HPLC測定五味子丸中五味子醇甲的含量

李 巖王 彤趙俊華

(1.吉林省白城市食品藥品檢驗所,白城 137000: 2. 吉林省白城市實驗高級中學,白城 137000)

HPLC測定五味子丸中五味子醇甲的含量

李 巖1王 彤2趙俊華1

(1.吉林省白城市食品藥品檢驗所,白城 137000: 2. 吉林省白城市實驗高級中學,白城 137000)

目的建立五味子丸中五味子醇甲的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法 譜柱Agilent C18,流動相:甲醇:水(65:35);檢測波長:250nm。柱溫:30℃,流速:1.0ml/min結果五味子醇甲在0.1076—1.614μg范圍內,線性良好(r=0.9998)。【1】平均加樣回收率為99.6%,RSD%＝0.2%。結論本方法簡便準確,重復性好,可用來控制五味子丸的質量。

五味子醇甲;五味子丸;高效液相色譜法。

五味子丸由五味子、肉蓯蓉(酒制)、茯苓、菟絲子(酒炒)、車前子(鹽制)、巴戟天(制)中藥組成,滋補陰氣,填精益髓。用于腎氣不足,腰膝疼痛,記憶衰退,頭暈耳鳴,四肢無力。原質量標準【3】中不含含量測定項五味子醇甲,為了控制五味子丸的質量,研究設立了高效液相色譜法(Hplc)測定五味子丸中五味子的有效成分五味子醇甲的含量,此方法操作很簡單,數據比較穩定,結果很準確

1 材料與儀器

1.1 材料 五味子丸批號:20141012、20141013、20141014;五味子丸陰性對照藥材(亳州光大藥業股份有限公司);對照品:五味子醇甲(中國藥品生物制品檢定所,批號11548-20140203共含量測定用);含量測定所用的甲醇為青島試劑廠生產的色譜純,其它試劑均為分析純。

1.2 使用的儀器 Agilent高效液相色譜儀;工作站為Sepμ 3000色譜:島津uv-2600紫外可見分光光度計

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:AgilentC18色譜柱(4.6×250mm,5μm);柱溫30℃。流速:1.0ml/min、流動相:甲醇:水(55:45);檢測波長:250nm。理論板數按五味子醇甲峰計算不得低于3500。【2】【7】

2.2 對照品溶液的配置:精密稱取對照品五味子醇甲適量加甲醇使溶解,制成每1ml含50μg 的五味子醇甲對照品溶液。

2.3 供試品溶液的配置:取重量差異項下的本品5g,精密稱定加甲醇50ml加熱回流1小時,加甲醇補足減失總量。濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇10ml使溶解,置25ml棕色容量瓶中,再加甲醇稀釋至刻度,作為供試品溶液。

2.4 陰性對照試驗及檢測波長的確定:按照五味子丸的處方制備方法配置缺少五味子藥材的模擬樣品。按照處理供試品溶液的方法制成五味子陰性對照溶液。將五味子陰性對照溶液、五味子供試品溶液及五味子醇甲對照品溶液分別注入液相色譜儀器中再進行檢測。島津uv-2600紫外可見分光光度計對五味子醇甲進行掃描,經掃描五味子醇甲在紫外光譜區250nm處有最大吸收,因此選定250nm為檢測波長。五味子丸供試品中五味子醇甲的光譜吸收圖標顯示,供試品的最大吸收波長與對照品完全一致,而五味子陰性對照定光譜吸收在與五味子醇甲峰相同的保留時間處沒有吸收峰。因此說明配方中的其它藥品五味子醇甲的檢測無擾,見圖 1 。

2.5 線性關系考察 分別精密吸取50μg/ml的五味子醇甲對照品溶液2.0,5.0,10.0,15.0,20.0,30.0μl,注入高效液相色譜儀(Hplc)中,按照上述條件測定吸收峰面積,縱坐標設為峰面積積分值,橫坐標設為對照品的進樣量(μg),繪制出標準曲線,得到五味子醇甲回歸方程Y=3.6571×106X+6782r=0.9998,可見,五味子醇甲在0.1076—1.614μg 范圍內呈現良好的線性關系。

圖1 HPLC色譜圖

表1 五味子丸中五味子醇甲的加樣回收試驗結果

2.6 藥物穩定性的試驗 精密吸取同一份供試液,依次在0,3,6,12,24小時進行測定,共考察24小時。五味子醇甲峰面積平均的RSD為0.85%,說明五味子醇甲至少在24小時內比較穩定,能滿足測試要求。

2.7 精密度試驗 精密吸取同一份供試品溶液10μl,連續重復進樣9次,測定吸收峰面積,結果供試品中五味子醇甲的評均含量0.062mg/g,RSD為1.0%(n=9)。表明精密度良好

2.8 系統重復性試驗 取對同一批量的樣品按以上敘述含量測定方法連續進行9次平行試驗測定,計算其含量,結果供試品中五味子醇甲的平均含量為0.062mg/g,相對標準偏差為為1.0%(n=9)。

2.9 方法回收率試驗 精密稱取已知明確含量的供試品5份,每份為5g,分別精密注入五味子醇甲對照液(50μg/ml).2ml,按上述試驗方法進行測定,計算其回收率,結果見表1。

2.10 樣品測定結果 按照前述方法配置供試品溶液與對照品溶液,分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl,注入高效液相色譜儀,測定計算其含量,樣品測定的結果見表2。

表2 五味子丸中五味子醇甲的含量測定結果

3 討論

3.1 《中西新藥轉正》15冊【4】,衛生部藥品標準《中藥成方制劑》[S]第一冊【2】,五味子丸均沒有對五味子醇甲的含量進行測定。國家食品藥品監督管理局,《中成藥地方標準上升國家標準部分》內科[S]2005:9-13【1】對五味子醇甲進行了薄層色譜鑒別,但無含量測定。《中西新藥轉正》15冊五味子丸【4】,中有關五味子醇甲的含量測定方法是薄層掃描法,但是薄層掃描法,靈敏度沒有高效液相法準確,靈敏。因此我們決定采用高效液相色譜法來測定五味子丸的五味子醇甲的含量。

3.2在供試品溶液的制備過程中, 為了保證樣品中五味子醇甲的充分提取, 本實驗考察了相關文獻【5-19】報道方法后, 采用加入 70%乙醇、 90%甲醇、 100%甲醇超聲提取,70%乙醇、90%甲醇、 100%甲醇回流提取并對不同提取時間進行了試驗,結果表明,70%乙醇、 90%甲醇、 100%甲醇超聲提取,提出雜質比較多; 70%乙醇、 90%甲醇,不能完全提取充分,100%甲醇回流1小時, 提取效果佳, 故選定此方法。

3.3樣品檢測中, 曾以不同比例的甲醇-0.1%醋酸,乙腈-水,甲醇- 水-冰醋酸為流動相等度和梯度洗脫, 結果表明,以甲醇-0.1%醋酸,乙腈-水,甲醇- 水-冰醋酸洗脫時分離效果均不好,而《中華人民共和國藥典》2010年版五味子項下測定五味子醇甲以甲醇-水(65:35)為流動相,測定時發現樣品分離度差,經反復實驗,選定甲醇-水(55:45)作為流動性進行測定,結果顯示供試品溶液峰形較好,五味子醇甲能夠達到基線分離,理論板數按五味子醇甲峰計算不得低于3500。故最終采用此流動相。【2.5.6.7.8.11】

3.4 本實驗是對五味子丸的質量標準進一步提高,原標準無含量測定,現選擇增加五味子醇甲的含量測定,可以在質量標準對五味子藥材的來源質量進行控制,從而達到對產品的質量進行更好的監控。

[1] 國家食品藥品監督管理局,《中成藥地方標準上升國家標準部分》內科[S]2005:9-13

[2] 《中國藥典》一部[S]2010:61

[3] 衛生部藥品標準《中藥成方制劑》[S]第一冊,1998;35

[4] 《中西新藥轉正》第15冊五味子丸[S];109

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[8] 潘建鋒;莊波陽 HPLC法測定太太靜心助眠口服液中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量［J］福建醫藥雜志, 2013.02

[9] 楊錫 倪琳 HPLC法同時測定生脈飲中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素［J］中成藥, 2012 (5):120.

[10] 周竹琇 不同產地生五味子飲片中五味子醇甲含量比較 ［J］《亞太傳統醫藥》, 2014 (23)

[11] 王芳 半仿生提取-高效液相色譜法測定芪白平肺膠囊中五味子醇甲的含量［J］海峽藥學, 2013 (25)-8.85.

[12] 趙艷 HPLC法測定三子降酶膠囊中五味子醇甲的含量［J］中國藥物警戒,2014 06.

[13] 趙鷹 HPLC同時測定五子顆粒中補骨脂素和五味子醇甲含量［J］天津藥學,2014、 03.

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[18] 陳麗萍 五味通心膠囊質量標準研究［J］生物技術世界,2014、 05.15.

[19] 潘國良 市售生脈飲中五味子醇甲含量的比較分析［J］中國處方藥,2014.1.30.

HPLC determination of the content of fructus schisandrae alcohol armour in fructus schisandrae pill

Li Yan1, Wang Tong2, Zao Junhua1
(1.The baicheng city of jilin province food and drug inspection. Baicheng city of jilin province, baicheng 137000;2. The baicheng of jilin province experimental high school, baicheng 137000)

Objective to establish determination method of the content of fructus schisandrae alcohol armour in fructus schisandrae pill.Methodsusing HPLC spectrum of Agilent using C18 column, mobile phase: methanol: water (65:35). : detection wavelength 250 nm. Column temperature: 30 ℃, velocity: 1.0 ml/min .Resultsfructus schisandrae alcohol armour, within the scope of 0.1076-1.614 mu g, good linear (r = 0.9998).【1】the average sample recovery rate was 99.6%, RSD % = 0.2%.Conclusionthis method is simple and accurate, and reproducible, can be used to control the quality of the fruit of Chinese magnoliavine pill.

fructus schisandrae alcohol armour; Fructus schisandrae pill; High performance liquid chromatography.

R19[文獻表示碼]A

1672-5654(2015)2(C)-0000-00

李巖(1981,11—),男,民族：漢族 籍貫：吉林白城,學歷：大學本科 職稱：主管藥師 從事10多年的藥品檢驗工作，現主要從事藥品檢驗及綜合性規范的制定工作。

期刊郵寄地址：吉林省白城市食品藥品檢驗所 白城市海明西路50號，郵編：137000收件人：李巖，電話：1384609650