夾心ELISA檢測鹿粘膜病病毒的研究

孟日增　宋嶼竹　王嘉祺　劉金華　石建平

摘 要：為探討在鹿黏膜病診斷中，采用夾心ELISA檢測方法后，取得的臨床價值。選取某鹿場的160份糞樣為研究對象，均進行夾心ELISA檢測，抗體包被量100g/孔；包被液pH9.5CB；酶標抗體稀釋度1：400倍。觀察檢測結果。本次總共有160頭樣品，有52例顯示陽性，陽性率為32.5%。在檢測鹿黏膜病毒時，應用了雙抗體夾心ELISA檢測法，有效的彌補了上述檢測方法的缺點。研究表明，該檢測方法操作方便、簡單，具有較高的特異性、靈敏性。且操作安全、可靠。因此，值得在臨床上大力推廣。

關鍵詞： 鹿黏膜；病毒； 夾心ELISA；研究

中圖分類號：S858.25 文獻標識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20161132073

鹿黏膜病處于一種鹿傳染病，癥狀表現為頑固性、持續性腹瀉。近年來，隨著社會、經濟的快速發展，我國鹿養殖規模不斷擴大。本文的目的在于探討在鹿黏膜病診斷中，采用夾心ELISA檢測方法后，取得的臨床價值。對160份鹿糞樣進行檢測。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究中，選取的材料包括這幾種。MD高免血清、 MD免疫球蛋白提取；MD酶標抗體；MD陽性糞樣；MD陰性糞樣；160例被檢鹿糞樣。

1.2 方法

常規篩選，找出最佳的試驗條件。包括：抗體包被量、酶標抗體稀釋倍數、糞樣與酶標抗體溫度，以及封閉劑等；進行夾心ELISA抗體檢測時，應用的程序為：抗體包被—洗板—封閉—加待檢樣品—加酶標抗體—顯色—終止反應—判定結果[1]；進行特異性阻斷試驗。按照1：5MD的比例，混合高免血清與陰性血清，保持4℃。隔夜后，判斷OD值的變化，以此來確定試驗的特異性；取適量的陽性糞樣與陰性糞樣，重復試驗3次；對比電鏡與檢查實驗。取適量陽糞樣、陰性糞樣，給予2%的磷鎢酸負染，觀察結果，對比2種方法的符合率[2]。

1.3 統計學方法

將上述統計數據錄入到SPSS19.0統計學軟件中，其中計數資料采取率（%）表示，組間率對比采取x2檢驗或t檢驗；對比以P<0.05表示結果差異明顯，具有統計學意義。

2 結果

2.1 雙抗體夾心ELISA檢測MDV抗原的最適條件

經過篩選后，得出的最佳條件為：抗體包被量100g/孔；包被液pH9.5CB；酶標抗體稀釋度1：400倍。底物顯色溫度37℃，時間20min。

2.2 特異性阻斷實驗結果

MDV高免血清可阻斷陽性糞樣的顯色反應，OD值下降幅度超過50%。反應具有特異性。

2.3 交叉試驗結果

對冠狀病毒糞樣與輪狀病毒進行試驗，結果顯示均不顯色。呈陰性反應。

2.4 重復性試驗結果

本次進行了3次重復試驗，結果無顯著差異，可以看出該實驗方法具有較好的重復性。

2.5 與電鏡對比檢查試驗結果

本組研究中，在26份ELISA陽性糞樣中，有24份電鏡檢查MDV呈球狀，且大小不一，在40～60nm之間。另外，在8份ELISA陰性樣品中，不存在 MDV例子。

2.6 某地鹿場的鹿感染MDV檢查結果

本次總共有160頭樣品，有52例顯示陽性，陽性率為32.5%。

3 討論

當前，在鹿粘膜病檢查中包括多種方法。常見的有：病毒分離法、中和試驗法、瓊擴試驗。具體來講，應用病毒分離后，操作復雜，耗費時間多，從而減低了分離率。采用瓊擴試驗，具有操作簡單、方便的優勢，但是特異性差，檢出率不高，經常造成漏診的現行。中和試驗具有較高的準確性，安全可靠[3]。然而，要求采取雙份血清，無法進行早期診斷。同時，該方法在應用的過程中，花費的時間多，且消耗大量人力，比較麻煩。除此之外，應用中和試驗時，還要在實驗室培養細胞，且對實驗室的要求比較高。再加上昂貴的檢測費用，很難擴大應用。特別是針對基礎條件比較薄弱的基層醫院來講，實施的難度更大。在這種情況下，就會對本病的檢測與凈化造成障礙。

本組研究中，在檢測鹿黏膜病毒時，應用了雙抗體夾心ELISA檢測法，有效的彌補了上述檢測方法的缺點。研究表明，該檢測方法操作方便、簡單，具有較高的特異性、靈敏性。且操作安全、可靠。因此，值得在臨床上大力推廣。

參考文獻

[1]屈月，葛俊偉，唐麗杰，等.豬傳染性胃腸炎病毒雙抗體夾

心ELISA檢測方法的建立[J].中國預防獸醫學報，2013，16

（5）：364-368.

[2]楊俊興，曹琛福，曾少靈，等.牛病毒性腹瀉病毒雙單克隆抗體夾心ELISA檢測方法的建立及初步應用[J].動物醫學進展，2013，18（5）：11-16.