生長調節劑對油茶離體誘導及增殖的影響

吳茂力；敬袁兵；張愷凱；古 勇

(四川省原子能研究院，四川 成都 610066)

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生長調節劑對油茶離體誘導及增殖的影響

吳茂力；敬袁兵；張愷凱；古 勇

(四川省原子能研究院，四川 成都 610066)

以油茶“渝良油A1”為外植體試驗材料，通過正交試驗研究外源激素對油茶莖段誘導及增殖的影響。結果表明：玉米素可提高油茶誘導率，油茶外植體誘導的最佳培養基是1/2MS+IBA 2.5mg/L+6-BA2.5mg/L+ZT7mg/L+CH 600 mg/L；ABT-6號生根粉可促進油茶增殖培養，油茶增殖培養的最佳培養基是1/2MS+ ABT-6號4mg/L+IBA1mg/L+ KT1mg/L。

油茶；生長調節劑；組織培養；增殖

油茶(Camellia oleifera)為山茶科常綠經濟作物，果實用于產油，其油質媲美橄欖油[1]，為世界四大木本油料作物之一[2]，同時也是我國主要木本食用油料作物，食用價值、藥用價值以及工業價值極高。此外，油茶林還用于防火、保持水土、調節氣候等[3]。 由于油茶極大的綜合利用潛力，對油茶苗木的需求量增加。但油茶屬于異花授粉，有性繁殖后代性狀分離比較明顯[4]，扦插繁育效率低，需時長，操作不便，難以推廣，而組培育苗具有減小個體差異，保持優良母本的性狀的優勢[5]。顏慕勤等研究通過胚狀體誘導形成了再生植株[6]。張智俊等用子葉為試驗材料進行誘導， 結果表明湘林1號用2，4-D與KT誘導效果較好，而湘林4號則以6-BA與IAA誘導效果較好[7]。聞麗等研究表明2，4-D 與6-BA 組合是誘導油茶花藥形成愈傷組織較好激素, 愈傷組織誘導率達42.74%[8]。丁植磊等研究表明2，4-D與NAA是誘導油茶花藥愈傷組織較好的激素配比[9]。目前，利用油茶組培育苗存在的問題是防止培養過程中褐化、基部愈傷組織膨大、提高生根率等問題。目前，國內外油茶組織培養主要通過子葉[10-12]、花藥[8-9]等外植體進行愈傷組織誘導，然后分化形成植株，而通過莖段腋芽出芽誘導還少見報道，為此，以油茶新生芽為外植體，經過研究建立其誘導及增殖體系，為油茶離體繁育技術的建立提供數據基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料為重慶油茶優良家系“渝良油A1”，試驗材料采集于2013年5月。

1.2 外植體誘導

設計L16 (44)正交試驗，采用3-吲哚基丁酸(3-indolebutyric acid，IBA)、6芐基嘌呤(6-Benzylaminopurine，6-BA)、玉米素 (zeatin，ZT) 3種植物激素對油茶愈傷組織進行誘導。油茶新生外植體用濃度為3%洗衣粉水中浸泡30min，然后用清水沖洗，在超凈工作臺上無菌條件下，放入0.1%氯化汞溶液中滅菌20min,再投入70%的酒精中浸泡8s，用無菌水沖洗4～5次后，立即接種于誘導培養基上(蔗糖25 g/L、瓊脂4g/L，PH值為5.7)，每個處理32瓶，每瓶1株，置于溫度為25±2℃的培養室散光培養5d后轉入光照強度為1500～2000lx，光照時間為12h/d的條件下培養。

1.3 增殖培養

設計L9 (33)正交試驗，采用ABT-6生根粉、3-吲哚基丁酸(3-indolebutyric acid，IBA)、激動素(kinetin，KT) 3種植物激素對油茶誘導成形幼芽進行增殖培養。誘導成形幼芽接種于增殖培養基上(蔗糖25 g/L、瓊脂4g/L，PH值為5.7)，每個處理6瓶，每瓶2株，置于溫度為25±2℃的培養室散光培養5d后轉入光照強度為1500～2000lx，光照時間為12h/d的條件下培養。

1.4 數據處理

所有數據均采用Excel 2007和SPSS19.0軟件進行分析，其中包括各種數據統計、統計圖的制定、方差分析、LSD多重比較等。

2 結果與分析

2.1 植物激素對油茶腋芽誘導影響

外植體于誘導培養基，每間隔35d傳代培養，傳3次后萌發新芽，繼代時統計誘導率，表1結果表明油茶誘導率在27%～81.3%之間。ZT對油茶離體繁育影響較大，隨著玉米素濃度增高，油茶誘導率升高，ZT濃度為7mg/L，IBA濃度為2.5 mg/L，6BA濃度為1.5mg/L時，油茶最高誘導率為81.3%。誘導新芽經傳代后生長出2至3片新葉，再經兩次傳代后可產生對生芽(圖1)。

表1 不同植物激素水平對油茶誘導的影響

Table 1 Effect of different plant hormone levels on induction of Camellia Oleifera

圖1 油茶誘導培養Fig1 Camellia Oleifera induce culture

注：1.油茶腋芽誘導出芽；2.油茶對生芽。數學數字代表不同處理。

Note：1. Lateral buds germnated from shoots of Camellia Oleifera.2. Right buds of Camellia Oleifera；Mathematical figures represented difference treatments.

2.2 外源激素對油茶莖段增殖的影響

表2表明ABT-6號生根粉及植物生長素IBA能促進油茶增殖培養，處理3、處理6、處理9油茶平均高度均較高，特別是與處理1、處理4、處理7相比植株明顯拔高、分節。ABT-6號生根粉對油茶增殖培養中產生的基部愈傷組織有抑制作用。

圖2結果表明，1，4，7號處理未添加ABT-6號生根粉，基部均分化愈傷組織，愈傷組織形態大、不規則、褐色，植株矮小，分節不明顯，葉片下垂，植株無活力。

表2 不同激素水平對油茶繼代苗增殖培養的影響

Table 2 Effect of different plant hormone levels on proliferation of Camellia Oleifera

圖2 植物激素對油茶莖段增殖的影響Fig2 Plant hormone influence shoots buds proliferation

注：數學數字代表不同處理

Note：Mathematical figures represented difference treatments.

3 討論

研究以油茶春季新出幼芽為外植體進行誘導，ZT濃度為7mg/L，IBA濃度為2.5mg/L，6-BA濃度為2.5 mg/L時(處理4)，誘導率達81.3%，高于吳正凱等研究莖段誘導53%[13]油茶花藥42.74%愈傷組織誘導率[8]，隨著ZT濃度的升高，外植體誘導率增加，表明ZT具有促進油茶誘導作用。

油茶增殖培養過程中，莖段基部易產生較多愈傷組織是油茶組織培養瓶頸[14]，研究利用ABT-6生根粉作為外源調節劑，增加油茶增殖繁育高度，減小基部愈傷組織，促進了油茶離體增殖繁育。根據結果，油茶增殖培養基以ABT-6濃度為4mg/L，IBA濃度為4mg/L，KT濃度為1 mg/L為最佳(處理3)。

[1] 黎先勝.我國油茶資源的開發利用研究[J].湖南科技學院學報，2005，26(11)：127-129.

[2] 莊瑞林.中國油茶[M].北京：中國林業出版社，1988：1-5.

[3] 王清連.植物組織培養[M].北京：中國農業出版社，2000.

[4] 李寶銀，周俊新，李凌，等.烏桕與竹柏等樹種混交效果評價[J].華東森林經理，2009，23( 1)：13-16.

[5] 林少韓.中國油茶生產現狀及發展策略[J].世界林業研究，1989，2( 4)：70-76.

[6] 顏慕勤.油茶體細胞胚狀體的發生[J]. 實驗生物學報，1980，3(3)：343-347.

[7] 畢方鋮，譚曉風，張智俊，等.油茶離體培養誘導再生植株的研究[J].經濟林研究， 2004，22(2)：5-9.

[8] 聞麗，張日清，李典軍.不同激素配比對油茶花藥愈傷組織形成的影響[J].經濟林研究，2005，23(4)：21-23.

[9] 丁植磊，張日清，劉友全，等.油茶12個物種花藥愈傷組織誘導及繼代培養[J].經濟林研究， 2007， 25 (001)：20-24.

[10] 王瑞， 陳永忠，王湘南，等.油茶優良無性系葉片愈傷組織誘導研究[J].經濟林研究，2009， 27 (002)：35-39.

[11] 張智俊， 金曉玲, 羅淑萍, 等.油茶子葉體細胞胚形成的細胞學觀察[J].植物生理學通訊，2004，40 (005): 570-572.

[12] 張智俊，羅淑萍，李亞玲，等.油茶優良無性系子葉體細胞胚植株再生[J].植物學通報, 2005， 22 (B08)：43- 49.

[13] 吳正凱，鄭曉峰.油茶組織培養技術研究[J].內蒙古農業科技，2008( 1)：63-64.

[14] 王瑞，陳永忠.油茶組織培養與植株再生研究進展[J].湖南林業科技，2006，33 (005)：63-66.

Effect of Plant Growth Regulator on Induction and Proliferation ofCamelliaOleiferain vitro

WU Mao-li;JING Yuan-bing;ZHANG Kai-kai; GU Yong

(SichuanInstituteofAtomicEnergy,Chengdu,Sichuan610066)

To investigate the effect of different growth regulator on Camellia Oleifera induction and shoots proliferation. “Yuliang YouA1”new buds were used as materials. The optimum combination of plant growth regulators in 1/2MS culture medium for plant regeneration was established by orthogonal test. The results revealed zeatin promoted buds induction ratio, the most effective medium was 1/2MS+2.5mg/L-1 IBA+2.5mg/L-16-BA+7 mg/L-1ZT+600 mg/L-1 CH. ABT-6 rooting powder had effective on shoots proliferation, the most effective medium was 1/2MS+4mg/L-1 ABT-6+1mg/L-1IBA+1 mg/L-1KT.

Camellia Oleifera; growth regulator; tissue culture; proliferation

2016-09-02

四川省科技支撐計劃項目(2014SZ0132)

吳茂力(1977-)，男，副研究員，主要從事水稻育種與耕作研究。