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七花顆粒對(duì)2型糖尿病大鼠病理組織改變的影響

2017-01-19 13:09:23孔春芹付婷婷陳普張超
關(guān)鍵詞:糖尿病

孔春芹+付婷婷+陳普+張超

【摘 要】 目的:觀察七花顆粒對(duì)2型糖尿病大鼠模型癥狀及病理組織學(xué)改變的影響。方法:通過高脂飼料+STZ誘導(dǎo)2型糖尿病大鼠模型,觀察在七花顆粒干預(yù)下大鼠糖尿病癥狀及病理組織學(xué)的改變。結(jié)果:七花顆粒可以有效的改善糖尿病大鼠模型的病理組織學(xué)。結(jié)論:七花顆粒對(duì)于糖尿病大鼠病理組織學(xué)的改變有延緩和治療作用,對(duì)于恢復(fù)功能和阻礙病情發(fā)展效果明顯。

【關(guān)鍵詞】 七花顆粒;糖尿病;病理組織學(xué)

【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517(2016)24-0037-06

Abstract:Objective To observe the histopathological changes on biochemical indices of each group in the rats.Methods Experimental group fed with high fat feed besides streptozotocin injected to induce T2DM rat model,to observe the histopathological changes.Results The QiHua Granule cansignificantly changethe histopathological;Conclusions The QiHua Granule for pathological changes of diabetic rats histology and treatment can delay,impede the restoration of function and progression of the disease effect significantly.

Keywords:QiHua Granule;Diabetic;The Histopathological

云南民族醫(yī)藥資源極為豐富,從民族藥中尋找新藥在現(xiàn)代醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展中占有十分重要的地位。七花顆粒作為哈尼族驗(yàn)方,有長(zhǎng)期的臨床用藥基礎(chǔ),療效肯定。筆者通過復(fù)制2型糖尿病(TyPe 2 Diabetes Mellitus,T2DM)大鼠模型,分析七花顆粒對(duì)T2DM大鼠糖尿病癥狀和肝腎胰組織病理改變的影響,為明確七花顆粒的降血糖機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與分析

1.1 材料 動(dòng)物清潔級(jí)Wistar雄性的大鼠共48只,體重(220±20)g,由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所供給,許可證號(hào)碼:SCXK(川)2013-24。藥物七花顆粒(該方為保密處方,原藥材由云南綠生藥業(yè)有限公司提供),鹽酸二甲雙胍緩釋片(規(guī)格:0.85g/片×20片,中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn))。試劑鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ,BiosharP);FPG由安穩(wěn)血糖測(cè)試儀測(cè)試(三諾安穩(wěn)血糖測(cè)試條:長(zhǎng)沙三諾生物傳感科技股份有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 T2DM動(dòng)物模型復(fù)制 取48只Wistar雄性大鼠,適應(yīng)喂養(yǎng)1周,隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、七花顆粒低劑量組、七花顆粒中劑量組、七花顆粒高劑量組、陽性對(duì)照組(二甲雙胍),用苦味酸染色法標(biāo)記。空白對(duì)照組用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)固體混合飼料喂養(yǎng),其余各組使用高脂飼料喂養(yǎng)。4周后空白對(duì)照組在腹腔注射0.9%NaCl注射液,其余各組大鼠在腹腔注射30mg/kgSTZ(STZ溶于0.1mol/L、pH:4.4檸檬酸三鈉-檸檬酸緩沖液中),之后每三天1次尾靜脈采血檢測(cè)血糖連續(xù)10d。空腹血糖≥11.1mmol/L且穩(wěn)定時(shí)即T2DM模型復(fù)制成功,選入實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 高脂飼料的配制 基礎(chǔ)飼料67.5%(碳水化合物占53%,脂肪占5%,蛋白質(zhì)占23%),食鹽0.5%,白糖10%,豬油10%,蛋黃粉10%,膽固醇1%,豬膽鹽0.5%,香油0.5%。實(shí)驗(yàn)高脂飼料由成都達(dá)碩生物科技有限公司按照上方配制,高壓滅菌,真空包裝,冷藏保存。

1.2.3 檸檬酸三鈉-檸檬酸緩沖液的配制 0.1mol/L的檸檬酸母液A:2.101g-水合檸檬酸溶于100mL雙蒸水中;0.1mol/L的檸檬酸三鈉母液B:2.941g二水合檸檬酸三鈉溶于100mL雙蒸水中;二者按照A-B(28:22)的比例配制pH為4.4的緩沖液備用。

1.2.4 給藥實(shí)驗(yàn) 共分為六組,每組8只,給藥4周,灌胃給藥容積為1mL/100g。實(shí)驗(yàn)組以七花顆粒(以臨床劑量45g/60kg·d,按照體表面積換算生藥劑量為:0.405g/100g·d)水煎劑,按照高中低劑量組4:2:1的梯度比例灌胃給藥。陽性對(duì)照組以二甲雙胍100mg/kg·d,水溶液灌胃給藥。空白組和模型組不給藥。測(cè)試給藥第2、4周時(shí)大鼠血糖FPG。

1.2.5 臟器固定及染色 切取肝左葉、左腎及全部胰腺組織浸入10%的福爾馬林溶液中固定。48h后的肝腎胰腺,通過洗滌,梯度酒精(濃度:70%、80%、90%、95%×2、100%×2,都為2h)按次序脫水,二甲苯透明,使用石蠟包埋,用輪轉(zhuǎn)切片機(jī)切為薄片(厚度5μm為宜)。裱在無菌的載玻片上面,75℃烤片機(jī)烤片2h;二甲苯脫蠟5min 2次→乙醇洗蠟(100%→95%→90%→80%→70%→水沖洗)各5min。

肝臟和腎臟做HE染色(即蘇木素6min+伊紅3min)→70%~100%乙醇脫水→二甲苯透明→用樹脂膠封片→顯微鏡下觀察組織;胰腺做Mallory 三色法染色(Mallory 三色法染液:苯胺藍(lán)0.5g,桔黃G 2g,磷目酸或磷鎢酸1g,蒸餾水100mL)。在400倍的光學(xué)顯微鏡之下仔細(xì)觀察肝腎和胰腺的組織病理學(xué)改變。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,各組數(shù)據(jù)中的計(jì)量資料用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,行t檢驗(yàn),P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基本情況 實(shí)驗(yàn)開始后,每一天觀察每一組飲食量及飲水量并記錄,每五天稱量全部大鼠體重、測(cè)定FPG。

2.2.1 飲食飲水量的變化 實(shí)驗(yàn)開始后,大鼠T2DM模型誘導(dǎo)過程前期飲水量呈輕度上升趨勢(shì),飲食量略有下降。給予STZ腹腔注射后,飲食量開始下降之后上升并保持平穩(wěn),飲水量極度上升并多尿消瘦。用七花顆粒灌胃之后,實(shí)驗(yàn)組飲食量開始上升并保持平穩(wěn),飲水量下降;模型對(duì)照組飲食飲水量一直呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。

2.2.2 大鼠體重變化 實(shí)驗(yàn)開始后,大鼠T2DM模型誘導(dǎo)過程前期體重呈上升趨勢(shì),給予STZ腹腔注射后,體重開始下降,之后用七花顆粒灌胃,體重開始上升,模型對(duì)照組體重一直呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。

2.2.3 大鼠血糖變化 實(shí)驗(yàn)前期所有大鼠的血糖穩(wěn)定正常無差異,腹腔注射STZ后,血糖到達(dá)一個(gè)峰值。給藥后大鼠血糖開始下降,4周后基本呈現(xiàn)一種穩(wěn)定的狀態(tài)。選取給藥后2周、4周空腹血糖,如表1所示,七花顆粒可以有效地改善糖尿病大鼠模型的空腹血糖,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 肝臟病理改變 由圖1可知,空白對(duì)照組:肝臟被膜結(jié)構(gòu)正常,未見到炎細(xì)胞浸潤(rùn);肝小葉的結(jié)構(gòu)完整,肝細(xì)胞索多數(shù)排列整齊,圍繞著中央靜脈的呈放射狀排列,肝細(xì)胞無明顯增生。模型對(duì)照組:模型組肝細(xì)胞普遍水腫變性,易見肝細(xì)胞呈現(xiàn)為點(diǎn)狀的壞死;肝血竇擴(kuò)張閉塞、扭曲;匯管區(qū)有輕度炎性細(xì)胞的浸潤(rùn),部分肝細(xì)胞脂肪變性。陽性對(duì)照組:肝細(xì)胞廣泛水腫變性,易出現(xiàn)肝細(xì)胞壞死呈點(diǎn)狀;部分肝血竇擴(kuò)張閉塞、扭曲;一些大鼠匯管區(qū)有一定的炎細(xì)胞浸潤(rùn)。

七花顆粒低劑量組:肝細(xì)胞普遍水腫變性,易見肝細(xì)胞壞死呈點(diǎn)狀;肝血竇擴(kuò)張閉塞、扭曲;在匯管區(qū)有一定程度的炎細(xì)胞浸潤(rùn)聚集。七花顆粒中劑量組:肝細(xì)胞普遍水腫變性,部分動(dòng)物見肝細(xì)胞壞死呈點(diǎn)狀;肝血竇擴(kuò)張閉塞、扭曲;匯管區(qū)有輕微的炎細(xì)胞浸潤(rùn)。七花顆粒高劑量組:部分肝細(xì)胞輕微水腫變性,小部分出現(xiàn)肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死;肝血竇擴(kuò)張閉塞、扭曲;一些大鼠主要在匯管區(qū)有微微的炎細(xì)胞浸潤(rùn)。

2.3 腎臟病理改變 由圖2可知,空白對(duì)照組:腎小球主要分布于腎皮質(zhì)部,未見細(xì)胞增生和炎癥細(xì)胞滲出,腎小球毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)清楚,未見纖維增生及變性改變;腎小管數(shù)目較多,細(xì)胞的排列整齊,小管內(nèi)未見出血等病變。模型對(duì)照組:腎小球以及腎間質(zhì)充血,腎小管的上皮細(xì)胞有水腫,部分腎小球增大,系膜基質(zhì)增多,系膜區(qū)增寬,腎小球內(nèi)可以看到粉紅色的沉積物;腎小管上皮細(xì)胞水腫,腎小管里面可以看到粉紅染色蛋白性滲出物,可見腎小管上皮細(xì)胞變性脫落。七花顆粒低劑量組:腎小球及腎間質(zhì)充血,腎小管上皮細(xì)胞水腫,部分腎小球的體積變大,系膜基質(zhì)變多,系膜區(qū)寬度增加,腎小球內(nèi)有粉紅沉積物;腎小管上皮細(xì)胞水腫,腎小管內(nèi)可見粉紅染色蛋白性滲出物,見腎小管上皮細(xì)胞變性脫落。七花顆粒中劑量組:腎小球系膜區(qū)寬度增加,有少量粉紅變性沉積物,主要沿球系膜區(qū)分布;腎小管上皮細(xì)胞水腫。七花顆粒高劑量組:腎小球系膜區(qū)增寬,有少量粉紅變性沉積物,病變發(fā)生于部分腎小球,小球病變成節(jié)段性,主要沿球系膜區(qū)分布;腎小管上皮細(xì)胞水腫伴隨變性脫落。陽性對(duì)照組:腎小球系膜區(qū)寬度增加,部分有少量粉紅變性沉積物,主要沿球系膜區(qū)分布;腎小管上皮細(xì)胞水腫。

2.4 胰腺病理改變 由圖3可知,空白對(duì)照組:胰腺外的分泌部形態(tài)清楚結(jié)構(gòu)清晰;胰島多呈現(xiàn)為圓形或者橢圓形的細(xì)胞團(tuán),分散在胰腺腺泡之間,數(shù)目比較多,胰島的界限清晰,細(xì)胞團(tuán)的大小各異,胰島細(xì)胞的胞質(zhì)豐富,胞漿淡染為淺粉紅色,核大多數(shù)是圓形深染;胰島內(nèi)纖維成分比較少見。模型對(duì)照組:胰腺外的分泌部形態(tài)清楚結(jié)構(gòu)清晰。胰島分布稀疏,充血水腫;可見胰島細(xì)胞發(fā)生核縮小和凝聚、空泡水腫變性等退行性改變,胰島細(xì)胞數(shù)目減少;有細(xì)胞核缺失,細(xì)胞體積縮小,胞漿變淺可見組織殘影,有胰島細(xì)胞壞死,胰島內(nèi)纖維細(xì)胞增生,胰島間質(zhì)有逐漸纖維化的趨勢(shì)。七花顆粒低劑量組:胰腺外的分泌部形態(tài)清楚結(jié)構(gòu)清晰。胰島分布稀疏,有充血和水腫;胰島細(xì)胞發(fā)生核縮小和凝聚、空泡水腫變性等退行性改變,可見胰島細(xì)胞的壞死,胰島內(nèi)的纖維細(xì)胞明顯增生,胰島間質(zhì)漸漸纖維化趨勢(shì)。七花顆粒中劑量組:胰腺外的分泌部形態(tài)清楚結(jié)構(gòu)清晰。可見胰島充血水腫。偶爾出現(xiàn)胰島細(xì)胞的核縮小和凝聚、空泡水腫變性等退行性改變,罕有胰島細(xì)胞壞死,胰島細(xì)胞數(shù)量稍稍降低;個(gè)別大鼠胰島內(nèi)纖維細(xì)胞增生。七花顆粒高劑量組:胰腺外的分泌部形態(tài)清楚結(jié)構(gòu)清晰;可見胰島充血水腫。少見胰島細(xì)胞發(fā)生核縮小和凝聚、空泡水腫變性等退行性改變,胰島細(xì)胞數(shù)量略微變少;胰島內(nèi)少數(shù)纖維細(xì)胞增生。陽性對(duì)照組:胰腺外的分泌部形態(tài)清楚結(jié)構(gòu)清晰;可見胰島充血水腫;可見少量胰島細(xì)胞發(fā)生核縮小和凝聚、空泡水腫變性等退行性改變,胰島細(xì)胞數(shù)量有所降低;胰島內(nèi)偶見纖維細(xì)胞增生。

2.5 七花顆粒對(duì)2型糖尿病大鼠病理學(xué)改變的影響 空白對(duì)照組大鼠的肝臟、腎臟、胰腺基本正常,未見明顯的病理改變。與模型組相比,七花顆粒給藥組,肝臟組織細(xì)胞壞死少,脂肪變性程度輕;腎臟水腫程度低,滲出物少,粉紅沉積物少;胰島細(xì)胞數(shù)量多,核縮小和凝聚、空泡水腫變性程度輕,表明七花顆粒可以有效地改善糖尿病大鼠模型的病理組織學(xué)改變,對(duì)于糖尿病大鼠病理變化有延緩和治療作用,對(duì)于恢復(fù)功能和阻礙病情發(fā)展效果明顯。

3 討論

由于人們的飲食結(jié)構(gòu)改變,糖尿病的發(fā)病比例不斷上升。糖尿病已然成為了第三大威脅人們身體健康的慢性非傳染性疾病[1]。糖尿病疾病過程中所存在的高血糖,可誘發(fā)各組織,尤其是眼、心臟、血管、腎、神經(jīng)的慢性損傷和功能方面的障礙。臨床表現(xiàn)主要是多飲,多尿,多食,消瘦,疲乏無力,肥胖為主。近幾年在中國(guó)糖尿病患病比例快速增長(zhǎng)無可置疑[2]。

鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)通過葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2進(jìn)入胰島β細(xì)胞或烷化DNA,造成細(xì)胞死亡,使胰島素不足引發(fā)高血糖,STZ是目前制備糖尿病動(dòng)物模型使用較多的藥物。本實(shí)驗(yàn)采用wistar雄性大鼠模擬T2DM發(fā)病過程,用高脂飼料喂養(yǎng)合并STZ誘導(dǎo)大鼠T2DM模型。先以高脂高糖飲食,誘發(fā)胰島素抵抗,再配合低劑量的STZ,破壞部分胰島β細(xì)胞的功能,二者相互結(jié)合使用可誘導(dǎo)大鼠血糖升高出現(xiàn)高胰島素血癥、血脂異常等病理生理的改變,與人類T2DM相類似[3]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為人體在代謝碳水化合物的過程中,肝臟吸收門靜脈中的葡萄糖合成肝糖原,抑制糖原分解和糖異生,降低葡萄糖的濃度。血糖升高的主要原因是肝臟的胰島素抵抗[4]。體內(nèi)物質(zhì)代謝重點(diǎn)依靠肝臟,肝臟功能的障礙自然引起代謝紊亂[5]。胰島素分泌不足還有外周組織胰島素抵抗是T2DM臨床特點(diǎn)[6]。胰島素抗性和胰島β細(xì)胞功能受到損害是T2DM的主要病機(jī),T2DM發(fā)病的中心環(huán)節(jié)是胰島β細(xì)胞功能受到損害。腎小球的濾過功能受損是由高血糖引起的,從而使腎臟的超微結(jié)構(gòu)的損傷病情逐步加重[7]。纖溶系統(tǒng)活性降低,微血管病變、糖尿病腎病等也是均是由于T2DM的胰島素抵抗所致[8]。其是一個(gè)惡性循環(huán)的過程。肝腎臟胰腺可以反映糖尿病對(duì)機(jī)體的病理改變。檢驗(yàn)糖尿病治療藥效方面,依靠血糖和肝腎胰腺的病理組織學(xué)改變。為糖尿病及其并發(fā)癥的治療方面提供依據(jù),且對(duì)可臨床用藥有著積極的指導(dǎo)作用。

綜上所述,七花顆粒在對(duì)糖尿病大鼠模型的癥狀改善,降低控制血糖方面效果顯著,對(duì)肝臟、腎臟、胰腺的病理改變有一定的治療和延緩作用。

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(編輯:陶希睿)

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