重編程人成纖維細胞為誘導型類小腦顆粒樣細胞的體外實驗研究

沈剛，蘇作鵬，全勇，徐福林，徐鋒

·論著·

重編程人成纖維細胞為誘導型類小腦顆粒樣細胞的體外實驗研究

沈剛，蘇作鵬，全勇，徐福林，徐鋒

目的 在體外直接誘導重編程獲取患者成纖維細胞來源的誘導型類小腦顆粒樣細胞(hiCGCs)，并研究這些細胞的生物學特征。方法 篩選與小腦神經細胞發育、分化相關的誘導因子；構建攜帶有轉錄因子的表達載體；以標準皮膚細胞培養流程培養出人頭皮成纖維細胞，使用慢病毒載體介導Ascl1、Sox2和OCT4三個轉錄因子在胞內表達，并在培養過程中加入神經營養因子：BMP4，FGF8b和Wnt3a；誘導獲得具有小腦顆粒神經元特征的hiCGCs。結果 經細胞免疫組織化學和電生理檢測，證實該hiCGCs具有類似正常小腦顆粒神經元的生物學和生理學特征。使用Ascl1、Sox2和OCT4三個轉錄因子及BMP4、FGF8b和Wnt3a三種營養因子可將成人成纖維細胞直接轉變成為具有小腦顆粒神經元特征的hiCGCs。結論 HiCGCs在形態上與小腦顆粒神經元非常相似，能夠表達小腦顆粒神經元的特異性蛋白，并具有類似正常小腦顆粒神經元的電生理特性。

人誘導型類小腦顆粒樣神經細胞；再生醫學；譜系重編程

小腦是腦組織中相對獨立和特殊的區域，在運動控制和認知功能領域發揮著重要的作用。顆粒細胞是谷氨酸能的興奮性神經元，也是小腦數量最多的神經元[1-2]。臨床上常見的小腦疾病包括小腦萎縮和小腦發育不良[3-6]，該類疾病目前無有效的治療方法。通過外源性細胞、組織移植的方式可以促進神經組織及其功能修復，并重建神經信號網絡，有望成為攻克該類疾病的重要途徑[7]。……