肥胖大鼠心外膜脂肪巨噬細胞數量和血清脂肪因子的研究

肥胖大鼠心外膜脂肪巨噬細胞數量和血清脂肪因子的研究

張彩坤 張豪英 邢冬杰

目的探討肥胖大鼠心外膜脂肪（EAT）巨噬細胞（M）數量和血清脂肪因子水平。方法18只SD大鼠隨機分為對照組9只和肥胖組9只，分別飼以基礎飼料和高脂飼料。80天后采血并取EAT。脂肪標本行CD68抗體標記的免疫組化檢測。檢測瘦素、脂聯素和內臟脂肪素。結果肥胖組M數量高于對照組。與對照組相比，肥胖組脂聯素顯著降低，而內臟脂肪素、瘦素顯著升高。肥胖組M數與內臟脂肪素、瘦素呈正相關，與脂聯素呈負相關。結論肥胖大鼠EAT M數增多，并與全身慢性炎癥關系密切。

肥胖；心外膜脂肪；巨噬細胞

心外膜脂肪（epicardial adipose tissue，EAT）作為一種心臟和冠狀動脈周圍的內臟脂肪，近年逐漸受到重視[1]。脂肪組織慢性炎性反應的重要標志是巨噬細胞（macrophage，M）大量浸潤，M在慢性低度炎癥性疾病如動脈粥樣硬化的致炎機制中發揮重要作用[2]。本研究擬探討肥胖大鼠EAT中M和血清脂肪因子水平改變，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 實驗動物

以18只成年雄性SD大鼠為研究對象，隨機分為對照組9只和肥胖組9只，分別飼以基礎飼料和高脂飼料。

1.2 實驗方法

1.2.1 脂肪因子檢測 80天后斷頭處死大鼠，采用ELISA法檢測血清瘦素、脂聯素和內臟脂肪素。

1.2.2 免疫組化染色及M觀察 取EAT，常規石蠟包埋，5 μm厚連續切片。所用抗體為兔抗鼠一抗（CD68抗體）和生物素標記山羊抗兔二抗，常規行免疫組化染色。光鏡400×視野下每張切片隨機選取4個視野，計數M。

1.3 統計學方法

采用SPSS 13.0統計分析。兩獨立樣本間比較用t檢驗。M與脂肪因子行相關分析。以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組間EAT M數量比較

肥胖組M數量為（45.6±22.5）/mm2，高于對照組的（21.8± 11.7）/mm2，差異具有統計學意義（t=6.357，P=0.000）。

2.2 兩組間血清脂肪因子比較

與對照組相比，肥胖組脂聯素顯著降低[（6.21±2.96）μg/mlvs. （8.57±3.43） μg/ml，t=2.204，P=0.040]，而內臟脂肪 素 [（4.66±2.10） ng/mlvs. （3.05±1.48） ng/ml，t=2.497，P=0.031]、瘦素[（9.43±4.47） ng/mlvs. （6.33±3.65） ng/ml，t=2.722，P=0.018]顯著升高。

2.3 肥胖組M數量與脂肪因子相關性分析

肥胖組M數與內臟脂肪素（r=0.203，P=0.034）、瘦素（r=0.258，P=0.015）呈正相關，與脂聯素（r=-0.239，P=0.019）呈負相關。

3 討論

先前關于動脈粥樣硬化的研究多專注于血管壁病變，而探討冠脈周圍脂肪組織對動脈粥樣硬化影響的研究較少。本研究探討了胸腔內重要的內臟脂肪組織EAT M數量，發現肥胖組EAT的M數顯著升高。前面學者[3]探討小鼠附睪脂肪M特點，發現肥胖小鼠M浸潤程度更為明顯，與本研究結果相似。陳新忠等以冠心病患者為研究對象[4]，結果示冠脈外膜有大量M浸潤，在外膜與血管外脂肪交界處可見明顯M聚集帶。從本研究的實驗結果推測，這些M可能來自于EAT，意味著M導致的EAT慢性炎癥參與了冠脈粥樣硬化的發生。

本實驗發現，肥胖組脂聯素水平顯著降低，而內臟脂肪素、瘦素顯著升高，與前面的研究相似[5]。此外，本研究發現，EAT中M數顯著相關于脂肪因子水平，提示M參與了肥胖大鼠的慢性全身炎癥。內脂素主要來源于白色脂肪組織中的M[6]。瘦素是一種促炎因子，而脂聯素為一種抗炎因子，所以M數量與瘦素水平呈正相關，而與脂聯素呈負相關。新近研究證實，炎癥在動脈粥樣硬化發生發展過程中發揮重要作用[7-8]。可以推測，由于EAT與冠狀動脈密切的解剖關系，EAT可通過旁分泌等方式作用于冠狀動脈管壁，參與冠脈粥樣硬化的形成。因此，改善EAT的慢性炎癥是防治冠脈粥樣硬化的一個潛在靶點。

綜上所述，本研究表明，肥胖大鼠EATM數量增多，并且與全身慢性炎癥關系密切。

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Study on Macrophage in Epicardial Adipose Tissue and Serum Fatty Cytokine Level in Obese Rats

ZHAGN Caikun ZHANG Haoying XING Dongjie Department of Western Medicine Education, Shandong College of Traditional Chinese Medicine, Yantai Shandong 264100, China

ObjectiveTo explore the characteristics of macrophage in fi ltration in epicardial adipose tissue(EAT) and serum fatty cytokine level in obese rats.Methods18 SD rats were selected and randomly divided into the control group and the obese group. After 80 days, the control group were fed with basal diet and the obese group were fed with high fat diet. EAT were detected by immunohistochemistry with CD68 antibody. Serum leptin, adiponectin and visfatin were detected.ResultsThe number of macrophage in the obese group were significantly higher than the control group. Thelevel of leptin and visfatin in the obese group were signi fi cantly higher and adiponectin was signi fi cantly lower than the control group. The number of macrophages was negatively correlated with adiponectin and was positively correlated with visfatin and leptin.ConclusionThe number of macrophage in EAT in obese rats are increased, and macrophage is closely associated with chronic systemic in fl ammatory.

obesity; epicardial adipose tissue; macrophage

R589．2

A

1674-9316（2017）09-0130-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．09．075

山東中醫藥高等專科學校西醫教學部，山東 煙臺 264100

張彩坤