飼料浮萍水平對大正三色錦鯉抗氧化能力、免疫力及消化酶活性的影響

張植元，范 澤，魏 東，喬秀亭，白東清，張彥俊，張滕閑

（天津農學院水產學院，天津市水產生態及養殖重點實驗室，天津 300384）

飼料浮萍水平對大正三色錦鯉抗氧化能力、免疫力及消化酶活性的影響

張植元，范 澤，魏 東*，喬秀亭，白東清，張彥俊，張滕閑

（天津農學院水產學院，天津市水產生態及養殖重點實驗室，天津 300384）

為探究飼料中不同浮萍添加水平對大正三色錦鯉抗氧化能力、免疫能力以及消化能力的影響。配制浮萍添加水平分別為0%（對照組）、3%、6%、9%、13%、14%的6種等蛋白（38.6%）飼料，飼養初重為（42.19±1.32）g大正三色錦鯉8周，分別記為Diet 1（0/13）、Diet 2（3/10）、Diet 3（6/7）、Diet 4（9/4）、Diet 5（13/1）、及Diet 6（14/0）6組。每種飼料設3個重復，每個重復飼喂10尾魚。結果表明：（1）飼料中浮萍替代菜粕的量在13%時，大正三色錦鯉的抗氧化能力最強，肝臟中超氧化物歧化酶（SOD）與過氧化氫酶（CAT）活力較對照組提高41.99%、20.85%（P＜0.05）。（2）Diet 5（13/ 1）組錦鯉的免疫能力提高并達到最佳狀態，血清中谷丙轉氨酶（GPT）與堿性磷酸酶（AKP）較對照組提高66.61%、73.27%（P＜0.05）。（3）浮萍添加量在13%時，大正三色錦鯉各項消化酶活性達到最佳，前腸蛋白酶活性與脂肪酶活性較對照組提高了38.18%、58.22%（P＜0.05）。因此，建議在飼料中添加13%的浮萍。

大正三色錦鯉；消化酶活性；抗氧化能力；免疫力

錦鯉屬于輻鰭亞綱，鯉形目，鯉科，鯉亞科，鯉屬。錦鯉的體格健碩，色彩絢麗，花紋多變，有很高的觀賞價值。張璐認為雜食性觀賞魚所需要的蛋白質含量為40%～45%（張璐，2001）。錦鯉對于蛋白質的需用量，幼魚要比成魚的多，水溫高的要比水溫低的要多。因此飼料中需添加大量的蛋白質，而浮萍就是一種蛋白質含量很高的植物。浮萍烘干后，粗蛋白質含量為35%～50%，幾乎和大豆含量一樣。其經濟價值主要有兩種，一是可以入藥，一是可以作為飼料成分。雖然在飼料中添加浮萍不是很常見，但在喂養草魚的時候，會輔助投食浮萍解決單一使用配合飼料導致魚體后期生長過快，成活率不高，規格不齊等問題，還降低了飼料成本（關洪斌等，2010）。本試驗以浮萍作為飼料蛋白源，添加到飼料中飼喂錦鯉，旨在研究其對錦鯉抗氧化能、免疫能力的影響，以其為浮萍的開發利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗用魚與飼養管理 試驗魚選自天津藍科水產有限公司培育的大正三色錦鯉，先對試驗魚經行適應環境的馴化，在3 d以后，選取體質優良、規格相近、無傷病，初始體重為（42.19±1.32）g的錦鯉180尾，將其隨機分為6組，每組3個重復，每個重復養殖10條試驗魚。養殖水體是曝氣后的自來水，pH為7.8±0.2，水溫（29±1.1）℃。投餌率3%，每天9∶00和15∶30投喂兩次，試驗持續8周。

1.2 試驗飼料 本試驗所用的飼料中基礎蛋白質有魚粉、豆粕等，浮萍添加水平分別為0%、3%、6%、9%、13%、14%的6種等蛋白（38.6%），分別記為Diet 1（0/13）、Diet 2（3/10）、Diet 3（6/7）、Diet 4 （9/4）、Diet 5（13/1）、及Diet 6（14/0）6組，試驗飼料組成與營養水平見表1。

表1 試驗飼料組成及營養水平（以風干為基礎）

1.3 樣本采集 飼養結束后，對禁食2 d錦鯉進行挑選，每組選20尾魚作為樣品，稱體重、量體長及體高，之后將其解剖，取其肝胰臟、脾臟、腎臟前中后腸分離后立即速凍，然后轉入-80℃冰箱中保存，待測。

1.4 生化指標測定 肝胰臟等各組織解凍后用預冷的生理鹽水沖洗干凈并用濾紙吸干后稱重。在預冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，用移液管加入9倍于組織塊質量的預冷勻漿介質（0.85%的氯化鈉注射液），在勻漿器中進行勻漿，4℃、4500 r/min離心15 min，取上清液備用。

組織中蛋白質含量，淀粉酶和脂肪酶活性測定試劑盒以及各抗氧化指標、免疫指標測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。組織中蛋白酶活性測定采用福林酚法（杜遠明，2004）。

1.5 數據處理 數據均以“平均值±標準誤”表示，采用SPASS 18.0對所得數據進行單因素方差分析（one-way ANOVA），若差異達到顯著水平，則采用Duncan’s法進行多重比較，顯著性水平P＜0.05。

2 結果與分析

2.1 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉抗氧化能力的影響

2.1.1 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉SOD活力的影響 由表2可知，血清SOD活力整體呈先下降再上升趨勢，但與其他處理組之間沒有顯著差異（P＞0.05）；各組中腎SOD活力差異均不顯著（P＞0.05）；脾臟SOD活力呈先上升后下降趨勢，Diet 2 （3/10）組較Diet 1（0/13）組提高了54.62%（P＜0.05）；而與其他處理組之間沒有顯著差異 （P＞0.05）；肝胰臟SOD活力呈先降低再升高再降低的趨勢，Diet 2（3/10）與Diet 3（6/7）組較對照組Diet 1（0/13）降低了41.99%、34.90%（P＜0.05）。

表2 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉SOD活力的影響

2.1.2 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉CAT活力的影響 由表3可知，肝胰臟中，Diet 5（13/1）CAT活力最大，且顯著高于 Diet 2（3/10）組，但與其他處理組沒有顯著的差異 （P＞0.05）。脾臟CAT活力整體呈先升高再下降趨勢，其中Diet 6 （14/0）組較Diet 1（0/13）組提高68.46%（P＜0.05）；中腎中，Diet 5（13/1）CAT活力較Diet 1（0/ 13）組提高37.32%，但沒有顯著差異（P＞0.05）；血清中，Diet 5（13/1）與 Diet 6（14/0）較Diet 1（0/ 13）組提高71.85%、78.78%（P＜0.05）。

2.1.3 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉MDA含量的影響 由表4可知，Diet 5（13/1）組肝臟MDA含量最低，較對照組降低64.50%（P＜0.05）；整體呈先下降再上升趨勢，Diet 5（13/1）組中腎MDA較對照組Diet 1（0/13）降低55.98%，但差異不顯著（P＞0.05）；脾臟中，Diet 5（13/1）組較對照組降低37.44%（P＜0.05）；血清MDA含量整體呈先上升再下降的趨勢，且Diet 5（13/1）組較對照組降低48.29%，但差異不顯著（P＞0.05）。

表3 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉CAT活力的影響

表4 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉MDA含量的影響

2.2 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉免疫力的影響

2.2.1 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉ACP的影響由表5可知，肝胰臟ACP的活力整體呈先下降再上升的趨勢，Diet 2（3/10）組顯著低于Diet 1（0/13）組（P＜0.05）；脾臟ACP活力各處理組的差異不顯著（P＞0.05）；頭腎ACP中，Diet 5（13/1）組顯著大于其他各組，且較對照組提高69.82%（P＜0.05）；血清ACP中，Diet 5（13/1）組較對照組提高了53.65%（P＜0.05）。

表5 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉ACP活力的影響

2.2.2 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉AKP活力的影響 由表6可知，肝胰臟AKP的活力整體呈先上升再下降的趨勢，各組差異不顯著（P＞0.05）；脾臟中，Diet 5（13/1）組AKP活力顯著高于Diet 1（0/ 13）組，且較之提高了51.34%（P＜0.05）；頭腎中，Diet 5（13/1）組顯著其他各組（P＜0.05），且較對照組提高33.72%（P＜0.05）；血清中，Diet 5（13/1）與Diet 6（14/0）組顯著高于其他各組，較對照組分別提高73.27%、70.79%（P＜0.05）。

表6 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉AKP活力的影響

2.2.3 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉GOT活力的影響 由表7可知，肝胰臟GOT的活力整體呈先下降再上升趨勢，各組差異不顯著 （P＞0.05）；脾臟中，Diet 1（0/13）組GOT活力最小，其他各組較之分別提高了 65.51%、70.95%、71.80%、68.76%、72.79%（P＜0.05）；頭腎中，Diet 5（13/1）與Diet 6（14/0）組GOT的活力均顯著大于對照組 Diet 1（0/13），較之提高 49.03%、48.76%（P＜0.05）；血清中，Diet 5（13/1）組GOT活力顯著大于Diet 1（0/13）組，且較之提高62.26%（P＜0.05）。

表7 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉GOT活力的影響

2.2.4 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉GPT活力的影響 由表8可知，肝胰臟中，Diet 5（13/1）與Diet 6（14/0）組GPT活力顯著大于對照組，且較之提高73.36%、68.12%（P＜0.05）；脾臟中，Diet 5 （13/1）與Diet 6（14/0）組GPT活力顯著大于對照組，且較之提高84.50%、80.84%（P＜0.05）；頭腎中，Diet 5（13/1）與Diet 6（14/0）組顯著大于其他各組，且較對照組分別提高76.80%、72.29%（P＜0.05）；血清中，Diet 5（13/1）組GPT活力顯著大于對照組，且較之提高66.61%（P＜0.05）。

表8 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉GPT活力的影響

2.3 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉消化酶活性的影響

2.3.1 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉蛋白酶活性的影響 由表9可知，前腸中，Diet 5（13/1）與Diet 6（14/0）組蛋白酶活性顯著大于對照組，且較之提高38.18%、36.64%（P＜0.05）；中腸、后腸以及血清中，各組蛋白酶活性差異均不顯著（P＞0.05）。

表9 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉蛋白酶活性的影響

表10 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉淀粉酶活性的影響

2.3.2 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉淀粉酶活性的影響 由表10可知，前腸中，Diet 5（13/1）與Diet 6（14/0）組淀粉酶活性顯著大于其他各組，且較對照組提高40.61%、31.84%（P＜0.05）；中腸和后腸各處理組之間差異均不顯著（P＞0.05）；血清中，Diet 5（13/1）組淀粉酶活性顯著高于對照組Diet 1（0/13），且較之提高35.16%（P＜0.05）。

2.3.3 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉脂肪酶活性的影響 由表11可知，前腸中，Diet 5（13/1）組脂肪酶活性顯著高于其他各組，但較對照組提高58.22%（P＜0.05）；中腸中，Diet 4（9/4）、Diet 5（13/ 1）與Diet 6（14/0）組較對照組分別提高27.83%、29.76%、27.96%（P＜0.05）；后腸中，各處理組脂肪酶活性差異均不顯著（P＞0.05）；血清中，Diet 5（13/ 1）組與Diet 6（14/0）組差異不顯著，但均顯著高于對照組，較之提高了61.01%、47.30%（P＜0.05）。

表11 飼料浮萍水平對大正三色錦鯉脂肪酶活性的影響

3 討論

3.1 不同浮萍添加量對大正三色錦鯉抗氧化能力的影響 魚體抗氧化能力的強弱可以通過超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）以及丙二醛（MDA）含量多少表示。超氧自由基（O2-）是生物體某些反應的中間產物，其化學性質活潑，如果細胞缺乏自由基的酶時，機體會發生損傷，SOD和GAT能通過歧化反應清除細胞生成的超氧自由基，從而減少自由基對機體的損害。脂質過氧化物的主要分解產物為MDA，可以間接地反映組織細胞脂質過氧化的強度或速率（劉麗等，2008）。抗氧化劑的抗氧化作用主要通過抑制自由基的產生、直接清除自由基，以及通過提高內源性抗氧化物質的水平來實現。浮萍的類胡蘿卜素含量豐富，且葉黃素的含量極高（于斌，2010），而類胡蘿卜素具有很強的抗氧化活性和極強的清除自由基的能力（Ganji等，2005）。本試驗中，各試驗組抗氧化能力相對于對照組均有提高，表明，在錦鯉飼料油脂中浮萍替代菜粕，具有抑制各組織及血清中MDA含量，同時提高SOD和CAT活力的作用，并且浮萍添加量在13%時，錦鯉的抗氧化能力達到最佳狀態。

3.2 不同浮萍添加量對大正三色錦鯉免疫能力的影響 動物代謝過程中重要的調控酶有很多，酸性磷酸酶（ACP）和堿性磷酸酶（AKP）就是其中之一。大量研究表明，磷酸酶活力是細胞和體液免疫的綜合反映，并且性別、年齡、發育階段對其存在不同的影響（盧彤巖等，2010）。磷酸酶可催化所有磷酸單酯及磷酸基團的轉移，直接參與磷的代謝，對魚、蝦蟹類鈣質的吸取、磷酸鈣沉積、骨骼形成、甲殼素分泌及形成有著重要作用 （孫虎山等，1999）。本試驗中，各試驗組磷酸酶活力均高于對照組，說明浮萍的添加可促進錦鯉細胞中的物質代謝，促進其生長，間接增強其非特異性免疫能力，而綜合各組織磷酸酶結果，Diet 5（13/1）組表現最高，表明該添加量的浮萍使魚體處于最佳的鈣磷代謝狀態。谷草轉氨酶（GOT）和谷丙轉氨酶（GPT）在糖、蛋白質和脂肪等物質代謝過程中起重要作用，是機體正常生命活動不可缺少的酶類之一（崔培等，2013）。本試驗中，各試驗組GOT、GPT活力均高于對照組。GPT是反映肝臟是否損傷的主要指標，健康動物血清中轉氨酶濃度較低，當肝細胞膜損傷或肝細胞壞死時，血清中GPT濃度增高。而GOT活性升高常反映心臟或肌肉組織發生障礙。轉氨酶活性能夠依營養條件而改變，其值能反映氨基酸代謝強度 （崔培等，2013）。本試驗中，各試驗組GPT和GOT活力與對照組相比，均有不同程度提高，而Diet 5（13/1）組活力最高，說明該添加量的浮萍使魚體轉氨酶活力達到最佳狀態。

3.3 不同浮萍添加量對大正三色錦鯉消化酶活性的影響 酶活性是反應消化能力最重要的指標（石英等，2009）。魚類攝食后，飼料成分會成為消化酶的底物，影響消化酶的分泌和活力 （楊代勤等，2003）。脂肪是維持魚類生長、發育和繁殖的必需營養物質，是必需脂肪酸和能量的主要來源，又是脂溶性維生素的載體，在魚類生命活動過程中發揮著重要的作用。脂肪在脂肪酶的作用下，分解成甘油酯和自由脂肪酸的混合物而被魚類吸收（Norambuena等，2015）。研究表明，轉氨酶活力的增強有利于提高蛋白質代謝效率（孫紅梅，2004），本試驗中，各試驗組的蛋白酶活性較對照組均有提高，說明飼料中浮萍的添加在促進錦鯉轉氨酶活力提高的同時，加強了蛋白質的代謝，從而提高了體內蛋白酶及脂肪酶活性，但對淀粉酶活性影響不顯著，具體原因還有待進一步研究。

4 結論

本研究結果表明，飼料浮萍水平在13%時，錦鯉SOD、CAT活力均顯著高于對照組，MDA含量顯著低于對照組，錦鯉的抗氧化能力顯著提高；另外，飼料中添加13%的浮萍，可提高各消化酶的活性，從而促進錦鯉細胞中的物質代謝，間接增強其非特異性免疫能力。因此，建議在大正三色錦鯉飼料中添加13%的浮萍替代菜籽粕。

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This experiment was conducted to investigate the effects of dietary duckweed levels（0%，3%，6%，9%，13%and 14%，named as Diet 1（0/13），Diet 2（3/10），Diet 3（6/7），Diet 4（9/4），Diet 5（13/1）and Diet 6（14/0）respectively）on the antioxidant ability，digestive ability and immunity in Tajsho-sanke.A total of 180 average weight of（42.19±1.32）g Tajsho-sanke were randomly allocated to 6 groups with 3 replicates of 10 each.The results showed as follows：（1）compared with the control group，superoxide dismutase（SOD）and catalase（CAT）of hepatopancreas of fish fed with Diet 5（13/ 1）were increased by 41.99 and 20.85%respectively（P＜0.05）.（2）the highest values of glutamic-pyruvic transaminase （GPT）and alkaline phosphatase（AKP）activities of serum were observed in the Diet 5（13/1）group and they were 66.61% and 73.27%higher than the control group（P＜0.05）.（3）the activities of protease and lipase of foregut in the Diet 5（13/1）group were significantly increased by 38.18%and 58.22%（P＜0.05）.Comprehensive antioxidant ability，digestive ability and immunity adding 13%of duckweed feed was the most suitable for the growth of Tajsho-sanke.

Tajsho-sanke；digestive ability；antioxidant ability；immunity

S816.7

A

1004-3314（2017）02-0040-05

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20170210

天津市科技重大專項與工程計劃項目-優質錦鯉綜合養殖技術集成與應用（15ZXBFNC00340）

*通訊作者