舌癌組織腫瘤壞死因子受體相關因子6表達變化及臨床意義

鄧卓峰，周崢，齊娟

(1武漢市婦女兒童醫療保健中心，武漢 430015；2江漢大學；3武漢大學口腔醫院)

舌癌組織腫瘤壞死因子受體相關因子6表達變化及臨床意義

鄧卓峰1，周崢2，齊娟3

(1武漢市婦女兒童醫療保健中心，武漢 430015；2江漢大學；3武漢大學口腔醫院)

目的 探討腫瘤壞死因子受體相關因子6(TRAF6)在舌癌發生、發展中的作用。方法 選擇65例舌癌患者的癌組織及癌旁正常組織，采用免疫組化法檢測其TRAF6表達，分析舌癌組織TRAF6表達與患者臨床病理參數及預后的關系。結果 舌癌組織TRAF6陽性表達47例(72.3%)，癌旁正常組織為13例(20.0%)，二者比較P<0.01。舌癌組織TRAF6陽性表達與患者性別、年齡及腫瘤組織分化程度、直徑均無關(P均>0.05)，與淋巴結轉移及臨床分期相關(P均<0.01)。舌癌組織TRAF6陽性者5年中位生存時間為27.00個月、5年生存率為6.38%，陰性者分別為49.50個月、27.78%，兩者比較P均<0.05。結論 舌癌患者癌組織TRAF6高表達，其表達變化參與舌癌的進展；舌癌組織TRAF6表達對判斷患者預后可能具有重要意義。

舌癌；腫瘤壞死因子受體相關因子6；臨床病理特征；預后

舌癌的發病率及病死率高居口腔癌癥的第一位，其發生、發展的分子學機制尚未完全闡明[1]。手術是治療舌癌的主要方法，但由于腫瘤細胞常侵襲頜面部器官，患者術后多存在明顯的容貌和功能破壞，嚴重影響其生存質量[2,3]；放化療由于毒副作用較大且特異性較低，難以特異性地殺傷腫瘤細胞[4]。研究發現，腫瘤壞死因子受體相關因子6(TRAF6)在多種腫瘤組織中高表達[5，6]。但其在舌癌組織中的表達變化鮮見報道。為此，我們進行了如下研究。現分析結果并報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2000年9月～2010年1月武漢大學口腔醫院收治的舌癌患者65例，男39例、女26例，年齡32～64(47.22±4.62)歲。所有患者首次發病，術前未接受過放療、化療及生物免疫性治療，術后經組織病理檢查明確診斷。腫瘤組織分化程度：低分化12例、中分化24例、高分化29例，臨床分期：Ⅰ期12例、Ⅱ期30例、Ⅲ期16例、Ⅳ期7例，淋巴結轉移25例，腫瘤直徑<3 cm 46例、≥3 cm 19例。所有患者臨床資料完整，術后隨訪均>5年。

1.2 舌癌組織及癌旁正常組織TRAF6表達檢測 采用免疫組化法。分別取舌癌組織及癌旁正常組織(距離腫瘤邊緣>5 cm)，10%甲醛固定，常規石蠟包埋，4 μm厚切片；將石蠟切片脫蠟、水化，PBS沖洗后用蒸餾水浸泡，然后行抗原修復；滴加過氧化酶阻斷溶液，室溫孵育15 min以阻斷內源性過氧化物酶活性；滴加動物非免疫血清，室溫孵育10 min；滴加1∶100的TRAF6一抗稀釋液(美國Santa Cruz公司)，室溫孵育1 h；PBS沖洗后滴加羊抗兔IgG二抗(美國Santa Cruz公司)，室溫孵育10 min；PBS沖洗后滴加鏈霉菌抗生物素—過氧化物酶溶液，室溫孵育10 min；DAB顯色后自來水沖洗，蘇木素復染后再次自來水沖洗，乙醇脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封片。隨機選擇20個高倍鏡(×400)視野。采用雙盲法由兩位經驗豐富的病理科醫師計數TRAF6陽性表達。TRAF6陽性表達定位于細胞質中，呈棕黃色沉淀。以陽性細胞百分比評分與陽性細胞染色強度綜合判斷結果[7]：①陽性細胞百分比<1%為0分，≥1%～<10%為1分，≥10%～<30%為2分，≥30%～<60%為3分，≥60%為4分；②無陽性染色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。兩者之和0～2分為陰性，3～7分為陽性。分析舌癌組織TRAF6陽性表達與患者臨床病理參數及5年生存率的關系。

1.3 統計學方法 采用SPSS18.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 舌癌組織及癌旁正常組織TRAF6陽性表達比較 舌癌組織TRAF6陽性表達47例(72.3%)，癌旁正常組織為13例(20.0%)，二者比較P<0.01。 見插頁Ⅱ圖5。

2.2 舌癌組織TRAF6陽性表達與患者臨床病理參數的關系 舌癌組織TRAF6陽性表達與患者性別、年齡及腫瘤組織分化程度、直徑均無關(P均>0.05)，與淋巴結轉移及臨床分期相關(P均<0.01)，即臨床分期高、有淋巴結轉移患者TRAF6陽性表達率高于臨床分期低、無淋巴結轉移患者。見表1。

表1 舌癌組織TRAF6陽性表達與患者臨床病理參數的關系

2.3 舌癌組織TRAF6表達與患者5年生存率的關系 舌癌組織TRAF6陽性表達者與陰性表達者5年中位生存時間分別為27.00、49.50個月，5年生存率分別為6.38%，27.78%，兩者5年生存率比較P<0.05。見圖1。

圖1 舌癌組織TRAF6表達與患者5年生存率的關系

3 討論

TRAF6是腫瘤壞死因子超家族和Toll樣/IL-1受體超家族的重要接頭分子，由530個氨基酸組成，主要包括兩個結構域，即TRAF6結構域(C端)和螺旋卷曲激活結構域(N端)[8]，介導TRAF分子之間形成同源/異源二(多)聚體。研究表明，TRAF6處于多條信號通路向下游傳導的關鍵節點，TRAF6激活后可同時激活NF-κB和MAPK信號通路[9]。NF-κB信號通路在舌癌組織中異常激活，靶向下調NF-κB活性可抑制舌癌細胞增殖、侵襲，加速舌癌細胞凋亡[10]。MAPK信號通路在舌癌組織中亦存在異常激活，MAPK活性下調可抑制舌癌細胞增殖，促進舌癌細胞凋亡[11～13]。盡管如此，目前尚無NF-κB或MAPK特異性抑制劑用于舌癌治療的報道，其主要原因可能為單純阻斷一條信號通路難以達到對舌癌的有效治療，必須同時阻斷NF-κB和MAPK信號通路才有可能對舌癌發揮治療作用。

以往研究發現，TRAF6在多種腫瘤組織中存在異常高表達，特異性抑制TRAF6可顯著抑制腫瘤細胞增殖并促進其凋亡[14～16]。本研究結果表明，舌癌組織TRAF6存在異常高表達；舌癌組織TRAF6陽性表達與患者性別、年齡及腫瘤組織分化程度、直徑均無關，與臨床分期及淋巴結轉移有關，即臨床分期高、有淋巴結轉移者TRAF6陽性表達率高于臨床分期低、無淋巴結轉移者；進一步研究發現，舌癌組織TRAF6陽性表達與患者預后有關，TRAF6陽性表達者5年生存率明顯低于TRAF6陰性表達者。上述結果提示，TRAF6高表達可能促進舌癌的發生、發展和侵襲，早期檢測TRAF6表達有助于判斷患者預后。同時阻斷NF-κB、MAPK等信號通路有可能是TRAF6的作用機制。

綜上所述，舌癌組織中TRAF6異常高表達，其表達增加可促進舌癌的發生、發展，早期檢測TRAF6表達對判斷舌癌患者預后可能具有重要意義。

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