭部成分的丟失導(dǎo)致的不對(duì)稱性，擊穿腫瘤細(xì)胞膜，啟動(dòng)細(xì)胞凋亡途徑最終使其凋亡[15]。

王靜等人分析了LfcinB對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖周期、細(xì)胞表面分化抗原表達(dá)水平的作用[16]。用LfcinB處理過(guò)的Jurkat細(xì)胞隨著LfcinB濃度增加，處于G 1/G 0期的Iurkat細(xì)胞百分率明顯上升，S期的細(xì)胞百分率明顯下降，細(xì)胞表面分化抗原CD llb表達(dá)水平顯著升高。研究結(jié)果表明，LfcinB能夠通過(guò)細(xì)胞周期阻滯Jurkat細(xì)胞增殖，進(jìn)而誘導(dǎo)其分化。該研究為L(zhǎng)fcinB抗白血病的研究提供了理論基礎(chǔ)。石皖榮等[17]人研究了牛乳鐵蛋白抗菌肽(LfcinB)抗人肺癌細(xì)胞功能及其作用機(jī)制，他們采用MTT法檢測(cè)LfcinB對(duì)人肺腺癌A 549細(xì)胞增殖的影響作用，通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期和凋亡率。結(jié)果表明，LfcinB能顯著抑制人肺腺癌A549細(xì)胞增殖，使細(xì)胞阻滯于S期，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。其中，當(dāng)LfcinB質(zhì)量濃度為10-2g/L時(shí)抑制率最高。Shusheng Wang[18]等人的研究發(fā)現(xiàn)LfcinB能夠在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平抑制肺癌H 460細(xì)胞VEGF（血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子）及凋亡抑制基因的表達(dá)，并在小鼠體內(nèi)成功抑制H460腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)；利用雙變量流式細(xì)胞儀通過(guò)Annexin V/PI雙染色法得到的散點(diǎn)圖表明LfcinB能夠有效的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，當(dāng)LfcinB質(zhì)量濃度為80μg/mL時(shí)，H460細(xì)胞凋亡率約達(dá)71.7%。結(jié)果表明LfcinB有可能是治療肺癌的潛在藥物。類似地，minjia Sheng[19]等研究了LfcinB9（WQWRMKKLG）誘導(dǎo)人卵巢癌SK-OV-3細(xì)胞凋亡的機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn)LfcinB9成功的抑制了小鼠體內(nèi)SK-OV-3細(xì)胞的增殖，并得出LfcinB9通過(guò)上調(diào)活性氧成分以及在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上激活半胱氨酸蛋白酶-3，半胱氨酸蛋白酶-9的表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

綜上所述，一方面，牛乳鐵蛋白肽LfcinB的高效廣譜抗菌性，抗腫瘤以及免疫調(diào)節(jié)等功能使得其在食品添加劑領(lǐng)域以及嬰幼兒配方奶粉的功能性因子方面有很大的應(yīng)用價(jià)值；另一方面，近年來(lái)全球關(guān)于抗生素耐藥性的威脅已經(jīng)亟需控制，找到新的抗菌性藥物已經(jīng)迫在眉睫[20]，LfcinB則是極具潛力的無(wú)耐藥性威脅的新型抗生素。因此，LfcinB及其衍生肽在食品，藥品，化妝品，動(dòng)物飼料等諸多領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景[21]。

3 牛乳鐵蛋白肽及其衍生肽基因工程表達(dá)研究進(jìn)展

由于天然分離LfcinB產(chǎn)量低，工藝復(fù)雜，費(fèi)用較高，人工合成LfcinB及其衍生物成本更高，無(wú)法大規(guī)模生產(chǎn)，成為L(zhǎng)fcinB廣泛應(yīng)用的制約因素。因此，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將LfcinB及其衍生肽轉(zhuǎn)入其他生物表達(dá)，是解決生產(chǎn)生活中LfcinB來(lái)源不足最具潛力的途徑。目前表達(dá)LfcinB或LfcinB衍生肽應(yīng)用最多的表達(dá)系統(tǒng)包括兩大類，分別是大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)和畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)。對(duì)兩大系統(tǒng)以及國(guó)內(nèi)外學(xué)者利用兩大系統(tǒng)表達(dá)LfcinB及衍生肽進(jìn)行介紹。

3.1 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)

大腸桿菌作為表達(dá)外源基因受體菌，有著許多優(yōu)點(diǎn)：大腸桿菌培養(yǎng)簡(jiǎn)單，繁殖迅速，遺傳穩(wěn)定，可利用大量的商業(yè)化表達(dá)載體，操作方便。而且對(duì)其在遺傳學(xué)，生物化學(xué)和生理學(xué)方面都有了較為充分的認(rèn)識(shí)，全基因組測(cè)序，共有4405個(gè)開(kāi)放型閱讀框架，被美國(guó)FDA批準(zhǔn)為安全的基因工程受體生物。因此已廣泛用于外源蛋白的生產(chǎn)，且蛋白表達(dá)量較高。

而利用大腸桿菌構(gòu)建重組牛乳鐵蛋白或LfcinB的表達(dá)系統(tǒng)已有研究，Isui和Jose等[22]人對(duì)比了人乳鐵蛋白和牛乳蛋白的三維結(jié)構(gòu)的差別，并成功克隆了牛乳鐵蛋白的cDNA基因，與硫氧還蛋白組成融合蛋白，構(gòu)建pET 32-bLf重組表達(dá)載體，轉(zhuǎn)入E.coliBL21 (DE3)進(jìn)行表達(dá)，經(jīng)過(guò)鎳柱分離純化后，獲得的重組牛乳鐵蛋白的產(chǎn)量為15.3 mg/L，純度為90.3%。由于LfcinB抗菌效果大大強(qiáng)于牛乳鐵蛋白，因此更不乏大腸桿菌表達(dá)LfcinB的研究。例如，為了能夠獲得成本低的LfcinB，姚海燕等[23]利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)克隆表達(dá)牛乳鐵蛋白十肽及其突變體，為基因工程抗真菌肽的制備奠定了基礎(chǔ)。Z i-gang Tian[24]等人設(shè)計(jì)合成LfcinB15-W 4，10衍生肽多聚體序列，插入表達(dá)載體pET32a，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，其中LfcinB15-W 4，10蛋白表達(dá)量最高，高于10 mg/L，回收純度在99%以上。Xingjun Feng[25]等利用大腸桿菌表達(dá)融合了谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶GST標(biāo)簽的LfcinB-W 10，表達(dá)量為20 mg/L，純度為90%。分離純化后的LfcinB-W 10產(chǎn)量達(dá)300μg/L，且對(duì)金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌活性。他們還合成雜合的牛乳鐵蛋白肽-天蠶素A，即（LF15-CA 8）n（n=1-6）的多聚體，構(gòu)建pGEX-4T-LCn(n=1–6)載體，轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21 (DE3)表達(dá)。IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，獲得含有? GST-LF15-CA8和GST-(LF15-CA8)2的包涵體，純化后獲得10.0 mg/L，純度高于97%。LF15-CA 8對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌（金葡菌）的抗性高于LfcinB以及CA-8，并且在有效抗菌濃度范圍內(nèi)對(duì)人紅細(xì)胞沒(méi)有顯示出明顯的溶血活性[26]。

雖然大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)是目前掌握最為成熟的表達(dá)系統(tǒng)，能夠在較短時(shí)間內(nèi)獲得基因表達(dá)產(chǎn)物，且所需成本相對(duì)較低。但是大腸桿菌缺乏對(duì)真核生物蛋白質(zhì)的復(fù)性及修飾加工系統(tǒng)，例如，在原核表達(dá)系統(tǒng)中抗菌肽的二硫鍵無(wú)法正確形成，影響了蛋白的正確折疊使得大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)常常無(wú)法獲得有活性的目的產(chǎn)物；抗菌肽無(wú)法得到酰胺化修飾，從而降低產(chǎn)物活性[27]。另外，內(nèi)源性的蛋白酶降解空間構(gòu)象異常的外源蛋白，加上細(xì)胞周質(zhì)內(nèi)含有種類繁多的內(nèi)毒素，均會(huì)對(duì)目的蛋白的表達(dá)產(chǎn)生不利影響。

4.2 巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)

巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)是20世紀(jì)80年代初期發(fā)展起來(lái)的一種新型的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)，能高效表達(dá)重組蛋白。作為真核生物，畢赤酵母具有高等真核表達(dá)系統(tǒng)的許多優(yōu)點(diǎn)，如蛋白加工、折疊及翻譯后修飾等特點(diǎn)[27]。它比桿狀病毒或哺乳動(dòng)物組織培養(yǎng)等其他真核表達(dá)系統(tǒng)更快捷、簡(jiǎn)單、廉價(jià)，且表達(dá)水平更高，已越來(lái)越廣泛的應(yīng)用于DNA重組技術(shù)中。

畢赤酵母是甲醇營(yíng)養(yǎng)型酵母，可以利用甲醇作為唯一碳源。圖1顯示了甲醇代謝途徑[28]，最初的甲醇代謝在專門微體膜，過(guò)氧化物酶體內(nèi)進(jìn)行，隨后的代謝步驟是在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行的。中間產(chǎn)物甲醛是在畢赤酵母甲醇和甲胺通路共有的。甲醛在AOX 1通路中是由酒精氧化酶(AOX)與過(guò)氧化氫(H2O2)作用產(chǎn)生的。在甲胺通路中是由胺氧化酶(AmOX)與H2O2和NH3的作用產(chǎn)生的。

圖3 甲醇代謝途徑

畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)具有一系列優(yōu)點(diǎn)：首先，醇氧化酶（A1coholoxidase，AOXⅠ）基因的強(qiáng)啟動(dòng)子特別適合于外源基因的調(diào)控表達(dá)；其次，所應(yīng)用的表達(dá)載體為整合型穿梭質(zhì)粒，外源基因可以在大腸桿菌中進(jìn)行擴(kuò)增，之后通過(guò)質(zhì)粒整合到畢赤酵母基因組，不易丟失，能夠穩(wěn)定表達(dá)；最后，畢赤酵母自身分泌到培養(yǎng)基中的蛋白較少，簡(jiǎn)化了后期蛋白質(zhì)的分離純化操作[29]。下表列舉了用巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的外源蛋白產(chǎn)品[28]。

表2 巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的外源蛋白產(chǎn)品

（續(xù)表2）

眾多研究表明，在以畢赤酵母為宿主菌的抗菌肽外源表達(dá)中，多數(shù)研究都實(shí)現(xiàn)了目的蛋白的生產(chǎn)且產(chǎn)物對(duì)工程菌沒(méi)有明顯的抑制作用，且可以得到有生物活性的目標(biāo)蛋白。然而由于畢赤酵母自身蛋白酶的降解作用以及所表達(dá)目標(biāo)蛋白的不穩(wěn)定性等因素，制約著畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的應(yīng)用。為了提高表達(dá)水平，研究學(xué)者采用了各種不同的表達(dá)策略，如融合表達(dá)、改造后表達(dá)等，都有一定的預(yù)期結(jié)果。已有利用巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)LF或LFcin的研究。Choi等[33]用畢赤酵母表達(dá)人乳鐵蛋白來(lái)評(píng)估N末端多聚糖結(jié)構(gòu)對(duì)免疫反應(yīng)的影響。Sue-Hong Wang[34]等人利用畢赤酵母表達(dá)重組豬乳鐵蛋白，獲得約12 mg/L的表達(dá)量。Chen[35]等構(gòu)建四種重組山羊乳鐵蛋白肽，GLFcin，GLFcin-(H is)6-Tag，GLFcin II和GLFcin II-(H is)6-Tag，克隆到畢赤酵母表達(dá)載體pPICZαC上，轉(zhuǎn)化畢赤酵母SM D 1168H，這四種肽均獲得表達(dá)。用CM-Sepharose（不含H is-tg），H isT rap（含H is-tg）以及Sephadex G-25 chrom atographies分離純化后可獲得0.15 mg/mL的重組蛋白，對(duì)大腸桿菌BCRC 11549、銅綠假單胞菌BCRC 12450、蠟狀芽孢桿菌BCRC 10603、金黃色葡萄球菌BCRC 25923、痤瘡丙酸桿菌BCRC 10723以及產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌? BCRC 14845均有較高的抑菌活性，最小抑菌濃度從4.07到16.00 mg/mL不等。林松濤[36]等成功克隆了牛乳鐵蛋白基因的N-lobe的堿基序列，并成功構(gòu)建了酵母表達(dá)載體，為下一步轉(zhuǎn)化進(jìn)行酵母表達(dá)奠定了基礎(chǔ)。易俊波等人[37]將LfcinB基因片段克隆到分泌型表達(dá)載體pPIC 9K中，得到重組質(zhì)粒，線性化電轉(zhuǎn)畢赤酵母SM D 1168。通過(guò)遺傳霉素G 418篩選獲得多拷貝陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子，經(jīng)甲醇誘導(dǎo)后，LfcinB在酵母中獲得了表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物具有較強(qiáng)的殺菌作用。ChahardooliM[38]等構(gòu)建pH IL-LFcinC表達(dá)載體，利用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)重組亞洲駱駝乳鐵蛋白肽，結(jié)果顯示對(duì)大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，枯草芽孢桿菌，綠膿桿菌，白色念珠菌均有顯著的抑菌活性。

5 展 望

而LfcinB作為一種新型的抗菌肽，于食品行業(yè)，LfcinB是天然的抑菌和抗氧化成分，可作為嬰幼兒奶粉添加劑，亦可作為調(diào)節(jié)免疫功能因子，添加到食品保健品中；于醫(yī)藥行業(yè)，LfcinB可治療疾病的輔助藥物，發(fā)揮其抗病毒抗腫瘤活性；此外，在生化研究方面，動(dòng)物飼料行業(yè)，化妝品領(lǐng)域等也有著廣闊的應(yīng)用價(jià)值。利用基因工程技術(shù)手段表達(dá)LfcinB及其衍生肽業(yè)已成為趨勢(shì)，而如何使LfcinB及其衍生肽高效表達(dá)成為研究重點(diǎn)。本研究擬通過(guò)分析LfcinB空間結(jié)構(gòu)與生物活性的關(guān)系，優(yōu)化設(shè)計(jì)LfcinB基因獲得LfcinB衍生肽，利用真核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)活性分析，，并對(duì)培養(yǎng)溫度，甲醇濃度，培養(yǎng)時(shí)間等發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化使其能夠高效表達(dá)，為提高LfcinB衍生肽的外源表達(dá)量作出有益的探索。

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Biological activity and research progress of Bovine Lactoferricin and derived pep tide

GUO Ai-zhen1,LV Zi-li2,ZHONG Hao1,HU Man1,WANG Liang1

(1.School of Food and Biological Engineering,Jiangsu University,Zhen jiang 212013,China)
(2.The Second Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610041,china)

Abstrcat:Bovine Lactoferricin(LfcinB)is a short peptide containing 25 amino acid residues and under normal digestive environment it can be released from the N-terminal of Bovine Lactoferrin(LfB).It has many probiotic features,such as broad-spectrum antibacterial,antiviral, antitumor and other biological activities.As a new antibacterial peptide,has a great deal of research value and potential application value.The structure and biological activity of LfcinB and its derived peptides are Introduced,and the expression methods of Lfcin B and its derived peptides using genetic engineering technology in recent years are reviewed.

Bovine Lactoferricin;derived peptides;biological activities;genetic engineering

TS252.1

B

1001-2230（2016）05-0022-06

2015-09-11

四川省科研院所科技成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目（15010116），江蘇大學(xué)高級(jí)專業(yè)人才科研啟動(dòng)資金（12JDG069）。

郭愛(ài)珍（1990-），女，碩士，主要從事牛乳鐵蛋白肽的研究。

王亮