5種常見致病菌菌液OD值與其活菌數相關性研究

林靜，何佳茜，尚翠玲，孟佳麗，李昕，金天明

比濁法又稱濁度測定法，是一種光散射測量技術，通過測量透過懸浮質點介質的光強度來確定懸浮物質濃度的方法。在實際應用中，比濁法的用途非常廣泛，有研究者利用細菌的不同特點，對采用紫外-可見分光光度測定細菌濃度的方法進行探討，在一定濃度內吸光度與濃度呈良好的線性關系[1-7]。在本次試驗中，比濁法主要用作測量5種常見致病菌菌液中的細菌數量（包括活菌、死菌），并結合平板計數法，進一步彌補比濁法計數的缺點，得到快速細菌計數的方法[8]。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗所需菌種：大腸桿菌、巴氏桿菌、表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、牛鏈球菌，均為本實驗室保存，所需培養基見表1。

表1 菌種與其對應培養基

1.2 方法

1.2.1 菌液OD值的測定

（1）一級種子液的制備。將復蘇后的菌種用接種環挑取單個菌落于相應的液體培養基進行擴大培養，搖床37℃恒溫培養過夜，為一級種子液。

（2）二級種子液的制備。吸取250 μL一級種子液加入到6 mL液體培養基中，吹打混勻，為二級種子液。

（3）生長曲線分析儀的設置。將Bioscreener全自動生長曲線分析儀測定程序設置為培養溫度37℃，時長18 h，平均30 min/次，波長600 nm。

（4）OD值的測定。用移液槍分別吸取200 μL二級種子液依次放入儀器測試專用孔板中，并對測試所用孔進行標記。分別取1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、18 h時的細菌菌液，測定其OD600值。

1.2.2 菌落平板計數

采用平板菌落計數法。將菌液進行 10、102、103、……、10n倍比稀釋，每稀釋度重復3次，吸取1 mL稀釋后的菌液注入對應的固體培養基上，并用無菌涂棒涂布均勻后放入37℃恒溫箱過夜培養。