NF-κB在內(nèi)毒素血癥大鼠肝損傷中的變化及意義

張慕裴凌

NF-κB在內(nèi)毒素血癥大鼠肝損傷中的變化及意義

張慕1，2裴凌1

目的觀察NF-κB在內(nèi)毒素血癥大鼠肝損傷中的變化，分析內(nèi)毒素血癥中NF-κB表達(dá)的意義。方法選取40只健康Wistar大鼠，隨機(jī)分為肝損傷組和對(duì)照組，各20只，肝損傷組大鼠建立內(nèi)毒素血癥肝損傷模型，在建模前后觀察組間NF-κB表達(dá)水平的變化。結(jié)果在造模后3 h時(shí)、6 h、12 h時(shí)，內(nèi)毒素組NF-κB表達(dá)水平[（14．83±1．65）D、（21．35±2．57）D、（31．63±3．57）D]和肝損傷程度[（1．14±0．87）分、（2．06±1．03）分、（3．02±1．35）分]高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0．05。結(jié)論內(nèi)毒素血癥肝損傷大鼠肝組織內(nèi)NF-κB表達(dá)升高，考慮NF-κB可能參與了肝損傷過程。

NF-κB；內(nèi)毒素血癥；肝損傷

內(nèi)毒素血癥能夠通過引發(fā)炎癥反應(yīng)對(duì)于肝臟功能造成損傷[1-3]，而急性肝損傷作為肝炎、肝癌等疾病惡化進(jìn)展的重要因素，積極發(fā)掘肝損傷的病理機(jī)制對(duì)于防治疾病進(jìn)展極為重要。本實(shí)驗(yàn)通過觀察NF-κB活化程度在內(nèi)毒素血癥肝損傷模型中的變化，旨在初步闡明NF-κB在肝損傷中的作用，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 資料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Wistar大鼠40只（中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，遼檢證第SCXK2008 0002號(hào)），體質(zhì)量約為180～230 g，平均（200±19）g，雌雄各20只，適應(yīng)性喂養(yǎng)條件均為37℃、45%濕度、自由進(jìn)食，光暗比1：1。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

脂多糖（美國Sigma公司）；SABC試劑盒以及NF-κB抗體（武漢博士德生物工程公司）；Olympus 圖像分析系統(tǒng)（日本Olympus公司）

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

（1）動(dòng)物分組：依據(jù)數(shù)字隨機(jī)表進(jìn)行分組，每組各20只大鼠，組間大鼠的體質(zhì)量、鼠齡、雌雄比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（2）建模方法：參照相關(guān)文獻(xiàn)[4]利用脂多糖進(jìn)行內(nèi)毒素肝損傷模型建立，注射途徑為經(jīng)股靜脈注射，注射劑量為5 mg/kg。對(duì)照組在同時(shí)間注射等體積無菌氯化鈉溶液（0.9%）。實(shí)驗(yàn)期間所有大鼠均自由攝食，光暗比1：1。

1.4 觀察指標(biāo)

在造模前、造模后3 h、6 h、12 h時(shí)分別處死5只大鼠，無菌獲取肝組織并制成石蠟標(biāo)本切片，部分進(jìn)行免疫組化染色處理，通過顯微鏡觀察肝組織形態(tài)變化，并根據(jù)Camargo肝組織損傷程度評(píng)價(jià)法[5]進(jìn)行肝組織損傷分級(jí)，計(jì)分越高，損傷越重。另一部分制成免疫組化切片，利用Olympus顯微攝像分析系統(tǒng)，以積分光密度法檢測(cè)肝組織內(nèi)NF-κB表達(dá)水平，每次隨機(jī)選取4個(gè)高倍（×400）光鏡視野，取4次均值作為最終結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)通過SPSS.20.0軟件進(jìn)行對(duì)比，計(jì)量資料用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，組間使用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較用LSD-T分析，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在造模前，兩組大鼠的肝組織形態(tài)均正常，未見損傷征象，且兩組大鼠NF-κB的積分光密度值均較低，模型組為（7.24±1.03）D，對(duì)照組為（7.15±1.04）D，組間相比，P＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在造模后3 h時(shí)、6 h、12 h時(shí)，模型組損傷評(píng)分分別為（1.14±0.87）分、（2.06±1.03）分、（3.02±1.35）分，NF-κB積分光密度值分別為（14.83±1.65）D、（21.35±2.57）D、（31.63±3.57）D，對(duì)照組損傷評(píng)分分別為（0.15±0.03）分、（0.14±0.04）分、（0.11±0.03）分，NF-κB積分光密度值分別為（7.26±1.05）D、（7.14±1.06）D、（7.21±1.07）D，組間數(shù)據(jù)相比，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在造模后，模型組肝細(xì)胞出現(xiàn)明顯的腫脹、變性以及炎癥浸潤(rùn)表現(xiàn)，并隨著時(shí)間增加，損傷表現(xiàn)逐漸加重，且肝組織內(nèi)NF-κB表達(dá)量不斷升高，與組內(nèi)造模前相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

肝臟作為重要的解毒場(chǎng)所，肝功能一旦出現(xiàn)損傷，體內(nèi)排毒機(jī)制將受嚴(yán)重影響，其不僅使疾病惡化，且易引發(fā)多器官功能衰竭，從而威脅生命安全。NF-κB作為體內(nèi)關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)因子，其能夠通過結(jié)合靶蛋白干預(yù)特定基因表達(dá)，從而對(duì)細(xì)胞分化生長(zhǎng)、炎癥反應(yīng)和免疫機(jī)制產(chǎn)生重要影響。相關(guān)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)[6-8]，NF-κB對(duì)于肝功能具有重要影響，其在肝炎、肝癌等肝臟疾病發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，在建模之后，模型組肝損傷評(píng)分升高，肝組織NF-κB表達(dá)水平上升，說明內(nèi)毒素血癥能夠?qū)е赂螕p傷，雖然正常肝細(xì)胞內(nèi)能夠檢測(cè)到少量NF-κB表達(dá)，但是當(dāng)肝臟發(fā)生損傷后，肝內(nèi)NF-κ表達(dá)將升高。

綜上所述，內(nèi)毒素血癥能夠?qū)Ω渭?xì)胞造成損傷，內(nèi)毒素血癥肝損傷能夠增加NF-κB表達(dá)，NF-κB可能對(duì)肝損傷機(jī)制有調(diào)控作用。

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Study On the Changes and Its Significance of NF-κB on Liver Injury for the Rats With Endotoxemia

ZHANG Mu1,2PEI Ling11 Department of Anesthesiology, The First Affiliated Hospital of China Medical University, Shenyang Liaoning 110001, China, 2 Department of Anesthesiology, Shenyang Anorectal Hospital, Shenyang Liaoning 110000, China

ObjectiveTo observe the changes of NF-κB on liver injury for the rats with endotoxemia, to analyze and the significance of NF-κB for endotoxemia.Methods40 healthy wistar rats were selected and randomly divided into liver injury group and control group. There were 20 rats in each group. The endotoxemia liver injury model was established in liver injury group. The changes of NF-κB expression level were observed before and after modeling.ResultsAfter modeling for 3 hours, 6 hours,12 hours,NF-κB expressions in endotoxin Group were [(14.83±1.65) D,(21.35±2.57) D,(31.63±3.57) D] and the degrees of liver injury were [(1.14±0.87) points,(2.06±1.03) points,(3.02±1.35) points], they were significantly higher than the control group, the differences were significant between the groups,P＜0.05.ConclusionNF-κB expression is significantly increased in liver tissue of the liver injury rats with endotoxemia,NF-κB may be the factor for liver injury.

NF-κb; endotoxemia; liver injury

R-3

A

1674-9316（2017）01-0143-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．01．092

1 中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院麻醉科，遼寧 沈陽 110001 2 沈陽市肛腸醫(yī)院麻醉科，遼寧 沈陽 110000