結核感染T細胞檢測應用于結核桿菌感染的研究

范偉光,孟 娟 ,蘇苗苗,劉 洋,石榮亞,石鵬輝,馬金彤

(保定市傳染病醫院，河北 保定071000)

*通訊作者

結核感染T細胞檢測應用于結核桿菌感染的研究

范偉光,孟 娟*,蘇苗苗,劉 洋,石榮亞,石鵬輝,馬金彤

(保定市傳染病醫院，河北 保定071000)

目的 評價結核感染T細胞檢測(免疫斑點法)(T-SPOT.TB)的等效性,指導結核病的臨床診治。方法 對受試者進行T-SPOT.TB、痰涂片、LDH、ADA、hs-CRP、ESR檢測，對結果進行觀察、比較、分析。 結果 結核性疾病組T-SPOT.TB的陽性率均顯著高于非結核性疾病組和正常對照組T-SPOT.TB的陽性率，差異有統計學意義(P<0.05)；而非結核性疾病組和正常對照組T-SPOT.TB的陽性率差異無統計學意義(P>0.05)；結核性疾病組中痰涂片陽性的T-SPOT.TB檢測陽性率為85.0%，痰涂片陰性的T-SPOT.TB檢測陽性率為86.7%，兩者比較差異無統計學意義(P>0.05)；結核相關生化指標(LDH、ADA、hs-CRP)和ESR檢測在T-SPOT.TB陽性組的表達量均顯著高于T-SPOT.TB陰性組的表達量，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 T-SPOT.TB為判斷是否感染結核的可靠指標。

結核分枝桿菌；肺結核;結核感染T細胞斑點試驗

(ChinJLabDiagn,2017,21:0220)

結核病是機體被結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)感染，引發的一種傳染病，主要經過上呼吸道傳播，屬于慢性消耗性疾病。結核病是全球最為嚴重的衛生疾病之一，據WHO相關數據分析，全球有約20億人感染過結核分枝桿菌，每年有約200萬人死于結核[1，2]。早在2000年，國家衛生部第4次結核流行病學調查中顯示，我國全年齡組結核分枝桿菌(MTB)感染率已達到44.5%,全國大約有5.5億人次感染了該菌，感染率高于全球人口感染率約1/3水平[3]。結核病是能治愈的，特別是早期進行治療可明顯降低病死率。近年來，新發展的一種以T細胞檢測為基礎的結核感染T細胞檢測(T-SPOT.TB),被美國、歐洲等多國的臨床診療指南所推薦。本研究擬對所有受試者，進行結核感染T細胞斑點試驗,同時進行痰涂片抗酸染色，結核相關生化指標(LDH、ADA、hs-CRP)檢測和ESR測定，以評價T-SPOT.TB 的等效性,指導結核病的臨床診治。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇自2014年7月至2015年3月在保定市傳染病醫院住院、門診的結核患者110例。其中男62例，女48例，平均年齡為(31.25士16.67)歲，所有入選本研究的病例患者治療時間均小于1周，經臨床或細菌學檢查確診[4]。其中肺結核患者80例，肺外結核患者30例。非結核組患者為住院、門診確診為其他傳染病的43例病例，男27例，女16例，平均年齡為(39.15士20.23)歲。健康對照組50例為排除結核病的健康體檢者，男26例，女24例，平均年齡為(29.01士13.54)歲。

1.2 試劑和儀器 主要試劑：結核感染T細胞檢測試劑盒(免疫斑點法)(T-SPOT.TB)購自上海復星長征醫學科學有限公司；乳酸脫氫酶(L法)檢測試劑盒購自北京九強生物技術股份有限公司；腺苷脫氨酶測定試劑盒(過氧化物酶法) 購自北京九強生物技術股份有限公司；超敏C-反應蛋白測定試劑(免疫比濁法) 購自北京利德曼生化股份有限公司。主要儀器： HFsafe-1500 CLASS II TYPE B2生物安全柜、AU-640生化分析儀等。所有試驗均嚴格按照試劑操作規程執行。

1.3 統計處理 應用SPSS19.0軟件進行統計學數據分析，計數資料：采用χ2檢驗；計量資料：根據數據方差齊性檢驗，選擇采用t檢驗或者t’檢驗，檢驗水準：α=0.05。

2 結果

2.1 對110例結核患者、43例非結核患者和50例健康體檢者的T-SPOT.TB陽性率進行統計學分析，采用χ2檢驗。結果見表1。

表1 各組間T-SPOT.TB陽性率的比較

注：*χ2=203.457,P <0.05，▲χ2=0.346,P>0.05

2.2 對110例結核患者痰涂片結果和T-SPOT.TB檢測結果進行統計學分析，采用χ2檢驗。結果見表2。

表2 結核患者痰涂片分析和T-SPOT.TB的結果比較

注：χ2=0.001,P>0.05

2.3 對T-SPOT.TB陽性組和T-SPOT.TB陰性組的結核相關生化指標(LDH、ADA、hs-CRP)檢測和ESR檢測結果進行統計學分析，采用t檢驗。結果見表3。

表3 相關生化指標和ESR在T-SPOT.TB 陽性組與T-SPOT.TB陰性組的比較分析

3 討論

近年來，中國地區結核病發病上升趨勢十分明顯，已嚴重影響我國人民生活質量和健康保健。潛伏感染者和結核患者被盡早發現，對其進行干預至關重要，是控制結核病傳染源，切斷結核病傳播途徑的關鍵。結核病明確診斷需要將臨床表現、影像學與病原免疫學檢查、組織病理學和對抗癆藥治療反應等結合起來進行評估。至今沒有一種準確、快速、可靠檢測結核分枝桿菌的方法[5]。痰涂片抗酸染色陽性對診斷肺結核有比較重要的臨床意義，該方法技術要求低，不需特殊儀器設備，但是非常容易漏檢，需要連續多次進行鏡檢，并且該方法敏感性過低，不能區分死菌和活菌，即使沒有發現抗酸桿菌也不能說明沒有感染結核。結核相關生化指標(LDH、ADA、hs-CRP)檢測雖然在結核感染期間都有不同程度的高表達，但并不能特異性的說明是結核感染。ESR可作為了解肺結核患者病情的參考，在一定意義上又可以反映肺結核的活動程度，但是需要其他試驗方法的綜合判斷。

T-SPOT.TB是以T細胞為基礎的體外IFN-γ反應測定方法[6]。以T細胞免疫應答為基礎的T-SPOT.TB，其原理為機體初次感染結核分枝桿菌后會行成致敏的T淋巴細胞，當機體再次感染結核分枝桿菌時，致敏的T淋巴細胞會釋放較高水平的細胞因子，其中最重要的為γ-干擾素(IFN-γ)。高水平的IFN-γ反應可提示結核分枝桿菌感染[7，8]。T-SPOT.TB選用RD1區編碼的兩種早期分泌蛋白:培養濾過蛋白-10( CFP-10)與早期抗原靶-6( ESAT-6)，它們在結核分枝桿菌感染早期就能夠被機體的免疫系統識別，引發專一性的細胞免疫反應，是特異性非常高的蛋白[9]，其避免了非特異性表位(如非結核分枝桿菌及卡介苗)的影響[10]。T-SPOT.TB為英國原裝進口試劑 (Oxford Immunotec,UK)，是應用ELISPOT技術測定產生IFN-γ的T細胞的個數。

本研究顯示結核性疾病組、非結核性疾病組、正常對照組T-SPOT.TB的陽性率分別為86.4%、7.5%、4.0%。結核性疾病組T-SPOT.TB的陽性率均顯著高于非結核性疾病組和正常對照組T-SPOT.TB的陽性率，差異有統計學意義(P<0.05)，可見T-SPOT.TB的敏感性很高；而非結核性疾病組和正常對照組T-SPOT.TB的陽性率差異無統計學意義(P>0.05)，可見T-SPOT.TB的特異性也很高。痰涂片陽性的T-SPOT.TB檢測陽性率為85.0%，痰涂片陰性的T-SPOT.TB檢測陽性率為86.7%，兩者比較差異無統計學意義(P>0.05)，說明T-SPOT.TB檢測在痰菌涂片陰性結核病患者中的敏感性也很高。結核相關生化指標(LDH、ADA、hs-CRP)檢測和ESR在T-SPOT.TB陽性組的數值均明顯高于T-SPOT.TB陰性組的數值，差異均有統計學意義，說明結核相關生化指標(LDH、ADA、hs-CRP)檢測和ESR測定對結核的診斷也有一定價值。

[1] WHO.G lobal Tubercu los is Control Surveillance Planning Financing Geneva WHO,2007.

[2]Dinnes J,Deeks J,Kunst H,et al.A systematic review of rapid diagnostic tests for the detection of tuberculosis infection[J].Health Technol Assess,2007,11(3):1.

[3]全國結核病流行病學抽樣調查技術指導組，全國結核病流行病學抽樣調查辦公室.2000年全國結核病流行病學抽樣調查報告[J].中國防癆雜志,2002,24(2)：65.

[4]中華醫學會.臨床診療指南-結核病分冊[M].北京:人民衛生出版社，2005.1-46，122.

[5]Garg SK,Tiwari D.Diagnosis of active tuberculosis:available technologies,limitations,and possibilities[J].J Clin Lab Anal，2003，17:155.

[6]Sun L,Yan HM,Hu YH,et al.IFN-gamma release assay:a diagnostic assistance tool of tuberculin skin test in pediatric tuberculosis in China [J].Chin Med J (Engl)，2010,123 (20):2786.

[7]Ferrara G ,Losi M ,Meacci M ,et al.Routine hospital use of a new commercial whole blood interferon-gamma assay for the diagnosis of tuberculosis infection.Am[J].Am J Respir Crit Care Med,2005，172(5):631.

[8]Lee SW,Lee CT,Yim JJ.Serial interferon-gamma release assays during treatment of active tuberculosis in young adults[J].BMC Infect Dis,2010,10:300.

[9]Hall IJ.Clare S,Pickard D,et al.Characterisation of a live salmonella Vaccine stably expressing the Mycobacterium tuberculosis Ag85B-ESAT6 fusion protein[J].Vaccine,2009,27(49):6894.

[10]Kulshrestha A,Cupta A,Verma N.et al.Expression and purification of recombinant antigens of Mycobacterium tuberculosis for applicotion in serodiagnosis[J].Protein Expr Purif,2005,44(8):75.

Research T-SPOT.TB applied to Mycobacterium tuberculosis infection

FANWei-guang,MENGJuan,SUMiao-miao,etal.

(InfectiousDiseaseHospitalofBaodingCity,Baoding071000,China)

Objective The results were analyzed to evaluate the meaning of T-SPOT.TB in the clinical diagnosis and treatment of tuberculosis.Methods:All the samples were examined by T-SPOT.TB,sputum smear,LDH,ADA,hs-CRP and ESR test.All the testing items were performed strictly in accordance with the Reagent testing instructions.Methods The T-SPOT.TB positive rate of the tuberculous group was significantly higher than that of non-tuberculosis disease group and control group(P<0.05);However,the T-SPOT.TB positive rate was no statistically significant between non-tuberculosis group and control group.(P>0.05).Positive rate of T-SPOT.TB test was 85.0% for Sputum smear-positive cases,and 86.7% for Sputum smear negative cases,with no statistically significant difference(P>0.05).It showed that T-SPOT.TB test in the sputum smear negative TB patients had a high sensitivity.The amount of LDH、ADA、hs-CRP and ESR test in T-SPOT.TB positive group were significantly higher than that in T-SPOT.TB negative groups(P<0.05).Results Conclusion T-SPOT.TB is a reliable index for judging whether infected with TB.

Mycobacterium Tuberculosis;TB;T-SPOT.TB

1007-4287(2017)02-0220-03

R521

A

范偉光，男，主管技師，碩士，擅長臨床基礎檢驗、生化檢驗、免疫檢驗等;孟娟，女，主管護師，從事感染科護理管理.

2016-01-30)