木鱉子中絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯測定*

鄭 蕾，申旭霽，張 寒，張 彥，汪興軍

(西安醫學院 藥學院 藥物研究所，陜西 西安 710021)

木鱉子為葫蘆科植物木鱉Momordicacochinchinensis(Lour.)Spreng.的干燥成熟種子，具有散結消腫、攻毒療瘡之功效[1]。始載于宋《開寶本草》，是蒙醫的習用藥材，主要含脂肪酸類[2]、皂苷類[3]、木鱉子素[4]、α-菠菜甾醇、木鱉子酸[5]等。蒙醫用于治療食欲不振、惡心、偏頭疼等癥見希拉癥[6]，中醫多外用治療癬[7]、痔瘡[8]等，現代研究顯示其具有抗腫瘤[9-10]、抗炎[11]、抗病毒等作用。木鱉子是一味毒性藥材，多供外用，很少內服，內服多進行相應的炮制后再入方劑，主要有兩種炮制方法，制霜[1]和去殼[12]。目前，對木鱉子炮制方法及原理的研究報道較少。絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯是木鱉子皂苷降解后的次級苷[13]，作者期望通過對木鱉子種殼和種仁中絲石竹皂苷-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯進行含量測定，并以此為基礎為木鱉子藥材炮制方法研究提供支持。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

木鱉子藥材：購買自西安天昦中藥材市場，經生藥教研室張寒副教授鑒定為木鱉子；絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯：批號111956-201301，純度為97.5%，中國食品藥品檢定研究院；甲醇：色譜純，市售；其余試劑均為分析純，市售；實驗所用水為超純水。

電子分析天平：QVINTIX-1CN，賽的利斯科學儀器有限公司；恒溫水浴箱：HSY2-SP，北京市永光明醫療儀器廠；超純水機：Micro pure standard，賽默飛世爾科技(中國)有限公司；超聲清洗器：KQ-250B，昆明市超聲儀器有限公司；高效液相色譜儀：Agilent 1220，安捷倫科技有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)，流動相：甲醇-φ(甲酸)=0.2%水溶液(體積比為78∶22)，流速：1 mL/min；UV檢測波長：210 nm，柱溫：室溫，進樣量：10 μL。在該色譜條件下，絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯與木鱉子中其它成分得到較好的分離，無干擾，專屬性強，結果見圖1。

t/minb圖1 絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯對照品(a)和木鱉子供試品(b)色譜圖

1.2.2 對照品溶液配制

精密稱取絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯標準品約10 mg，置于10 mL的容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，制成1 mL含1.03 mg的溶液，即得。

1.2.3 供試品溶液配制

取木鱉子仁粗粉2.0 g，精密稱定于濾紙筒中，置索氏提取器中，加石油醚(60～90 ℃)-氯仿(體積比為1∶1)80 mL，回流提取1 h，濾過，棄去濾液，濾渣揮干溶劑，轉移至錐形瓶中，加體積分數為60%甲醇60 mL超聲提取1 h，超聲溫度40 ℃，濾過，濾液蒸干。殘渣加水10 mL溶解并轉移至具塞試管中，加濃硫酸0.6 mL，搖勻，閉塞。置沸水浴加熱2 h，取出，放冷，濾過。棄去濾液，試管中沉淀加甲醇少許洗至10 mL量瓶中，濾紙上的沉淀加甲醇8 mL，洗至同-10 mL量瓶中，加硫酸一滴，調pH=2；密塞，60 ℃恒溫水浴4 h，取出，放冷，加甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2 結果與討論

2.1 方法學考察

根據《中國藥典》2015版(四部)藥品質量標準分析方法驗證指導原則，考察樣品的線性關系、精密度、重復性、加樣回收及含量測定等。

2.1.1 線性關系考察

精密量取上述對照品貯備液5 mL，定容于10 mL量瓶中，搖勻，得質量濃度為0.515 mg/mL的溶液；再吸取該溶液5 mL，定容于10 mL量瓶中，搖勻，得質量濃度為0.258 mg/mL的溶液，依次稀釋制備成質量濃度分別為0.129、0.064 4 mg/mL的系列對照品溶液。將上述對照品溶液按1.2.1色譜條件進行測定，以絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯峰面積為縱坐標(Y)，絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯對照品質量濃度為橫坐標(X)繪制標準曲線，見圖2。得到的線性回歸方程為：Y=2 769.1X+126.48，相關系數r=0.999 7。結果表明絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯在6.44×10-2～1.03 mg/mL線性關系良好。

ρ/(mg·mL-1)圖2 絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的標準曲線圖

2.1.2 精密度實驗

精密吸取質量濃度為0.129 mg/mL的絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯對照品溶液10 μL，重復進樣6次，測定峰面積，計算RSD為1.97%。

2.1.3 重復性實驗

精密稱取相同批次的木鱉子仁粗粉6份，按1.2.3方法平行制備供試品溶液，進行測定，計算得w(絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)分別為0.301%，0.305%，0.297%，0.305%，0.303%，0.299%，RSD為1.06%(n=6)。

2.1.4 穩定性實驗

按1.2.3方法制備供試品溶液，將供試品溶液分別貯存在室溫與冰箱冷藏室(4 ℃)中，在0、1、2、3、5、7 d分別平行測定2次w(絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)。絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯各時間點測定的質量分數均未超過0 d質量分數值±5.0%，表明供試品溶液在7 d內穩定性良好，穩定性實驗結果見表1。

表1 穩定性實驗結果

2.1.5 加樣回收實驗

分別精密稱取已知質量分數為0.305%的樣品6份，每份約1 g，分別精密加入絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯對照品溶液(1.53 mg/mL)1 mL，即1.53 mg，按1.2.3方法制備溶液，測定其峰面積，計算回收率。結果平均回收率為99.30%，RSD為1.02%(n=6)。表明該方法的回收率良好，詳見表2。

表2 加樣回收率實驗結果(n=6)

2.2 絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯測定

按擬定的含量測定方法測定3批木鱉子種仁及種殼中w(絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)，結果見表3。

表3 木鱉子中w(絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)測定結果

3 結 論

研究發現絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯在木鱉子仁中含量較小，木鱉子殼中未檢測到。通過前處理工藝的水解及甲醇解后木鱉子仁中w(絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)≈0.3%，而木鱉子殼中仍無法檢測到。

采用本研究建立的方法，測定3批木鱉子仁、木鱉子殼中w(絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)，結果顯示此方法測定結果準確，重復性好，操作簡便，可作為木鱉子炮制工藝研究中質量控制的方法。

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社,2015:65-66.

[2] 闞連娣,胡全,巢志茂,等.木鱉子脂肪油不皂化物質的化學成分研究[J].中國中藥雜志,2006,31(17):1441-1444.

[3] MASAYO IWAMOTO,HIKARU OKABE,TATSUO YAMAUCHI,et al.Studies on the constituents ofMomordicacochinchinensisSpreng.I.Isolation and characterization of the seed saponins,momordica saponins I and II[J].Chem Pharm Bull,1985,33(2):464-478.

[4] 鄭碩,李格娥,顏松民.木鱉子素的純化和性質研究[J].生物化學與生物物理學報,1992,24(4):311-316.

[5] MURAKAMI T,NAGASAWA H,ITOKAWA H,et al.The structure of a new triterpene,momordic acids,obtained fromMomordicacochinchinensissprenger[J].Tetrahedron Letters,1966,7(42):5137-5140.

[6] 李英格.蒙藥十三味紅花密訣散治療偏頭痛30例[J].中國民間療法,2005,13(4):33-34.

[7] 焦新彩,時淑華.木鱉子軟膏的制備及應用[J].中國醫院藥學雜志,1997,17(7):325.

[8] 姜春英,祝頌.三木痔速愈藥盒治療痔瘡的臨床研究[J].山東中醫藥大學學報,2005,29(4):274-276.

[9] ZHENG L,ZHANG Y M,LIU Y P,et al.MomordicacochinchinensisSpreng.seed extract suppresses breast cancer growth by inducing cell cycle arrest and apoptosis[J].Molecular Medicine Reports,2015,12(4):6300-6310.

[10] ZHENG L,ZHANG Y M,ZHAN Y Z,et al.Momordicacochinchinensisseed extracts suppress migration and invasion of human breast cancer ZR-75-30 cells via down-regulating MMP-2 and MMP-9[J].Asian Pac J Cancer Prev,2014,15(3):1105-1110.

[11] 楊生,黃繼強,梁勇,等.單磷酸阿糖腺苷交聯物及植物毒素蛋白抗乙型肝炎病毒的體外研究[J].解放軍醫學雜志,1995,20(3):196-199.

[12] 劉振國,明珠爾,貢斯琴,等.蒙藥傳統炮制介紹[J].中藥材,1995,18(6):294-297.

[13] 商慧娟,高其品,王玉光.高效液相色譜法測定木鱉子中3-O-6′-O-甲基-β-D-葡萄糖醛酸絲石竹苷的含量[J].藥物分析雜志,2002,22(2):125-127.