中藥指紋圖譜技術(shù)的現(xiàn)代研究進(jìn)展

● 李哲 玄靜 季冬青 馬云 石曉晨 張國青

中藥指紋圖譜技術(shù)的現(xiàn)代研究進(jìn)展

● 李哲 玄靜 季冬青 馬云 石曉晨 張國青

中藥指紋圖譜技術(shù)是運(yùn)用現(xiàn)代分析技術(shù)將中藥樣本的化學(xué)信息以圖形的方式加以描述的一項技術(shù)。近年來，該技術(shù)在辨別中藥的真?zhèn)渭百|(zhì)量方面的應(yīng)用日益廣泛。通過查閱相關(guān)的文獻(xiàn)，本文對中藥指紋圖譜的現(xiàn)代研究狀況及其主要應(yīng)用技術(shù)進(jìn)行闡述。

中藥指紋圖譜；研究現(xiàn)狀；主要技術(shù)

在我國中藥是一筆寶貴的財富，其療效的發(fā)揮與其有效成分的種類和含量密切相關(guān)，要實(shí)現(xiàn)中藥的現(xiàn)代化，必需嚴(yán)格控制其質(zhì)量，保證中藥的安全、穩(wěn)定、有效。中藥指紋圖譜技術(shù)能夠?qū)χ兴幍亩喾N成分進(jìn)行綜合分析，其科學(xué)性，特征性，系統(tǒng)性深受國際認(rèn)可，被看作是中藥質(zhì)量控制的里程碑。目前已對多種中藥進(jìn)行指紋圖譜研究，使其質(zhì)量更加安全可靠。

1 中藥指紋圖譜的現(xiàn)代研究狀況

中藥中含有豐富的化學(xué)成分，是一個多組分的復(fù)雜體系。在中藥的研究過程中其質(zhì)量控制問題一直是個重難點(diǎn)，而中藥指紋圖譜技術(shù)被認(rèn)為是控制中藥品種和質(zhì)量的最直接，最準(zhǔn)確，最有效的手段。

石榮[1]等用大豆異黃酮HPLC指紋圖譜進(jìn)行研究，分別選擇了5個極性不同的具有代表性的樣品，使用不同的儀器進(jìn)行測定，從中得到大豆異黃酮指紋圖譜中的保留時間飄移并完成了其校正工作。梁倩等應(yīng)用氣相色譜技術(shù)為金銀花中的揮發(fā)油成分建立指紋圖譜，所建的指紋圖譜有較強(qiáng)的穩(wěn)定性，該指紋圖譜對不同產(chǎn)地的金銀花的差異進(jìn)行比較，為金銀花的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。目前，中國中醫(yī)研究院已開始利用指紋圖譜技術(shù)，從芍藥，黃芩，蒼術(shù)等中藥材著手，分別對其進(jìn)行鑒別，含量測定等方面的研究，建立了完整的中藥材質(zhì)量評估體系。

2 中藥指紋圖譜的主要技術(shù)

2.1 高效液相色譜法（HPLC）

HPLC法分析速度快，分離效能高，已廣泛應(yīng)用于中藥的鑒別與分析。游松等[2]用蘆丁作內(nèi)標(biāo)物，使用HPLC法分析銀杏葉的化學(xué)成分，從其藥材、中間體及注射液中間體中得到20個共有峰，通過比較各峰的相對保留時間及峰面積百分比發(fā)現(xiàn)三者的圖譜具有一定的相關(guān)性，該試驗結(jié)果為銀杏藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)。中藥注射劑中的成分多數(shù)可溶，使用HPLC法建指紋圖譜時應(yīng)先使用等度洗脫，若不理想再使用梯度洗脫方式。

2.2 薄層色譜法（TLC）

TLC法操作簡便，重現(xiàn)性好，應(yīng)用廣泛，經(jīng)濟(jì)可靠。該方法通過對薄層展開的斑點(diǎn)用固定的波長進(jìn)行掃描，所得結(jié)果客觀準(zhǔn)確，具有很好的鑒別意義。林明美等[3]對柴胡不同品種取了近40個樣品，對樣品分別進(jìn)行薄層指紋分析,對柴胡根中的甲醇提取物，己烷提取物及揮發(fā)油分別進(jìn)行薄層層析和薄層掃描,結(jié)果確認(rèn)了柴胡屬植物的特征成分。

2.3 氣相色譜法（GC）

GC法以氣體作為流動相進(jìn)行分析，具有選擇性好，分析速度快，靈敏度高，分離效能高等優(yōu)點(diǎn)。該方法要求樣品能汽化，對于揮發(fā)性成分具有很好的鑒別意義。錢浩泉等[4]應(yīng)用GC-MS聯(lián)用技術(shù)對道地產(chǎn)區(qū)的高良姜和在不同地區(qū)收集的各種市場商品進(jìn)行比較鑒別,結(jié)果發(fā)現(xiàn)草豆寇、益智、紅豆寇等高良姜的近緣植物的指紋特征存在明顯區(qū)別,各個品種的指紋特征具有唯一性。

2.4 毛細(xì)管電泳法（CE）

CE法成本低，分析速度快，分離效率高，試劑用量少，是一種綠色的中藥質(zhì)量分析方法。該法適用于水溶性及醇溶性成分的分析，有研究利用CE法分析紅花中的成分并建立指紋圖譜，為紅花的鑒別提供了理論依據(jù)。孫國祥等[5]采用毛細(xì)管電泳法,把原兒茶醛峰位作為參照峰并確定了8個共有峰,最終完成了復(fù)方丹參滴丸指紋圖譜的建立。

2.5 熒光光譜法

熒光光譜具有良好的指紋性，能夠比較形象得反映中藥中熒光組分的信息，進(jìn)而達(dá)到對中藥的鑒別和質(zhì)量控制。牟新利等[6]利用三維熒光技術(shù)來研究槐米，銀杏葉和柳杉種子的指紋圖譜，其中的蘆丁組分能夠?qū)ⅹ?dú)有的指紋圖譜特征顯示出來，因而三維熒光能夠比較準(zhǔn)確的鑒別中藥中的活性成分，可以作為研究中藥指紋圖譜的標(biāo)準(zhǔn)。

2.6 質(zhì)譜法（MS）

質(zhì)譜法精確，靈敏，常與其他方法聯(lián)用，在科研工作中應(yīng)用廣泛。近幾年來還出現(xiàn)了串聯(lián)質(zhì)譜（MS-MS）,等離子體質(zhì)譜，氣質(zhì)聯(lián)用（GCMS）等新的質(zhì)譜技術(shù)。蘇薇薇等[7]運(yùn)用氣質(zhì)聯(lián)用方法對細(xì)辛的45個樣品進(jìn)行分析，通過觀察其樣品的揮發(fā)油組分的總離子流圖，從中得到了不同細(xì)辛樣品的本質(zhì)區(qū)別，該研究實(shí)現(xiàn)了對三種細(xì)辛的分類。

2.7 分子生物色譜

基于現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)，分子生物色譜出現(xiàn)。分子生物色譜指紋圖譜是利用中藥中的活性成分與其相互作用，將分子生物與色譜分離的成果緊密結(jié)合，進(jìn)而建立指紋分析方法，對中藥的研究及其質(zhì)量控制提供幫助。有研究表明：不同的中藥品種，其分子生物色譜指紋圖譜存在顯著差異，不同產(chǎn)地的中藥其指紋圖譜也存在一定程度的不同[8]。因此該方法可以用于中藥的鑒定及活性成分的分析。

2.8 其他技術(shù)

中藥指紋圖譜除了應(yīng)用上文中主要技術(shù)外，還會應(yīng)用到高相逆流色譜（HSCCC）,HSCCC是一種新型的液-液色譜分配技術(shù)，該溶劑系統(tǒng)理論上適用于任何極性的樣品，其制備量大，操作靈活，回收率高，能實(shí)現(xiàn)梯度操作，在分離中藥方面具有很大優(yōu)勢[9]。此外，在中藥的指紋圖譜研究中，紫外可見光譜，紅外光譜，核磁共振以及X射線衍射等波譜學(xué)方法也發(fā)揮著一定作用。

（作者單位：山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院）

[1]石榮,王少云,侯準(zhǔn),桑立紅.大豆異黃酮指紋圖譜中保留時間漂流的校正研究[J].色譜,2006,24(1):65．

[2]游松，王亮，蔣稚紅,等.銀杏葉注射劑指紋圖譜的研究[J].中草藥,2002,33,(3):216-218.

[3]林明美.藥物分析[J],1987,7(3):13.

[4]錢浩泉等.高良姜及其近緣植物揮發(fā)油成分的氣相色譜指紋圖譜研究.中藥新藥與臨床藥理,2001,12(3):179～182.

[5]孫國祥,宋宇晴.復(fù)方丹參滴丸的毛細(xì)管電泳指紋圖譜[J].色譜,2009,27(4):494-498.

[6]王琳龐其昌,馬驥,等.一種中藥熒光指紋圖譜的光譜圖像構(gòu)建方法[J].光子學(xué)報,2011,40(6):860-864.

[7]蘇微微.中藥材[J],1999,22(6):279.

[8]孔亮,鄒漢法,汪海林,等.高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報),2000,21(1):36.

[9]曹學(xué)麗.高速逆流色譜分離技術(shù)及應(yīng)用.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

李哲（1995～）2014級本科中藥學(xué)專業(yè)。

張國青（1993～）2015級中藥學(xué)碩士研究生，研究方向為中藥質(zhì)量控制。

國家科技重大專項“中藥與天然藥物活性物質(zhì)高效分離純化單元技術(shù)平臺”（2010ZX09401-302-5-12）。