膿毒血癥患者血清IL-6以及IL-10的表達(dá)及對(duì)免疫功能的影響

趙雪峰,魏秀華

(天津市第五中心醫(yī)院 重癥醫(yī)學(xué)科,天津300450)

膿毒血癥患者血清IL-6以及IL-10的表達(dá)及對(duì)免疫功能的影響

趙雪峰,魏秀華

(天津市第五中心醫(yī)院 重癥醫(yī)學(xué)科,天津300450)

目的 探討膿毒血癥患者血清IL-6以及IL-10的表達(dá)及對(duì)免疫功能的影響。方法 選擇2013年6月-2015年6月在我院重癥醫(yī)學(xué)科(ICU)收治的50例膿毒血癥患者為實(shí)驗(yàn)組，2015年1月-2015年6月來(lái)我院體檢的健康人群50例為對(duì)照組，檢測(cè)兩組血清IL-6、IL-10以及T細(xì)胞亞群水平；分析IL-6、IL-10水平與CD4+/CD8+比值的相關(guān)性。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組患者血清IL-6以及IL-10水平均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+均有不同程度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。相關(guān)分析結(jié)果顯示，IL-6、IL-10水平與CD4+/CD8+比值均呈顯著負(fù)相關(guān) (r分別為-0.328,-0.452；P均<0.05)。結(jié)論 膿毒血癥患者血清中IL-6和IL-10水平呈高表達(dá)、T細(xì)胞亞群呈低表達(dá)，且三者間具有協(xié)同作用，可以共同促進(jìn)病變的進(jìn)展。因此，在早期階段檢測(cè)IL-6、IL-10及T淋巴細(xì)胞亞群可以作為早期診斷膿毒血癥的指標(biāo)，對(duì)于疾病的預(yù)后判斷也有一定的指導(dǎo)意義。

膿毒血癥；IL-6；IL-10；免疫功能

(ChinJLabDiagn,2017,21:0279)

膿毒血癥是一種常見(jiàn)的感染性、多器官損傷的疾病，是由于患者繼發(fā)感染后，由多種炎癥介質(zhì)參與的一種全身性綜合性疾病，可以引起休克、多臟器功能障礙綜合征(MODS)，是導(dǎo)致危重患者死亡的主要原因之一[1]。早期診斷膿毒血癥，可以及早的治療患者，降低病死率。因此，尋找一種可以早期診斷膿毒血癥，并預(yù)測(cè)MODS發(fā)生的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，是急救醫(yī)學(xué)學(xué)者們研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。研究表明[2,3]，在膿毒血癥發(fā)生、發(fā)展是過(guò)程中，患者不僅僅處于免疫細(xì)胞過(guò)度激活的狀態(tài)，它經(jīng)歷了多個(gè)環(huán)節(jié)，包括免疫激活、免疫抑制以及免疫類(lèi)型轉(zhuǎn)化等。發(fā)生膿毒血癥后，患者體內(nèi)的免疫細(xì)胞可以分泌大量的細(xì)胞因子，在這些細(xì)胞因子中，促炎因子IL-6和抑炎因子IL-10在免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)中具有十分重要的臨床意義[4,5]。2013年6月-2015年6月，我們檢測(cè)了膿毒血癥患者血清IL-6、IL-10的表達(dá)，旨在探討上述指標(biāo)在膿毒血癥中的變化及其對(duì)免疫功能的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

實(shí)驗(yàn)組為2013年6月至2015年6月在我院重癥醫(yī)學(xué)科(ICU)收治的膿毒血癥患者50例。所有患者均符合《2001年國(guó)際膿毒血癥定義會(huì)議關(guān)于膿毒血癥診斷的新標(biāo)準(zhǔn)》[6]。排除各類(lèi)自身免疫性疾病、HIV感染、急性心腦血管疾病、病毒性感染以及6個(gè)月內(nèi)使用過(guò)影響免疫功能的藥物等的患者。其中男27例，女23例；年齡34-76歲，平均年齡(60.4±10.5)歲；發(fā)病原因：肺部感染24例，腹腔感染10例，胰腺炎8例，術(shù)后5例，其它3例。對(duì)照組為2015年1月-2015年6月來(lái)我院體檢的健康體檢者50例。其中男26例，女24例；年齡32-73歲，平均年齡(60.3±9.4)歲。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 檢測(cè)方法

在體檢者體檢當(dāng)日以及膿毒血癥患者確診后，抽取所有研究對(duì)象空腹靜脈血5 ml，置于無(wú)抗凝劑的真空采血管內(nèi)，充分搖勻，在4℃、3 000 r/min條件下離心10 min，取上層血清，采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)IL-6及IL-10的含量。試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限公司，雷杜RT-6000酶標(biāo)儀購(gòu)自深圳市雷杜電子有限公司。EPIC-SXL-MCL流式細(xì)胞儀測(cè)定T細(xì)胞亞群，試劑盒采用美國(guó)Becton Dickinson公司生產(chǎn)的CD3-PE-CY5、CD4PE、CD8PE試劑盒。

1.3 質(zhì)量控制

為了保證研究資料以及數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性、可靠性，在研究過(guò)程中，我們采取了一系列的質(zhì)量控制措施，具體包括：(1)由我院ICU具有豐富臨床經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師嚴(yán)格根據(jù)膿毒血癥的診斷以及排除標(biāo)準(zhǔn)確定入選病例；(2)所有參與研究的人員均經(jīng)經(jīng)過(guò)統(tǒng)一的技術(shù)培訓(xùn)；(3)選用準(zhǔn)確的測(cè)量?jī)x器，并在進(jìn)行檢測(cè)進(jìn)行質(zhì)控；(4)檢測(cè)指標(biāo)均分別采用雙份血清進(jìn)行檢測(cè)；(5)實(shí)驗(yàn)過(guò)程由專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員進(jìn)行指導(dǎo)，嚴(yán)格按照操作規(guī)范以及試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，安排專(zhuān)人監(jiān)督加樣、配樣過(guò)程；(6)所有數(shù)據(jù)資料均由雙人獨(dú)立錄入數(shù)據(jù)庫(kù)中，安排專(zhuān)人核對(duì)所錄入的數(shù)據(jù)。

1.4 觀察指標(biāo)

比較兩組血清IL-6及IL-10水平；外周血CD3+、CD4+、CD8+水平及CD4+/CD8+比值；分析IL-6、IL-10水平與CD4+/CD8+比值的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組血清IL-6及IL-10水平比較

如表1所示，實(shí)驗(yàn)組患者血清IL-6及IL-10水平均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 兩組血清IL-6及IL-10水平比較

注：*兩組間比較P<0.05。

2.2 兩組免疫功能比較

如表2所示，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+均有不同程度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 兩組免疫功能比較

注：T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+單位為：個(gè)/μl；*兩組間比較P<0.05。

2.3 IL-6、IL-10水平與CD4+/CD8+比值的相關(guān)性分析

相關(guān)分析結(jié)果顯示，IL-6、IL-10水平與CD4+/CD8+比值均呈顯著負(fù)相關(guān)(r分別為-0.328,-0.452；P均<0.05)。

3 討論

膿毒血癥是繼發(fā)于各種嚴(yán)重疾病后常見(jiàn)的并發(fā)癥，比如燒傷、嚴(yán)重創(chuàng)傷、感染、休克、以及各種大手術(shù)后等，患者并發(fā)膿毒血癥后的預(yù)后差、住院時(shí)間長(zhǎng)、病死率較高。目前，有關(guān)膿毒血癥的發(fā)病機(jī)制尚未明確，研究認(rèn)為[7,8]，在膿毒血癥的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，炎癥反應(yīng)和免疫功能紊亂發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。一般認(rèn)為，各種炎性反應(yīng)介質(zhì)的釋放、轉(zhuǎn)運(yùn)和堆積是膿毒血癥和(或)向MODS惡化的關(guān)鍵的原因之一。此外，機(jī)體的免疫狀態(tài)也在膿毒血癥的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)歸中起著重要的作用，在抗感染免疫中輔助性T細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子和T淋巴細(xì)胞分化、增殖、合成以及分泌的細(xì)胞因子起著重要的作用[9]。

IL-6是重要的炎性因子，主要由表皮細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞表達(dá)，在抑制機(jī)體炎癥反應(yīng)、引發(fā)炎癥發(fā)生等方面均可起到重要的作用，在嚴(yán)重?fù)p傷以及組織修復(fù)的過(guò)程中也起著十分重要的作用[10,11]。IL-10是由B細(xì)胞刺激激活的一種內(nèi)源性抑炎因子，由T細(xì)胞、B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，可以抑制免疫應(yīng)答[12]。IL-6、IL-10等炎癥因子的過(guò)量釋放表達(dá)，可能是引起ALI/ARDS，甚至發(fā)生難以控制的MODS的重要機(jī)制之一。本次研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組患者血清IL-6及IL-10水平均明顯高于對(duì)照組，提示IL-6及IL-10參與了膿毒血癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。膿毒血癥的病理過(guò)程中炎癥激活與免疫抑制共同存在，而免疫抑制則表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞增殖能力的降低，以輔助性淋巴細(xì)胞型反應(yīng)為主的中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞以及大量淋巴細(xì)胞的凋亡為主。目前，大量研究表明[13,14]，由于凋亡誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞丟失，導(dǎo)致膿毒血癥患者淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯的減少，機(jī)體免疫力也大大的降低。本研究發(fā)現(xiàn)，膿毒血癥患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均較正常對(duì)照組明顯的降低，也提示膿毒血癥患者存在T淋巴細(xì)胞的缺失。

研究表明，膿毒血癥時(shí)機(jī)體不僅處于促炎過(guò)程，同時(shí)還伴有免疫功能紊亂[15]。由于皮膚和脾內(nèi)的樹(shù)突狀細(xì)胞的大量喪失，抗原遞呈功能也隨之減弱；另外，加上廣泛性的淋巴細(xì)胞凋亡，抗體的產(chǎn)生明顯的減少，淋巴細(xì)胞激活出現(xiàn)障礙，使得機(jī)體免疫功能顯著的減弱或是受到抑制，導(dǎo)致免疫功能失調(diào)或紊亂。研究認(rèn)為[16]，膿毒血癥患者淋巴細(xì)胞凋亡與血漿的IL-6和IL-10水平有著十分密切的關(guān)系。IL-6可以調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化，具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、急性期反應(yīng)以及造血功能，在機(jī)體的抗感染免疫反應(yīng)中也起到重要的作用。IL-10是一種多功能負(fù)性調(diào)節(jié)因子。本研究結(jié)果顯示，IL-6、IL-10水平與CD4+/CD8+比值均呈顯著負(fù)相關(guān)，提示兩者生理作用表現(xiàn)為相互協(xié)同或相互制約，共同促進(jìn)了膿毒血癥的發(fā)生和發(fā)展。

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Expression of serum IL-6 and IL-10 in sepsis patients and influence on immune system

ZHAOXue-feng,WEIXiu-hua.

(IntensiveCareUnit,TheFifthCenterHospitalofTianjin,Tianjin300450,China)

Objective To investigate the expression of serum IL-6 and IL-10 in sepsis patients and influence on immune system.Methods 50 cases of sepsis patients in ICU in our hospital from June 2013-June 2015 were selected as the experimental group,50 healthy people to examination in our hospital from January 2015 -June 2015 were selected as control group.The serum IL-6,IL-10 and T cell subsets of the two groups were detected.The correlation between serum IL-6,IL-10 and the ratio of CD4+/CD8+were analysed.Results The serum IL-6 and IL-10 levels of the experimental group were significantly higher than that of the control group,the differences were statistically significant (P<0.05).Compared with the control group,CD3+,CD4+,CD8+and CD4+/CD8+in the experimental group were reduced to varying degrees,the difference was statistically significant (P<0.05).The results of correlation analysis showed that IL-6,IL-10 and the ratio of CD4+/CD8+was negatively correlated (r=-0.328,-0.452;P<0.05).Conclusion There were higher expression of IL-10 and IL-6,and lower expression of T cell subsets in serum of patients with sepsis;The effect is congenerousbetween the three common,which promote lesions progress.Therefore,the detection of IL-6,IL-10 and T lymphocyte subsets in the early stages can be an indicator in the diagnosis of sepsis,and help to estimate the prognosis.

sepsis;IL-6;IL-10;immune function

1007-4287(2017)02-0279-03

R446.6

A

2016-02-14)