結(jié)球菊苣葉中多糖的提取工藝研究

劉佳欣，劉玲翠，王小巍，王力

（沈陽化工大學(xué)，遼寧 沈陽 110000）

結(jié)球菊苣（Cichorium intybus L.）屬菊科2年生或多年生草本植物。起源于地中海沿岸中亞和北非，歐美國家普遍種植，以意大利種植最廣[1-3]。外觀是紅色的，顏色鮮艷[4]。菊苣營養(yǎng)豐富，其中所含的野萵苣甙和山萵苣素等苦味物質(zhì)，具有清肝、利膽、催眠等作用[5]。結(jié)球菊苣營養(yǎng)價值高，食用部分含蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、維生素，維生素B1、維生素B2、維生素C 、鈣、磷、鐵，食用菊苣能降低血脂和膽固醇、活躍骨髓造血功能，對防治心腦血管硬化、糖尿病、高血壓、營養(yǎng)不良性貧血等疾病有一定的作用[6-7]。綜上所述，結(jié)球菊苣是一種新興優(yōu)質(zhì)特菜，有良好的社會效益和經(jīng)濟效益[8]。

1 實驗部分

1.1 實驗對象

新鮮結(jié)球菊苣采購于遼寧省沈陽市中藥材研究基地。

1.2 實驗試劑

98%濃硫酸、氫氧化鈉、苯酚、酒石酸鉀鈉、3,5-二硝基水楊酸、亞硫酸鈉、考馬斯亮藍。

1.3 儀器

紫外可見分光光度計(WFZ-UV 2000尤尼柯上海儀器有限公司)，數(shù)顯恒溫水浴鍋(HH-4國華電器有限公司)，電子天平(FA1104沈陽杰龍儀器有限公司)，真空干燥箱(DZG-6050SA上海森信實驗儀器有限公司)。

2 實驗方法

2.1 材料處理

將結(jié)球菊苣葉洗凈，烘干，粉碎，過40目篩，保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 多糖含量測定

2.2.1 對照溶液的匹配

準確稱取標準葡萄糖10 mg于100 mL容量瓶中，加入蒸餾水定容至刻度，配0.1 mg/mL的葡萄糖溶液。

2.2.2 總糖的標準曲線繪制

取葡萄糖標準品10 mg于10 mL的容量瓶中加水至刻度線，混勻，取該液1 mL入10 mL容量瓶中加水至刻度線，即得0.1 mg/mL葡糖糖標準液。

取濃度為0.1 mg/mL葡糖糖標準液0, 0.2, 0.4,0.6, 0.8, 1.0 mL分別加入試管中，加蒸餾水至2 mL,再加入 6 % 苯酚1.0 mL、加濃硫酸5 mL，搖勻放置5 min，沸水浴15 min，取出冷卻至室溫，在490 nm波長下測其吸光度，繪制標準曲線。

2.2.3 還原糖的標準曲線繪制

精密吸取0.1 mg/mL葡糖糖標準液0, 0.1, 0.2,0.3, 0.4, 0.5 mL，各補加蒸餾水至0.5 mL，加DNS試劑1.5 mL, 沸水浴5 min，取出冷卻后加入4 mL蒸餾水，在540 nm波長下測其吸光度，繪制標準曲線。

2.3 提取溫度對多糖得率的影響

精確稱取1 g結(jié)球菊苣粉末放置在圓底燒瓶中，以料液比1:40（g/mL），置于數(shù)顯恒溫水浴鍋中，溫度分別控制在75、80、85、90、95 ℃，提取 2 h，抽濾，取得上清液，離心，將上清液定容，測定吸光度值。考察提取溫度對多糖得率的影響。

2.4 提取時間對多糖得率的影響

精確稱取1 g結(jié)球菊苣粉末放置在圓底燒瓶中，在試驗 2.3項所得的最佳提取溫度下（85 ℃），以料液比1:40 （g/mL），置于數(shù)顯恒溫水浴鍋中，分別提取30、60、90、120、150 min，抽濾，取得上清液，離心，將上清液定容，測定吸光度值。考察提取時間對多糖得率的影響。

2.5 料液比對多糖得率的影響

精確稱取1 g結(jié)球菊苣粉末放置在圓底燒瓶中，在試驗2.3和2.4項所得的最佳條件下，分別以料液比 1:20、1:30、1:40、1:50（g/mL）于試管中，置于數(shù)顯恒溫水浴鍋中，提取 2 h，抽濾，取得上清液，離心，將上清液定容，測定吸光度值。考察料液比對多糖得率的影響。

2.6 提取次數(shù)對多糖得率的影響

精確稱取1 g結(jié)球菊苣粉末放置在圓底燒瓶中，在試驗2.3、2.4、2.5項所得最佳條件下，分別用水提取1、2、3次置于數(shù)顯恒溫水浴鍋中，提取 2 h，抽濾，取得上清液，離心，將上清液定容，測定吸光度值。考察提取次數(shù)對多糖得率的影響。

3 結(jié)果與討論

3.1 標準曲線的測定

根據(jù)所測試的結(jié)果計算得出多糖得的線性回歸方程為：Y= 5.00714x+ 0.008 81(R2=0.9982)，式中x為葡糖糖的濃度，Y為溶液的吸度。

圖1 結(jié)球菊苣總糖標準曲線

圖2 結(jié)球菊苣還原糖標準曲線

3.2 提取溫度對多糖得率的影響

當料液比1:40，提取時間t=120 min，從圖3可以看出，多糖得率隨溫度的上升而上升，當提取溫度高于 85 ℃時，由于溫度過高，得率明顯下降，可能的原因是由于高溫使多糖結(jié)構(gòu)被破壞。因此，最佳提取溫度為85 ℃。

圖3 不同提取溫度下的多糖得率

3.3 提取時間對多糖得率的影響

當料液比1:40，提取溫度T=85 ℃，由圖4可知隨著時間的繼續(xù)延長，多糖提取率呈上升趨勢，當提取時間超出120 min，隨著時間的延長，多糖提取率下降，可能的原因是長時間的提取使多糖降解，因此考慮綜合因素提取時間為 120 min最佳。

圖4 不同提取時間下的多糖得率

3.4 料液比對多糖得率的影響

當提取時間t=120 min，提取溫度T=85 ℃，由圖5可知隨著料液比的增加，提取多糖的得率也增加。當料液比增加到1:40時，多糖的得率達到最大值，其后保持平穩(wěn)狀態(tài)，而且當料液比提高時，后續(xù)的濃縮操作工作量會大大加重,因此提取的最佳料液比為1:40。

3.5 提取次數(shù)對多糖得率的影響

當提取時間為120 min，提取料液比為1:40，提取溫度為85 ℃，由圖6可知隨著提取次數(shù)的增大，多糖得率逐漸降低。多次提取不僅耗時、耗能而且增加后續(xù)濃縮操作的工作量，因此最佳的提取次數(shù)為1次。

圖5 不同料液比下的多糖得率

圖6 不同提取次數(shù)下的多糖得率

4 結(jié) 論

通過單因素試驗對結(jié)球菊苣葉中的多糖進行提取，得到的最佳提取條件為：提取溫度 85 ℃，提取時間為120 min，料液比1:40，提取次數(shù)1次。

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