AKT2在膠質瘤細胞中替莫唑胺化療耐藥的作用機制研究

崔勇，張風林，應奇，胡國漢，駱純，盧亦成

·論著·

AKT2在膠質瘤細胞中替莫唑胺化療耐藥的作用機制研究

崔勇，張風林，應奇，胡國漢，駱純，盧亦成

目的 研究AKT2基因在U251細胞株中對替莫唑胺化療耐藥中的作用機制。方法 體外將慢病毒介導的AKT2-shRNA表達載體轉染膠質瘤U251細胞。應用細胞計數試劑盒(CCK8)法檢測RNA干擾AKT2后U251細胞對替莫唑胺敏感性的變化情況。流式細胞儀測定沉默AKT2基因表達后各組細胞凋亡的改變情況。AKT2-shRNA干擾膠質母細胞瘤細胞株U251的AKT2表達，進而采用Western blot實驗方法，來進一步分析和評價AKT2與MDR-1、MRP-1、MGMT、bcl-2、caspase-3、P53等相關蛋白表達情況和相互調控關系。結果 CCK8法檢測結果計算替莫唑胺對U251細胞的半數細胞抑制濃度(IC50)從U251空白對照組的(39.72±2.41)μg/ml、陰性對照組的(39.43±2.24)μg/ml降到(27.23±1.93)μg/ml，AKT2干擾組U251細胞對替莫唑胺藥物的IC50值顯著降低。流式細胞儀檢測凋亡實驗顯示，與空白對照的U251細胞[調亡細胞(16.95±1.32)%]和轉染陰性對照的U251膠質瘤細胞[調亡細胞(17.93±2.29)%]相比，轉染AKT2 shRNA的U251細胞中早期、晚期調亡細胞明顯增加，總調亡細胞達(38.16±4.83)%，干擾組凋亡水平有顯著性增強(P<0.05)。AKT2-shRNA干擾U251后其凋亡明顯增加，Real-time PCR和蛋白印跡實驗結果提示bcl-2、survivin、MGMT明顯下調，而caspase-3、PTEN、P53、beclin-1明顯上調。結論 AKT2可能參與調控bcl-2、caspase-3、P53、survivin、beclin1等凋亡自噬相關蛋白及DNA損傷修復蛋白MGMT的表達，從而介導膠質母細胞瘤細胞株U251對替莫唑胺化療抵抗。

腦膠質瘤；AKT2基因；替莫唑胺

替莫唑胺(TMZ)已成為臨床上腦膠質瘤一線化療藥物。聯用替莫唑胺與生物靶向藥物以提高療效和降低毒性反應是近年來最為活躍的研究領域之一。我們前期的實驗研究表明替莫唑胺耐藥細胞株中大量凋亡相關蛋白和DNA損傷修復蛋白發生了明顯的變化，AKT2基因也在耐藥株中明顯上調[1]，進而推斷AKT2在替莫唑胺膠質瘤化療耐藥中起著重要作用。本實驗進一步研究AKT2-shRNA對U251替莫唑胺藥物敏感性的作用調節機制。……