復方柴金解郁片抗抑郁作用的實驗研究

韓遠山,藺曉源,邵樂,楊蕙,王宇紅*,杜青，孟盼

（1.湖南中醫藥大學第一附屬醫院，湖南長沙410007；2.湖南省中藥粉體與創新藥物省部共建國家重點實驗室培育基地，湖南長沙410208；3.湖南中醫藥大學，湖南長沙410208）

復方柴金解郁片抗抑郁作用的實驗研究

韓遠山1,藺曉源1,邵樂1,楊蕙1,王宇紅2，3*,杜青2,3，孟盼2

（1.湖南中醫藥大學第一附屬醫院，湖南長沙410007；2.湖南省中藥粉體與創新藥物省部共建國家重點實驗室培育基地，湖南長沙410208；3.湖南中醫藥大學，湖南長沙410208）

目的初步探討復方柴金解郁片的抗抑郁作用。方法建立兩種小鼠抑郁模型，即小鼠強迫游泳實驗和懸尾實驗復制應激行為絕望抑郁模型，五羥色胺酸和利血平誘導藥物所致抑郁模型；檢測小鼠強迫游泳實驗和懸尾實驗不動時間，五羥色胺酸誘導的抑郁小鼠甩頭次數，利血平誘導的抑郁小鼠體溫、眼瞼閉合、運動不能差異程度。結果小鼠強迫游泳實驗和懸尾實驗中，與空白對照組比較，復方柴金解郁片2倍或（1倍）劑量組不動時間明顯減少（P＜0.05）。在五羥色胺酸誘導的小鼠甩頭實驗中，與空白對照組比較，復方柴金解郁片2倍劑量組甩頭次數明顯增加（P＜0.05或P＜0.01）。在利血平誘導的小鼠抑郁實驗中，與空白對照組比較，模型組小鼠眼瞼不能睜開1/2和運動不能動物數明顯增加，1 h后及4 h后其余各組小鼠體溫均有所下降(P＜0.01或P＜0.05)；與模型組比較，復方柴金解郁片2倍或1倍劑量組小鼠眼瞼不能睜開1/2和運動不能動物數明顯減少，藥后1 h及4 h小鼠體溫明顯上升(P＜0.01或P＜0.05)。結論復方柴金解郁片對各種小鼠抑郁模型都有明顯的抗抑郁作用。

復方柴金解郁片；抗抑郁；強迫游泳實驗；懸尾實驗；五羥色胺酸誘導實驗；利血平誘導實驗

本文引用：韓遠山,藺曉源,邵樂,楊蕙,王宇紅,杜青，孟盼.復方柴金解郁片抗抑郁作用的實驗研究[J].湖南中醫藥大學學報，2017，37（1）：18-21.

抑郁癥是一種危害全人類身心健康的常見情感障礙疾病，具有高發病、高復發、高自殺、高醫療成本的特點[1]。藥物是治療抑郁癥的主要手段，但目前抗抑郁西藥存在抗抑郁譜窄、毒副作用大、易復發、依賴性高及價格昂貴等缺點[2]。抑郁癥在中醫學屬于郁證的范疇。中醫治療郁癥立足整體，辨證論治，可對其進行多環節、多途徑、多靶點的調節，具有毒副作用小[3]、療效持久的優勢，抗抑郁中藥或天然藥物的研究已逐漸成為全球研究熱點。本課題根據郁證“瘀、郁”的中醫病機特點，以“疏肝理氣、活血解郁”為治則立方藥“復方柴金解郁片”（專利授權號為ZL201210126887.X）臨床治療抑郁癥療效獨特。為了進一步明確其作用，本實驗采用應激絕望行為、藥物相互作用兩種抑郁動物模型，觀察了復方柴金解郁片對實驗性抑郁動物模型的防治作用。

1 材料

1.1 實驗動物

ICR小鼠，SPF級，雄性，體質量18～22g，320只。由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，動物合格證號為43004700003437，許可證號：SCXK (湘)2011-0003。

1.2 藥品及試劑

復方柴金解郁片浸膏粉，相當生藥量為6.6 g生藥/g（文中均按生藥量計算），由湖南中醫藥大學第一附屬醫院藥劑科提供，批號為20121025，該藥物臨床擬用成人每日生藥量為20.5 g。百憂解（鹽酸氟西汀分散片，規格20 mg/片，Patheon France生產，批號2860A、2087A），臨床用量20～60 mg/d。利血平注射液(規格1 mg/mL，廣東邦民制藥廠有限公司，批號120304)。五羥色胺酸、帕吉林均由sigma公司進口分裝。

1.3 主要儀器

AY-120電子分析天平，日本島津；DJ-10002電子天平，福州華志科學儀器有限公司；ZZ-6小鼠自主活動測試儀，成都泰盟科技技術有限公司；動物行為活動記錄系統，成都泰盟科技技術有限公司；小鼠懸尾儀（西班牙Panlab）。

2 方法

2.1 分組及給藥

SPF級ICR小鼠適應性飼養3 d后，按體質量隨機分為4組：強迫游泳實驗組（n=50）、懸尾實驗組（n=50）、五羥色胺酸誘導組（n=100）、利血平誘導組（n=120），其中，前三組每組再隨機分為5組（n= 10或20）：空白對照組、陽性藥（百憂解14 mg/kg）組，復方柴金解郁片2、1、0.5倍劑量（4.0、2.0、1.0 g/ kg)組。利血平誘導組再隨機分為6組（n=10）：空白對照組、模型組、陽性藥（百憂解14 mg/kg）組、復方柴金解郁片2、1、0.5倍劑量組（4.0、2.0、1.0 g/kg)，灌胃給藥體積20 mL/kg，每日1次，連續給藥21 d。空白對照組給予純凈水。

2.2 小鼠應激行為絕望模型的建立[4]

2.2.1 強迫游泳實驗強迫游泳實驗組于末次給藥1 h后，將小鼠放入動物行為活動記錄系統的高25 cm、直徑10 cm、水深10 cm、水溫24℃的水缸中，共觀察6 min，適應2 min，記錄后4 min內累計不動時間（s）（不動即小鼠停止掙扎或小鼠呈漂浮狀態，小鼠四肢有輕微動作以保持頭部在水面）。

2.2.2 懸尾實驗[5]懸尾實驗組于末次給藥1 h后，放入小鼠懸尾儀中，通過計算機顯示小鼠的活動曲線，適應2 min后，開始觀察并記錄4 min之內小鼠的不動時間。

2.3 小鼠藥物誘導抑郁模型的建立[6]

2.3.1 五羥色胺酸誘導實驗五羥色胺酸誘導組小鼠在第21天皮下注射100 mg/kg帕吉林，1 h后灌胃給予藥物或純凈水，45 min后腹腔注射五羥色胺酸，15 min后觀察其甩頭行為，記錄5 min內小鼠甩頭次。

2.3.2 利血平誘導實驗利血平誘導組小鼠末次給藥的同時給予利血平2.0 mg/kg腹腔注射，空白對照組注射生理鹽水。比較各組小鼠體溫、眼瞼閉合和運動不能的差異程度。

2.4 統計學方法

使用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計量資料以“±s”表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法。計數資料采用χ2檢驗比較組間差異。P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 復方柴金解郁片對小鼠應激行為絕望模型的影響

3.1.1 強迫游泳實驗與空白對照組比較，陽性藥組小鼠強迫游泳不動時間明顯減少（P＜0.01）；復方柴金解郁片2倍劑量組小鼠強迫游泳不動時間明顯減少（P＜0.05）。結果見表1。

3.1.2 懸尾實驗與空白對照組比較，陽性藥組小鼠懸尾不動時間明顯減少（P＜0.01）；復方柴金解郁片2倍和1倍劑量組小鼠懸尾不動時間明顯減少（P＜0.05）；復方柴金解郁片0.5倍劑量組小鼠懸尾不動時間未見顯著性差異（P＞0.05）。結果見表1。

表1 各組小鼠強迫游泳和懸尾實驗結果(±s，n=10)

表1 各組小鼠強迫游泳和懸尾實驗結果(±s，n=10)

注：與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白對照組陽性藥組復方柴金解郁片組劑量（g/kg）-0.014 4.0 2.0 1.0 F值P值游泳不動時間（s）104.2±26.1 67.6±26.2** 82.7±21.6* 90.2±28.8 103.6±32.8 10.984 0.004懸尾不動時間（s）118.6±24.7 81.6±27.9** 88.6±24.5* 93.1±29.4* 101.5±33.8 8.930 0.008

3.2 復方柴金解郁片對藥物所致的抑郁模型的影響

3.2.1 五羥色胺酸誘導小鼠甩頭實驗與空白對照組比較，陽性藥組、復方柴金解郁片2倍劑量組小鼠甩頭次數明顯增加（P＜0.05或P＜0.01）。結果見表2。

表2 五羥色胺酸誘導的小鼠甩頭實驗結果(±s，n=20)

表2 五羥色胺酸誘導的小鼠甩頭實驗結果(±s，n=20)

注：與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白對照組陽性藥組復方柴金解郁片組劑量（g/kg）-0.014 4.0 2.0 1.0增加率（%）-184 36 20 18 F值P值甩頭次數（次）7.5±2.6 20.4±6.9** 9.5±3.3* 8.9±2.5 8.6±2.3 64.071 0.000

3.2.2 利血平誘導小鼠抑郁實驗（1）小鼠眼瞼閉合程度檢測結果與空白對照組比較，模型組小鼠眼瞼不能睜開1/2的動物數量明顯增加(P＜0.01)。與模型組比較，陽性藥組、復方柴金解郁片2倍和1倍劑量組小鼠眼瞼不能睜開1/2的動物數量明顯減少(P＜0.01或P＜0.05)。結果見表3。

表3 利血平誘導的抑郁小鼠眼瞼閉合程度檢測結果(n=20)

（2）小鼠運動不能差異程度檢測結果，與空白對照組比較，模型組小鼠運動不能動物數量增加(P＜0.01)。與模型組比較，陽性藥組小鼠運動不能動物數量明顯下降(P＜0.01)；復方柴金解郁片2倍劑量組小鼠運動不能動物數量下降(P＜0.05)。結果見表4。

表4 利血平誘導的抑郁小鼠運動不能差異程度檢測結果(n=20)

（3）小鼠體溫變化檢測結果，實驗前各組動物的基礎體溫沒有統計學上的差異。給予利血平后，與空白對照組比較，1 h后及4 h后其余各組小鼠體溫均有所下降(P＜0.05或P＜0.01)。與模型組比較，藥后1 h及4 h陽性藥組與復方柴金解郁片2倍和1倍劑量組小鼠體溫明顯上升(P＜0.01或P＜0.05)。結果見表5。

表5 利血平誘導的抑郁小鼠體溫變化結果(±s，n=20)

表5 利血平誘導的抑郁小鼠體溫變化結果(±s，n=20)

注：與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別劑量（g/kg）體溫（℃）藥前藥后1 h藥后4 h空白對照組模型組陽性藥組復方柴金解郁片組--0.014 4.0 2.0 1.0 F值P值38.11±0.64 38.86±0.65 39.01±0.55 38.88±0.44 38.97±0.37 38.90±0.45 0.098 0.756 38.56±0.74 36.97±0.85** 37.45±0.43**##38.01±0.35**##37.78±0.61**#37.74±0.75** 30.281 0.000 36.99±1.45 33.40±2.92** 36.11±1.45*##35.34±2.34**#35.12±2.45**#35.08±2.61** 28.225 0.000

4 討論

21世紀人類面對的最大疾患是精神疾病，而抑郁癥是其中的重點，且抑郁癥大規模爆發的危險率為15%～20%[7]。因此，進行抑郁癥藥物研究具有重要的應用價值與科學意義，而抑郁動物模型對抗抑郁藥物發現和開發又具有至關重要的作用。小鼠懸尾模型與小鼠強迫游泳模型系經典的行為絕望模型，與人類的抑郁癥發病有相似的病理學基礎，并具有簡單、快捷、敏感的特點，對多種類型的抗抑郁藥敏感，因而常用于抗抑郁藥物篩選[7]。復方柴金解郁片4.0 g/kg劑量可有效減少小鼠強迫游泳不動時間；4.0、2.0 g/kg可以有效減少小鼠懸尾不動的時間，說明復方柴金解郁片對絕望行為模型小鼠具有明顯的抗抑郁活性，最小起效劑量為2.0g/kg。

藥物相互作用模型包括利血平拮抗模型和5-羥色胺酸增強模型等，利血平是一種囊泡再攝取抑制劑，使遞質留在囊泡之外易被單胺氧化酶降解，從而使去甲腎上腺素（NE）、腎上腺素（E）、多巴胺（DA）和5-羥色胺（5-HT）耗竭，使動物處理后出現上眼瞼下垂、體溫下降及運動抑制[9]；5-羥色胺酸（5-HTP)是5-HT的前體物質，脫羧后轉變為5-HT對機體起作用，使用單胺氧化酶抑制劑帕吉林可抑制5-HT的代謝，再給予抗抑郁藥可使5-HT蓄積，增強其特征性的癥狀——甩頭行為，該類模型常用在作用于5-HT和NE系統的抗抑郁藥物的篩選[10]。本實驗研究結果表明，復方柴金解郁片4.0、2.0 g/kg劑量具有對抗利血平所致小鼠眼瞼下垂、體溫下降的作用；4.0 g/kg劑量有對抗利血平所致的小鼠運動不能的作用；4.0 g/kg劑量能增加五羥色胺酸誘導的小鼠甩頭次數，說明復方柴金解郁片對5-HT和NE系統有一定的改善作用。綜上，復方柴金解郁片對藥理相互作用模型動物具有明顯的抗抑郁作用，最小起效劑量為2.0g/kg，其作用可能是通過提高5-HT、NE和DA來實現的。

抑郁癥屬中醫學“郁證”的范疇，病始在肝，及于心神，與腦相關[11]。因情而郁，氣血失調是其病機關鍵。若情志不舒，肝失疏泄，氣機失調，氣血運行受阻，氣滯血瘀，或肝郁化火，煉津灼血，均致瘀血停積，神明不能內守，則情緒焦慮，精神抑郁。心主血脈和神明，為精神之所舍。若肝郁氣滯或肝郁化火，血脈瘀阻，血不養心則心神浮越，精神異常。而腦為元神之府，若氣血失調，元神失養，神機運轉不利，也會導致抑郁癥狀的產生。因此，郁證之初以肝郁氣滯為主，繼發血瘀，瘀血停積，則心神不寧；瘀結于內，不得宣泄，上犯清竅，則神明失用。其具有“瘀、郁”的中醫病機特點，治宜“疏肝理氣、活血解郁”。

本課題組研發的復方柴金解郁片，由柴胡、貫葉金絲桃、姜黃、紫蘇、芍藥、知母組成，方中柴胡疏肝解郁為君；貫葉金絲桃疏肝解郁，取散諸結之意，姜黃活血化瘀行氣，主血瘀氣滯諸證,二者均為臣藥；佐以紫蘇理氣解郁，芍藥養血柔肝，知母滋陰除煩。全方共奏疏肝理氣、活血解郁的作用。《王夢英醫案》中有述：“肝主一身之氣，七情之病必由肝起”[12]；林佩琴在《類證治裁》中概括：“七情內起之郁，始而傷氣，繼必及血，終乃成勞”[13]；王清任的《醫林改錯》補充了瘀血可導致郁證的發生[14]。本次研究恰恰通過郁證“瘀、郁”病機指導下“以法統方”的復方柴金解郁片實驗研究反證了“疏肝理氣、活血解郁”治法的合理性，同時也驗證了郁證病機理論“始而傷氣，繼必及血”的科學內涵，具有重要的理論意義，為中醫藥防治抑郁癥研究提供了新的思路。

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（本文編輯 楊瑛）

Study on Anti-depressant Effect of Compound Chaijin Jieyu Tablet

HAN Yuanshan1,LIN Xiaoyuan1,SHAO Le1,Yang Hui1,WANG Yuhong2,3*,DU Qing2,3,MENG Pan2
(1.The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China;2.Training Bases, Hunan Key Laboratory of Chinese Materia Medica Powder and Innovative Drugs Established by Provincial and Ministry, Changsha,Hunan410208,China;3.Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China）

ObjectivePreliminary study on the anti-depressant effect of compound Chaijin Jieyu tablet(CJJY).Methods Two kinds of mice models of depression were established,the mice forced swimming test and hanging tail test replication stress behavioral despair models of depression,serotonin acid and reserpine induced drug-induced depression model;detection of mouse forced swimming test and the tail suspension test in the time of immobility,serotonin acid induced depression inmicethenumberofheadtwitches,reserpineinduceddepressionofbodytemperature,eyelidclosure,akinesia difference degree of mice.ResultsCompared with the control group,the immobility time of 4 times and 2 times or(1 times)dose CJJY groups by the forced swimming test and tail suspension test in mice was significantly reduced(P＜0.05). Compared with the control group,the head-twitching number of 4 times and 2 times dose CJJY group,in 5-HT acid induced head twitches test,was significantly increased(P＜0.05 or P＜0.01).In the experiment of depression induced by reserpine,compared with the control group,the number of mice in the model group,which the eyelids were unable to open 1/2 and akinesia,was significantly increased.After 1h and 4 h,the body temperature of the rest mice was decreased(P＜0.01 or P＜0.05).Compared with model group,the number of mice in the CJJY 4 times and 2 times dose groups,which the eyelids were unable to open 1/2 and akinesia.was significantly decreased.After 1h and 4h,the body temperature of the rest mice in each group was increased(P＜0.01 or P＜0.05).ConclusionCJJY shows obvious anti-depression effect on all kinds of depression mouse models.

compound Chaijin Jieyu tablet;anti-depression;forced swimming test;hanging tail test;5-HT acid inducing test;reserpine inducing test

R285.5；R749

A

2016-08-22

國家自然科學基金青年項目（81403387）;湖南省科技廳重點項目（2015DK3003）。

韓遠山，男，在讀碩士研究生，研究方向：中藥神經藥理學。

*王宇紅，女，研究員，博士研究生導師，E-mail：wyh107@126.com。