柿擬盤多毛孢菌的生物學特性研究

章一鳴+何永宏+邱有尚+周志斌+丁榆+韓有魁

（1.湖州職業技術學院藝術與設計學院，浙江湖州 313000；2.云南省保山市隆陽區果樹蔬菜技術推廣站，678000；3.云南農業大學，云南昆明 650201）

摘 要 通過實驗，對甜柿黑腐病病原菌進行生物學特性進行研究。結果顯示：不同培養基配方、溫度、酸堿度、碳源、氮源和光照對菌絲的生長有一定影響，菌絲生長的最適宜培養基是柿樹砧木根煎汁根培養基，最適溫度是30℃，最適光照為24h全日光照，最適pH是4，最適碳源為葡萄糖，最適氮源為硝酸鈉。

關鍵詞 甜柿黑腐病；生物學特性；柿擬盤多毛孢菌

中圖分類號：S436.67 文獻標志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.24.030

柿子樹是柿科、柿屬落葉大喬木，品種很多，生長在溫帶與熱帶[1]。在我國已有3000多年的栽培歷史了，主要分布在陜西、河南、山東和河北，占全世界的50%以上[2]。柿子樹不僅產果，果實鮮美，而且作為綠化景觀樹種，其作用甚大[3]。2013年，在云南省保山地區發現了甜柿根腐病，關于病原菌（pathogenic bacterium）生物學特性和培養性狀的研究報道較少；為此，2013年下半年，開展了甜柿根腐病的相關實驗與分析，總結了不同環境因素下病原菌的生長狀況，為深入研究甜柿根腐病的發病機理提供數據支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2013年4月，在保山市柿樹種植園區采集病害樹木標本，2014-2015年，通過常規真菌分離法，通過柯赫氏法則進行驗證確定病原菌后，進行了菌株的純培養，并保存了下來。

1.2 生物學特性測定的實驗方法

1.2.1 營養條件對病原菌生長的影響

取PDA菌株菌絲，將其置于PDA培養基中央，在25℃恒溫箱中培養7 d，菌絲長滿培養皿后，用打孔器在距離培養皿中心相同的位置的圓周上取菌塊，菌塊的直徑為5mm，將菌塊分別接入馬鈴薯葡萄糖培養基、馬鈴薯蔗糖培養基、查氏培養基、水瓊脂培養基、燕麥片培養基、玉米粉培養基、柿樹砧木根煎汁培養基，在26℃培養箱中進行培養；5d后用十字交叉法對病原菌菌落直徑進行測定，重復3次，共計21皿，記錄數據。

1.2.2 溫度對病原菌生長的影響

取PDA菌株菌絲，將其置于PDA培養基中央，在25℃恒溫箱中培養7 d，菌絲長滿培養皿后，用打孔器在距離培養皿中心相同的位置的圓周上取菌塊，菌塊的直徑為5mm，并將其置于溫度為5、10、15、20、25、30、35℃七個不同培養箱中進行培養；5d用十字交叉法對病原菌菌落直徑進行測定，記錄數據，每個溫度梯度重復3次，共計21皿。

1.2.3 pH對病原菌生長的影響

用HCL和NaOH溶液調節培養基pH濃度（HCL和NAOH的濃度均為0.1mol/L），從而配制成不同pH的PDA平板。將直徑5mm的菌餅分別接種于pH3-11的PDA平板上，置于26℃的培養箱中培養。6d后，用十字交叉法測量菌落生長直徑，記錄數據。每個pH梯度重復3次，共計27皿。

1.2.4 光照對病原菌生長的影響

將直徑5mm的菌餅接于PDA平板，設定4種光照條件：16∶8（白天∶夜晚）自然光照、12∶12（白天∶夜晚）光暗更替、全黑暗、全光照，置于26℃下培養；5d后用十字交叉法對病原菌菌落直徑進行測定，記錄數據。每個光照梯度重復3次，共計12皿。

1.2.5 碳源對病原菌生長的影響

PDA培養基中葡萄糖是作為碳源的主要成分，本實驗將葡萄糖替換成蔗糖、麥芽糖、α-乳糖、可溶性淀粉、甘露醇，從而制成碳源不同，但是其他條件相同的不同培養基，并將5mm菌餅置于這些培養基中央，在26℃培養箱中培養。5d后測量菌落的平均直徑值，記錄數據。每個碳源重復3次，共計18皿。

1.2.6 氮源對病原菌生長的影響

查氏培養基中硝酸鈉是作為氮源的主要成分，本實驗將硝酸鈉替換成蛋白胨、尿素、甘氨酸、硫酸銨、氯化銨、硝酸鉀，從而制成氮源不同，但是其他條件相同的不同培養基，并將5mm菌餅置于這些培養基中央，在26℃培養箱中培養，5d后測量菌落的平均直徑值，記錄數據，以比較不同氮源對菌絲生長的影響，每個氮源重復3次，共計21皿。

2 結果與分析

2.1 培養基對病原菌菌絲生長、菌絲顏色及形態的影響

病原菌菌絲在7種不同成分的培養基上生長情況差異較大，在柿樹砧木根煎汁培養基中生長最快，菌落平均直徑達到5.96cm；在PDA培養基生長次之，菌落直徑為5.06cm，但是在水瓊脂培養基中生長是最緩慢的，菌落直徑3.85cm。

2.2 碳源對菌絲生長的影響

菌絲生長的適宜碳源為葡萄糖，以葡萄糖為碳源時，菌落平均直徑最大，為5.07cm；菌絲在以甘露醇和可溶性淀粉為碳源的培養基中生長緩慢，分別為3.00cm和3.41cm。菌絲在以α-乳糖、麥芽糖、蔗糖為碳源的培養基中的平均直徑分別為4.23、3.81、4.36、3.69cm。

2.3 氮源對菌絲生長的影響

菌絲生長的適宜氮源為硝酸鉀和硫酸銨，其中以硝酸鈉為氮源時，數據顯示其菌落平均直徑最大，為3.97cm，表明病原菌生長最適氮源為硝酸鈉；菌絲在以蛋白胨、氯化銨為氮源的培養基中生長最為緩慢，分別為1.80cm和1.91cm。菌絲在以甘氨酸、硫酸銨、尿素、硝酸鉀為氮源的培養基中的平均直徑分別為3.20、3.66、3.15、3.60cm。

2.4 溫度對病原菌菌絲生長的影響

菌絲生長的適宜溫度區間為25～30℃。其中菌絲在30℃下生長時，菌落平均直徑最大，為6.41cm；菌絲在5℃時，無法生長；在10℃和35℃生長非常緩慢。

2.5 pH對病原菌菌絲生長的影響

病原菌菌絲在所調制的各種pH濃度培養環境下均能生長，但是菌絲生長的適宜pH區間為3～5，菌絲在pH為4的培養基下長勢最好，可以表明病原菌較偏愛酸性條件。

2.6 光照對病原菌菌絲生長的影響

菌絲在不同光照條件下都能生長菌落顏色及形態基本無差異，最適光照為24 h全光照，菌落平均值達到6.21cm。

3 結論與討論

研究結果表明，營養條件、環境溫度，土壤酸堿度等條件對柿擬盤多毛孢菌的菌絲生長具有影響。菌絲在馬鈴薯葡萄糖培養基上生長最好；相比其他pH而言，病原菌在pH為4的環境條件下生長最好；數據也表明最適合病原菌生長的溫度條件為30℃；本實驗中，菌絲在24 h全光照的條件下生長最適宜。

鑒于以往對于此病害的研究報道很少，本文通過對柿擬盤多毛孢菌生物學特性的研究，明確病菌的生長環境條件，為病害的深入研究提供一手數據，為病害的防治提供相關借鑒，為其他科屬植物的根腐病防治提供參考。

參考文獻

[1]賀士元.北京植物志（下冊）[M].上海：上海出版社，1988.

[2]中國科學院西北植物研究所.秦嶺植物志（第一卷第4冊）[M].北京：科學出版社，1983.

[3]余忠保，吳洪思.庭院綠化樹種柿子樹的特征特性及栽培技術[J].現代農業科技，2011（14）：218.

（責任編輯：趙中正）