不同炮制方法對(duì)五味子中木脂素類成分含量的影響分析

李海濤

（長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，吉林 長春130021）

五味子是常用中藥材，具有益氣生津、收斂固澀、補(bǔ)腎寧心的功效[1]。五味子中木脂素類主要包括醇甲、醇乙、甲素、乙素等，其成分含量是發(fā)揮藥效的重要決定因素[2]。為觀察探究不同炮制方法對(duì)五味子中木脂素類成分含量的影響，特對(duì)經(jīng)過上述方法炮制的7種五味子樣品分別采用高效液相色譜法對(duì)木脂素類成分含量及溶出率進(jìn)行檢測(cè)，并分析不同炮制方法對(duì)其成分的影響，旨在為五味子炮制及應(yīng)用提供參考。

1 儀器與試劑

1.1 儀器：高效液相色譜儀 (Agilent 1200型) ；色譜工作站 (N22000)；電子分析天平（梅特勒AG285型）；超聲清洗器（大連依利特科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試劑：試驗(yàn)用五味子均為成熟野生鮮品，采自黑龍江雞西，真空包裝；對(duì)照品五味子醇甲（批號(hào)：110857-201506）、醇乙（批號(hào)：110858-201509）、甲素（批號(hào)：110764-201507）、乙素（批號(hào)：110765-201509）均購自藥品檢驗(yàn)所。以甲醇為色譜純、實(shí)驗(yàn)用水均為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 樣品加工及炮制方法。加工方法：將實(shí)驗(yàn)樣品在室內(nèi)通風(fēng)處鋪勻，注意經(jīng)常翻動(dòng)，溫度保持20～25 ℃，濕度保持30%～50%，待20 d后開始炮制。

炮制方法：①生五味子：無需特殊處理；②醋蒸：按照1∶5比例將米醋與五味子混合均勻后放置于保鮮盒中，密閉并隔水加熱，待樣品變?yōu)楹谏笸Ｖ辜訜?，干燥后稱重；③酒蒸：按照1∶5比例將黃酒與五味子混合均勻后加工，方法同上；④蜜蒸：按照1∶5比例將煉蜜與五味子混合均勻后加工，方法同上；⑤酒浸：按照1∶2比例將黃酒與五味子混合均勻后浸泡24 h，置于50 ℃干燥箱中干燥至恒重；⑥清炒：取生五味子用文火干炒至表面變?yōu)樽虾稚?，并置?0 ℃干燥箱中干燥至恒重；⑦蜜炒：按照1∶10比例將煉蜜與五味子混合均勻后用文火干炒至表面變?yōu)樽虾稚?，并置?0 ℃干燥箱中干燥至恒重。

1.3.2 供試品與對(duì)照品溶液制備。供試品溶液制備：取7種五味子炮制品適量，粉碎后過60目篩，然后將其置于105 ℃干燥箱中進(jìn)行干燥處理，各精密稱取1.00 g粉末分別置于容量瓶（25 mL）中，加入適量甲醇后超聲提取30 min，并用甲醇定容，采用濾膜（0.45 μm）過濾即可。對(duì)照品溶液制備：分別取五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素置于容量瓶（25 mL）中，加入甲醇定容，溶液濃度分別為0.460、0.218、0.397、0.550 g/L，采用濾膜（0.45 μm）過濾后各取1 mL置于容量瓶（10 mL）中并用甲醇定容，得對(duì)照品溶液。

1.3.3 色譜條件：色譜柱為C18柱4.6×150 mm2，5 μm；流動(dòng)相為1∶1∶1的甲醇：乙腈：重蒸餾水；流速設(shè)置為1 mL/min；檢測(cè)波長為250 nm；柱溫為25 ℃；進(jìn)樣量為10 μL。分別去對(duì)照品和供試品溶液進(jìn)樣，并記錄峰面積。取得較好的分離后確定對(duì)樣品測(cè)定無不良干擾。

1.3.4 方法學(xué)試驗(yàn)。線性關(guān)系：分別取對(duì)照品溶液制成不同溶質(zhì)的系列質(zhì)量濃度的溶液，所用方法為倍比稀釋法，依據(jù)上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，以對(duì)照品質(zhì)量溶度C為橫坐標(biāo)，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，行線性回歸分析，所得方程和線性系數(shù)分別為Y=26078C，r=0.9999；Y=31507C，r=0.9999；Y=36075C，r=0.9999；Y=25314C，r=0.9999，可知在0.01～0.50 g/L濃度范圍內(nèi)質(zhì)量濃度均與峰面積存在良好的線性關(guān)系。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：按照上述色譜條件取對(duì)照品混合溶液分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h進(jìn)樣，測(cè)得峰面積在24 h內(nèi)均無明顯變化，且RSD=1.89%，表明在24 h內(nèi)測(cè)定具有較高的穩(wěn)定性。

精密度試驗(yàn)：按照色譜條件分別將對(duì)照品溶液連續(xù)6次進(jìn)樣，測(cè)得峰面積的RSD分別為0.46%、0.49%、0.47%、0.49%，表明具有良好的精密度。

重復(fù)性試驗(yàn)：取生五味子和清炒五味子供試品溶液分別按照色譜條件進(jìn)樣，測(cè)得峰面積的RSD分別為0.87%、0.83%，證明本實(shí)驗(yàn)具有較強(qiáng)的重復(fù)性。

加樣回收率試驗(yàn)：分別取7種五味子供試品粉末加入對(duì)照品0.3mg制備溶液后按照色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積并采用外標(biāo)法對(duì)回收率進(jìn)行計(jì)算，平均回收率分別為99.26%、99.37%、99.54%、101.21%，且RSD分別為0.95%、0.85%、0.89%、0.92%，表明可采用此種方法檢測(cè)回收率。

1.3.5 樣品木脂素類成分含量測(cè)定：分別取7種五味子炮制品適量，每種炮制品分別精密稱取3份，按照供試品溶液制備方法處理后依據(jù)色譜條件進(jìn)樣，記錄峰值面積，并采用外標(biāo)法利用其測(cè)定五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素，并按照公式[（炮制品木脂素類含量×炮制品質(zhì)量）-（殘?jiān)局仡惡俊翚堅(jiān)|(zhì)量）]/（炮制品木脂素類含量×炮制品質(zhì)量）計(jì)算不同組分的溶出率。

2 結(jié) 果

生五味子、醋蒸、酒蒸、蜜蒸、酒浸、清炒、蜜炒7種方法五味子炮制品中五味子醇甲含量和溶出率分別為0.1326%和60.29%、0.1096%和52.75%、0.1589%和63.74%、0.1198%和56.93%、0.1637%和65.41%、0.0832%和36.51%、0.0729%和29.83%；五味子醇乙含量和溶出率分別為0.5987%和52.96%、0.4257%和40.73%、0.6396%和55.25%、0.3217%和50.62%、0.6689%和58.74%、0.1524%和36.82%、0.2017%和33.21%；五味子甲素含量和溶出率分別為0.2154%和22.86%、0.2031%和11.02%、0.2976%和25.78%、0.1932%和10.26%、0.2764%和24.37%、0.1137%和8.95%、0.1028%和5.73%；五味子乙素含量和溶出率分別為0.7935%和29.38%、0.5241%和9.12%、0.8129%和31.07%、0.7015%和9.85%、0.7935%和29.74%、0.3204%和6.12%、0.2950%和5.09%。酒蒸和酒浸五味子中五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素等木脂素類成分含量和溶出率均最高，其次為生五味子，且炒法五味子供試品中木脂素類成分含量及溶出率均較低。

3 討 論

不同五味子炮制方法可對(duì)其中木脂素類成分含量產(chǎn)生一定影響，進(jìn)而在不同程度上影響藥效的發(fā)揮。關(guān)于五味子炮制方法及工藝介紹在古代中醫(yī)典籍上有詳細(xì)的介紹，現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)家將五味子炮制方法分為生五味子、醋蒸、酒蒸、蜜蒸、酒浸、清炒、蜜炒共7類[3]。因而探究不同炮制方法對(duì)五味子中醇甲、醇乙、甲素、乙素等木脂素類成分含量的影響對(duì)指導(dǎo)制藥和用藥均具有重大作用。

本研究采用高效液相色譜法對(duì)不同炮制方法供試品中五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素等木脂素類成分含量及溶出率進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)酒蒸和酒浸五味子中不同木脂素類成分含量及溶出率均最高，其次為生五味子，說明酒蒸和酒浸炮制的五味子中不同木脂素類成分含量均較高，可充分發(fā)揮功效。既往多項(xiàng)研究證實(shí)[4-6]，酒蒸和酒浸炮制的五味子中具有強(qiáng)壯作用的木脂素類成分含量均明顯高于生五味子和炒制品，與本研究結(jié)果一致，提示應(yīng)當(dāng)采用酒蒸和酒浸法對(duì)生五味子進(jìn)行炮制以增強(qiáng)藥效。分析其中原因?yàn)?，乙醇為黃酒中的主要成分，而多種木脂素類成分均可溶于乙醇，因而用酒蒸和酒浸法炮制五味子能夠?qū)⒏嗟哪局惓煞秩苡谄渲?。綜上，在炮制五味子時(shí)，可考慮采用酒蒸和酒浸法，以充分利用藥材中強(qiáng)壯成分，增強(qiáng)藥效。

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