棗仁顆粒鎮靜催眠作用及機制研究

崔施展，賈東升，謝曉亮，溫春秀，李榮喬，劉靈娣

（河北省農林科學院經濟作物研究所，藥用植物研究中心，河北石家莊050051）

棗仁顆粒鎮靜催眠作用及機制研究

崔施展，賈東升，謝曉亮*，溫春秀，李榮喬，劉靈娣

（河北省農林科學院經濟作物研究所，藥用植物研究中心，河北石家莊050051）

研究棗仁顆粒的鎮靜催眠作用及其作用機制。連續7 d不同劑量的棗仁顆粒灌胃（10、20、40mg/kg，以地西泮作為陽性對照，生理鹽水作為空白對照，比較各組間小鼠自主活動次數，閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠只數，閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠潛伏期及睡眠時間，并比較小鼠腦組織中γ-氨基丁酸（GABA）含量。結果表明，中高劑量的棗仁顆粒均可顯著減少小鼠自主活動次數，縮短活動時間（P＜0.05），中高劑量棗仁顆粒可顯著提高閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠的睡眠只數（P＜0.05），低中高劑量的棗仁顆粒均可縮短閾上劑量小鼠的睡眠潛伏期，延長睡眠時間（P＜0.05），小鼠腦組織中GABA含量升高。棗仁顆粒具有良好的鎮靜催眠作用，其作用機制可能為通過調節GABA含量發揮鎮靜催眠作用。

棗仁顆粒；鎮靜；催眠

當今社會，隨著工作生活壓力的增大，不良作息及生活習慣的養成，失眠或睡眠質量低下的發生率呈逐年上升趨勢，失眠人群數量的逐年增加，給患者的生活及工作帶來諸多不利的影響，引起工作及生活質量嚴重下降[1]。目前臨床治療失眠多采用以地西泮為代表的苯二氮類藥物，此類藥物極易造成患者的依賴性和成癮性，研究發現，純植物提取物在改善睡眠方面有著獨特優勢，具有安全可靠，無毒副作用，無成癮性等特點，近年來逐漸受到人們的關注[2]。酸棗仁、遠志、茯苓、黨參均具有良好的鎮靜催眠作用[3-6]，在我國有著悠久的使用歷史，相關報道較多，但對4種藥材進行復方配伍后功效如何未見報道，本研究以“健脾益氣”立法，選用上述4種藥材，制備棗仁顆粒，通過對小鼠自主活動、協同戊巴比妥鈉催眠作用及腦組織中γ-氨基丁酸（GABA）含量變化情況，驗證其鎮靜催眠功效，以地西泮作為陽性對照，研究可能存在的作用機制，為研制具有改善睡眠，提高睡眠質量的保健類食品提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

ICP小鼠：雄性，體重20 g～25 g，北京維通利華實驗動物技術有限公司，實驗動物合格證號SCXK（京）2015-0017。

1.1.2 藥品與試劑

酸棗仁、遠志、茯苓、黨參：購自安國中藥材市場，經謝曉亮研究員鑒定為正品；戊巴比妥鈉：美國Sigma；地西泮：華中藥業股份有限公司；生理鹽水：石家莊制藥集團有限公司；水為高純水。

1.1.3 儀器與設備

GBL-5型提取濃縮組、GLP-5型高速離心噴霧干燥機：無錫市旺盛機械廠；LGC100垂直送料干法制粒機：北京國藥龍立科技有限公司；YLS-1A多功能小鼠自主活動記錄儀：成都太盟科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 棗仁顆粒的制備

按照配方比例稱取酸棗仁、遠志、茯苓、黨參，共煎回流提取2次，對提取液濃縮、過濾后加入適量麥芽糊精噴霧干燥，得噴霧干燥粉，取噴霧干燥粉適量，采用干法制粒即得棗仁顆粒。

1.2.2 棗仁顆粒對小鼠自主活動的影響

取健康小鼠60只，隨機分為5組，空白組及陽性對照組給予生理鹽水，實驗組給予10、20、40mg/kg棗仁顆粒溶液，連續灌胃7 d，在末次灌胃前4 h，禁食禁水，在末次灌胃后陽性對照組給予4mg/kg地西泮，30min后置于自主活動測試儀中，適應5min后，記錄小鼠在10min內的自主活動次數及活動時間，自主活動次數抑制率/%=（空白組活動次數-實驗組活動次數）/空白組活動次數×100，自主活動時間抑制率/%=（空白組活動時間-實驗組活動時間）/空白組活動時間×100。

1.2.3 對閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠的入睡只數影響

按照“1.2.2”項下方法，在末次灌胃30min后，腹腔注射閾下劑量戊巴比妥鈉30mg/kg，以100%小鼠不入睡為最大劑量，在15min內小鼠翻正反射消失達1min為入睡標準，記錄各組小鼠入睡只數。

1.2.4 對閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠入睡潛伏期及睡眠時間的影響

按照“1.2.2”項下方法，在末次灌胃30min后，腹腔注射閾上劑量戊巴比妥鈉40mg/kg，以100%小鼠入睡為最小劑量，在15min內小鼠翻正反射消失達1min為入睡標準，記錄各組小鼠入睡潛伏期及睡眠時間。

1.2.5 GABA含量變化情況

按照“1.2.2”項下方式，在末次灌胃30min后，將小鼠處死，迅速取出下丘腦，置于存有冰凍生理鹽水勻漿儀中，5 000 r/min離心10min，取上清，按照試劑盒說明書，于450 nm處，測定GABA含量。

1.2.6 統計學方法

統計學處理選用統計學軟件SPSS17.0，計數資料采用x2檢驗，以P＜0.05表示組間差異顯著，P＜0.01表示組間差異極顯著，P＞0.05表示組間無顯著性差異。

2 結果

2.1 棗仁顆粒對小鼠自主活動的影響

實驗結果表明，中高劑量棗仁顆粒可明顯減少小鼠的自主活動次數，縮短小鼠自主活動時間，空白組小鼠活動次數為161次、陽性對照組為71次、棗仁顆粒分別為98、86、54次，空白組小鼠活動時間為583 s、陽性對照組為425 s、棗仁顆粒分別為494、328、274 s，中高劑量組與空白組比較差異顯著（P＜0.05）、與陽性對照組無明顯差異（P＞0.05），表明棗仁顆粒具有抑制小鼠自主活動作用，實驗結果見表1。

表1 棗仁顆粒對小鼠自主活動的影響（x±s，n=12）Table1 Zizyphi spinosae semen granule on the autonomic activity of mice（x±s，n=12）

2.2 閾下劑量小鼠睡眠只數

實驗結果表明，中高劑量棗仁顆粒可明顯增加閾下劑量小鼠的睡眠只數，空白組無睡眠小鼠、地西泮組為7只、棗仁顆粒分別為5、7、8只，與空白組比較中高劑量組比較差異顯著（P＜0.05）、與陽性對照組無明顯差異（P＞0.05），表明棗仁顆粒具有增加閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠入睡只數，實驗結果見表2。

表2 小鼠睡眠只數及入睡率（x±s，n=12）Table2 The number of sleep and sleep rate（x±s，n=12）

2.3 閾上劑量小鼠睡眠睡眠潛伏期及睡眠時間

實驗結果表明，中高劑量棗仁顆粒可明顯縮短小鼠睡眠潛伏期，延長小鼠睡眠只數，睡眠潛伏期：空白組為（5.2±1.3）min、地西泮組為（3.8±0.8）min、棗仁顆粒分別為（3.7±1.4）、（3.1±0.7）、（2.4±1.1）min，與空白組比較中高劑量組比較差異顯著（P＜0.05）、與陽性對照組無明顯差異（P＞0.05），睡眠時間：空白組為（32.8± 8.4）min、地西泮組為（42.7±11.7）min、棗仁顆粒分別為（41.3±12.8）、（49.2±10.2）、（51.7±11.6）min，與空白組比較高劑量組差異顯著（P＜0.05）、與陽性對照組無明顯差異（P＞0.05），表明棗仁顆粒可以縮短閾上劑量小鼠睡眠潛伏期，延長睡眠時間，實驗結果見表3。

表3 小鼠睡眠潛伏期及睡眠時間（x±s，n=12）Table3 The latency of sleep and the sleep time of mice（x±s，n=12）

2.4 GABA含量變化情況

GABA含量變化情況見表4。

實驗結果表明，中高劑量棗仁顆粒可明顯縮短小鼠睡眠潛伏期，延長小鼠睡眠只數，睡眠潛伏期：空白組為12.4 ng/mL、地西泮組為21.4 ng/mL、棗仁顆粒分別為19.8、28.6、34.7 ng/mL，與空白組比較低中高劑量組比較差異顯著（P＜0.05）、與陽性對照組比較，中高劑量存在顯著差異（P＜0.05）。

3 討論

棗仁顆粒由酸棗仁、遠志、茯苓、黨參4種中藥配伍組成，藥材經提取、濃縮、干燥、制粒而成，其中酸棗仁入心、肝經可養心陰益肝血而寧心安神；遠志入心、腎經可開心氣，通腎氣，交通心腎，安神定志；茯苓入心、脾經，為健脾寧心之上品；黨參可補氣益脾，以運藥力，上述藥材合用符合“健脾益氣而寧心”的中醫養生理論。

表4 組間下丘腦GABA含量比較（x±s，n=12）Table4 Comparison of GABA content in hypothalamus between groups（x±s，n=12）

研究結果顯示，棗仁顆粒可明顯抑制小鼠自主活動，具有較好的鎮靜作用；棗仁顆粒可增加閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠的睡眠只數，縮短閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠的睡眠潛伏期并延長睡眠時間，鎮靜催眠作用于棗仁顆粒劑量具有正相關性，中高劑量棗仁顆粒功效與陽性對照地西泮無明顯差異，表明棗仁顆粒具有良好的鎮靜催眠作用。

GABA為一類抑制性神經遞質，可通過與GABA受體（GABAA）結合調節神經元活性，降低神經細胞興奮，發揮鎮靜催眠作用[7]。GABA為腹外側視前區（vLPO）神經元細胞受到特異性刺激后分泌的，本研究發現棗仁顆粒可提高小鼠腦組織中GABA含量，可能是棗仁顆粒可刺激vLPO神經元細胞增加GABA的分泌[8-9]，同時酸棗仁皂苷A可特異性的調控GABAA的α1、α5mRNA的表達，增加GABAA含量[10]，使GABA與GABAA結合增加，進而起到安神作用。棗仁顆粒的鎮靜催眠作用可能是通過調節體內的GABA含量及GABAA表達活性來完成的。

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Sedative and Hypnotic Effect of Zizyphi spinosae semen Granule and Its Mechanism

CUI Shi-zhan，JIA Dong-sheng，XIE Xiao-liang*，WEN Chun-xiu，LI Rong-qiao，LIU Ling-di
（Institute of Cash Crops of Hebei Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Medicinal Plant Research Center，Shijiazhuang050051，Hebei，China）

To study the sedative and hypnotic effects of Zizyphi spinosae semen Granule and the potential mechanism.Administrated with Zizyphi spinosae semen Granule（10、20、40mg/kg）for7 consecutive days，diazepam as a positive control，saline as control，The number of spontaneous activities in mice，the number of sleep deprivation in pentobarbital sodium mice，the sleep latency and the sleep time in pentobarbital sodium mice were compared，and the content of γ-amino butyric acid（GABA）in brain tissue of mice was compared. The results showed that Zizyphi spinosae semen particle moderate and high doses could significantly reduce the number of independent activity in mice，shortening the activity time（P＜0.05），Zizyphi spinosae semen particle moderate and high doses could significantly raise the subthreshold dose of pentobarbital sodium in mice sleeping only a few（P＜0.05），low，moderate and high doses of Zizyphi spinosae semen particle could shorten sleep latency threshold dosages in mice，prolonged sleep time（P＜0.05），GABA in the brain tissue of mice was significantly increase.Zizyphi spinosae semen particle have a good sedative and hypnotic effects，the mechanism of action may be to play a sedative and hypnotic effect by adjusting the content of GABA.

Zizyphi spinosae semen granule；sedation；hypnosis

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.03.038

2016-03-09

河北省農林科學院青年基金項目（A2015050101）；河北太行山區特色功能保健食品的開發研究（11231005D）

崔施展（1989—），男（漢），本科，主要從事中藥功能食品研究。

*通信作者：謝曉亮（1962—），男，研究員，博士，主要從事中藥資源、中藥加工研究。