利用胚胎發(fā)育潛能評估IVF實驗室培養(yǎng)系統(tǒng)的穩(wěn)定性分析

李 丹，郝好英，謝娟珂，宋小兵，殷寶莉，李昊雨，張翠蓮

（河南省人民醫(yī)院生殖中心（鄭州大學人民醫(yī)院生殖中心），河南 鄭州 450000）

體外受精-胚胎移植（IVF-ET）已經(jīng)過了多年發(fā)展。胚胎室、促進排卵技術包含IVF、胚胎以及配子凍融、精子選擇、胚胎植入前遺傳學診斷、胚胎選擇等技術也有所完善[1]。當前，IVF技術核心部分也相對成熟。使用何種方式，確保各種技術在相對穩(wěn)定的環(huán)境中完成操作，可保證實驗室質(zhì)量控制系統(tǒng)為每個IVF實驗室必須的。結(jié)合實際情況，本文對利用胚胎發(fā)育潛能評估IVF實驗室培養(yǎng)系統(tǒng)的穩(wěn)定性進行全面分析，現(xiàn)將具體結(jié)果匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

IVF-ET操作過程使用的材料主要為：卵子洗滌皿、離心錐形管、巴斯德吸管、培養(yǎng)皿、圓底試管。

病患選擇原則為：選擇2016年5月～2017年5月河南省人民醫(yī)院生殖中心收集的764例常規(guī)方案促排卵為研究對象。來源者均為40歲以下，結(jié)合批號不同，分為5個小組，對比不同批號之間耗材對于胚胎發(fā)育影響情況。長周期數(shù)為4569周期，平均進行5.98個周期.

1.2 方法

1.2.1 超排卵方式

使用常規(guī)方案完成超排卵工作。在受試者黃體中期，開展垂體調(diào)節(jié)工作。每天注射達菲林，直至2周，停藥后，每天肌肉注射促卵泡發(fā)育藥物，同時開展超聲檢測，分析卵泡發(fā)育情況。同時檢查受試者子宮內(nèi)膜厚度以及激素分泌情況。當患者最大卵泡直徑達到18mm以上后，其余3個卵泡在16mm以上，并且子宮膜厚度在8mm以上時。可停用促卵泡發(fā)育藥，肌注劑量為10000IU的HCG，并在36h后，于陰道B超監(jiān)視下進行穿刺取卵。

1.2.2 精液處理方式

對于質(zhì)量好的精子，使用非連續(xù)密度梯度離心法，處理精子。對于經(jīng)睪丸、附睪穿刺取得以及弱精癥、少精癥者，使用直接洗滌法處理精子。

1.2.3 胚胎觀察

依照IVF方案或者卵胞漿內(nèi)單精子注射法(ICSI法)完成受精.IVF法：吸取上游精子，與獲得液混合，加精濃度為10000條精子/卵，使用移液管，將精液緩慢加入到培養(yǎng)皿中完成受精。不需要早期觀察患者，加精后3-4小時撈蛋，拆蛋時間為加精后18～20小時；需早期觀察患者，加精后4小時，撈出并拆蛋，鏡下觀察卵子成熟以及第二極體排出情況。授精后17±1小時在倒置顯微鏡下觀察原核。授精后44±1小時觀察D2發(fā)育情況，68±1小時觀察D3發(fā)育情況，并挑選優(yōu)秀胚胎。

ICSI法：把卵細胞放置在透明質(zhì)酸酶內(nèi)，使用巴斯德吸管吹打卵子，以至于脫去顆粒細胞。注意卵子在透明質(zhì)酸酶中的時間不宜過久，通常在1min以下。防止卵子結(jié)構(gòu)受損。之后將處理好的成熟期卵子開展ICSI處理。完成受精后17±1h，分析卵子受精度，并在44±1以及68±1h內(nèi)觀察胚胎發(fā)育情況，并挑選優(yōu)秀胚胎。

完成受精后第三天，開展胚胎移植。倘若存在剩余胚胎，根據(jù)患者簽字情況選擇是否冷凍保存。

1.2.4 隨訪

完成移植之后2周，開展HCG檢查，查看是否妊娠。40d后，檢查胚胎著床情況。

1.3 觀察指標

分析兩組臨床資料情況。

分析兩組實驗室資料情況。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件進行分析，計數(shù)資料采用x2檢驗，計量資料采用t 檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 五組間臨床資料比較情況

詳細見表1。

表1 五組間臨床資料比較情況（±s）

表1 五組間臨床資料比較情況（±s）

小組類別 平均移植數(shù)（個） 種植率（%） 平均卵泡獲取數(shù)量（個） 子宮內(nèi)膜厚度（mm） 平均年齡（歲）1組（n=152） 2.33±0.71 18.03% 9.5±3.1 9.5±2.5 31.50±2.53 2組（n=158） 2.14±0.86 19.66% 8.6±3.0 11.2±2.3 30.88±4.80 3組（n=166） 2.40±0.55 20.50% 9.2±2.9 9.0±1.7 32.72±2.18 4組（n=112） 2.72±0.45 19.20% 9.8±3.6 10.6±3.4 30.86±2.18 5組（n=176） 2.07±0.55 18.62% 10.2±3.3 9.8±2.8 30.88±1.62 P＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05

2.2 組間實驗室資料比較情況

詳細見表2。

表2 組間實驗室資料比較情況（%）

3 討 論

體外受精-胚胎移植為最近幾年新興技術。就我國實際情況來講，當前IVF實驗室成功率僅為40.00%[2]。和以往相比，我國罹患不孕不育人數(shù)呈現(xiàn)出了逐年上升的趨勢，IVF成功率遠遠不能滿足日益增長的臨床需要。

對胚胎發(fā)育造成影響的因素主要為實驗室濕度、溫度、試劑質(zhì)量、耗材質(zhì)量以及CO2水平。由此能夠看出選擇合理的質(zhì)量控制監(jiān)測方式，保證胚胎系統(tǒng)穩(wěn)定性，為開展體外受精-胚胎移植的重要基礎。

當前實驗室中檢測培養(yǎng)方式主要包含人精子存活實驗、小鼠胚胎實驗等等[3]。小鼠胚胎咋實驗為早期實驗方式，此項實驗極易受到外部因素影響，結(jié)果精準性較低。

精子存活實驗有著取材方便，操作簡單等特征，但其敏感性較低，且對于人胚胎相關性在當前尚存在爭議。

以上方式的檢測對象均為精子短時間內(nèi)存活以及發(fā)育狀況，IVF實驗質(zhì)量要求為該質(zhì)量體系下胚胎和卵子受精發(fā)育全過程潛能[4]。由此可見，使用回顧性分析胚胎發(fā)育狀況以及構(gòu)建發(fā)育質(zhì)量控制圖，能夠更直接的觀察IVF實驗室質(zhì)量是否能夠達到要求[5]。

本實驗中，精子存活實驗室為基礎，使用胚胎發(fā)育潛能對于不同批號間實驗耗材穩(wěn)定性開展回顧性分析。本實驗指出，各項實驗室標準均符合當前我國IVF實驗室質(zhì)控標準。實驗室整體穩(wěn)定性為判定胚胎發(fā)育重要基礎。實驗室微環(huán)境改變情況對于胚胎發(fā)育遺傳學、生理學會產(chǎn)生重要影響。

上述影響情況均不能從胚胎形態(tài)學中發(fā)現(xiàn)。由此可見，創(chuàng)建一個相對完善的質(zhì)量管理體系，為IVF實驗室的重要基礎。

[1]杜湧瑞,張云山.質(zhì)量管理系統(tǒng)在體外受精實驗室中的應用[C].中華醫(yī)學會生殖醫(yī)學分會實驗室學組第三次年會.2013.

[2]黃國寧.IVF實驗室的管理及質(zhì)量控制[C].婦科內(nèi)分泌與輔助生殖論壇論文集. 2011.

[3]Dolinko A V,Farland L V,Kaser D J,et al.National survey on use of time-lapse imaging systems in IVF laboratories[J].Journal of Assisted Reproduction & Genetics,2017,106(3):e318-e318.

[4]Kai-Liang L I,Liu J.Design and Application of an Alarming System for CO_2 Incubator in IVF Laboratory[J].China Medical Devices,2016.

[5]Dolinko A V,Farland L V,Kaser D J,et al.National survey on use of time-lapse imaging systems (TLI-S) in IVF laboratories[C].Fertility and Sterility.2016:e318.