十全育真湯對衰老小鼠學習記憶的影響

朱云超 詹光杰 袁德培 楊付明 黃 瓊

(湖北民族學院醫學院，湖北 恩施 445000)

十全育真湯對衰老小鼠學習記憶的影響

朱云超 詹光杰1袁德培 楊付明 黃 瓊

(湖北民族學院醫學院，湖北 恩施 445000)

目的 探討十全育真湯對D-半乳糖所致衰老小鼠學習記憶的影響。方法 昆明小鼠60只，隨機分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、模型組及對照組，每組12只。對照組按500 mg·kg-1·d-1腹腔注射生理鹽水，其他各組注射等量D-半乳糖。高劑量組、中劑量組、低劑量組注射D-半乳糖的同時按15、10、5 g·kg-1·d-1十全育真湯灌胃，模型組、對照組等量蒸餾水灌胃。各組自由飲食，連續飼養50 d。給藥40 d后行Morris水迷宮實驗；50 d后檢測各組小鼠皮膚羥脯氨酸、心腦組織丙二醛(MDA)、脂褐質(LP)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)含量，采用雙抗體夾心ELISA法檢測小鼠血清中白細胞介素(IL)-2及IL-6含量。結果 Morris水迷宮實驗，十全育真湯各組潛伏期比模型組較明顯減少(P<0.05)，模型組小鼠穿越平臺的次數比其他各組小鼠少(P<0.05)。對照組及十全育真湯各組MDA與LP含量低于模型組(P<0.05)，SOD與GSH-Px的活性明顯高于模型組(P<0.05)；十全育真湯組小鼠皮膚羥脯氨酸含量都明顯低于對照組(P<0.05)，高于模型組(P<0.05)；十全育真湯組小鼠血清中IL-2、IL-6含量顯著高于對照組和模型組(P<0.05)，模型組IL-2、IL-6比對照組要低(P<0.05)。結論 十全育真湯在改善學習記憶功能，清除體內自由基抗氧化，增強機體免疫能力等方面都有較好的作用。

十全育真湯；D-半乳糖；衰老

十全育真湯出自《醫學衷中參西錄》治陰虛勞熱方篇，為清代名醫張錫純所創〔1〕。作為中西醫匯通學派的代表醫家，張錫純在人體病理生理的中西理論匯通及藥物的運用、功效等方面積累了豐富的經驗〔2〕。在許多疾病的病因證治張氏既有理論創新又有臨證實踐，認為虛勞之因在于氣血遲滯，治虛勞必先治血痹，據此擬定了十全育真湯〔3〕。十全育真湯由野臺參、生黃芪、生山藥、知母、玄參、生龍骨、生牡蠣、丹參、三棱及莪術組成，具有益氣養陰，活血化瘀之功，對肌膚甲錯，形體羸瘦，飲食不壯筋力，或自汗，或咳逆，或喘促，或寒熱不時，或多夢紛紜，精氣不固等均有較好療效〔4〕。筆者也常用此方治療多種慢性病、虛損病，每獲良效。本實驗采用注射D-半乳糖建立亞急性衰老小鼠模型，服用十全育真湯，觀察對衰老小鼠在益智、抗氧化及增強免疫力等方面的影響，探討其延緩衰老機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級昆明種小鼠(雌雄各半)，購自湖北省實驗動物研究中心〔生產許可證號：SCXK(鄂)2008-0005〕。4～6周齡，體重(20.6±2.5)g，常規飼養。

1.2 藥品與儀器 十全育真湯由野臺參12 g、生黃芪12 g、生山藥12 g、知母12 g、玄參12 g、生龍骨12 g(搗細)、生牡蠣12 g(搗細)、丹參6 g、三棱4.5 g及莪術4.5 g組成，煎液由湖北民族學院附屬民大醫院藥劑科提供，相當于生藥30%(2 g/ml)的液體,瓶裝密封消毒貯存于4 ℃備用。D-半乳糖(晶美公司)，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、脂褐質(LP)及羥脯氨酸檢測試劑盒(南京建成)，白細胞介素(IL)-2、IL-6 ELISA試劑盒(美國Sigma公司)，其他化學試劑為國產分析純試劑(湖北恩施樂之塬科技公司)。DMS-2 Morris水迷宮系統(中國醫學科學院藥物研究所)，全自動酶標儀(美國Thermo公司)，FA1640電子天平(上海天平儀器廠)，紫外分光光度儀(美國Beckman公司)，電動玻璃勻漿機(寧波新芝科技股份有限公司)。

1.3 動物分組、造模及給藥 小鼠60只，隨機分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、模型組及對照組，每組12只。對照組按500 mg·kg-1·d-1腹腔注射生理鹽水，其他各組注射等量D-半乳糖〔5〕。高劑量組、中劑量組、低劑量組在注射D-半乳糖的同時按15、10、5 g·kg-1·d-1十全育真湯煎液灌胃，模型組、對照組等量蒸餾水灌胃。各組自由飲食，連續飼養50 d。

1.4 Morris水迷宮實驗 給藥40 d后，參考文獻〔6，7〕進行Morris水迷宮實驗,整個水迷宮訓練歷時10 d，上下午各1 次。水迷宮直徑185 cm、高55 cm，內壁黑色，水深35 cm，水溫控制在23℃左右。訓練前將水迷宮水池分為A、B、C、D四個相等區域，將高度為33 cm，直徑8 cm 的平臺置于C處，沒入水下2 cm。訓練時小鼠面對池壁，依次從A、B、C、D入水點放入水中，記錄找到平臺的時間(逃避潛伏期)，超過2 min還未找到平臺的小鼠，則引至平臺(時間記為2 min)，訓練9 d后撤除平臺。第10天小鼠放入水，記錄2 min內跨越原平臺相應位置的次數。

1.5 腦組織GSH-Px、SOD、MDA、LP及皮膚羥脯氨酸檢測 50 d后眼眶取血，處死小鼠，小心取出腦組織放入冰凍生理鹽水(0.9%)沖洗拭干，迅速用精密分析天平稱取重量后剪碎，制備成10%勻漿，離心后取上清低溫保存備用。并及時取小鼠背部皮膚約1 cm2，去毛去脂，切碎晾干，精密稱取30 mg備用。按照試劑盒說明書進行GSH-Px、SOD、MDA、LP及羥脯氨酸測定。

1.6 ELISA法檢測衰老小鼠血清IL-2、IL-6 將收集的小鼠血清及時處理或低溫貯存備用，參考試劑盒說明書檢測IL-2、IL-6。

1.7 統計學處理 采用SPSS16.0軟件進行單因素方差分析。

2 結 果

2.1 十全育真湯對小鼠空間探索、定位航行能力的影響 模型組平均潛伏期較對照組顯著增加(P<0.05)，十全育真湯各組平均潛伏期要比模型組顯著減少(P<0.05)。在空間探索能力的測試中，模型組穿越平臺的平均次數要比其他各組少(P<0.05)。見表1。

2.2 十全育真湯對腦組織氧化指標的影響 模型組MDA、LP含量顯著高于其他各組(P<0.05)，SOD、GSH-Px活性明顯低于其他各組(P<0.05)。高劑量組、中劑量組MDA、LP少于低劑量組， SOD、GSH-Px活性則高于低劑量組(P<0.05)。見表2。

表1 十全育真湯對小鼠空間探索、 定位航行的影響

與模型組比較:1)P<0.05；與對照組比較:2)P<0.05；表3同

表2 十全育真湯對腦組織抗氧化性的影響±s,n=12)

與模型組比較:1)P<0.05；與低劑量組比較:2)P<0.05

2.3 十全育真湯對皮膚羥脯氨酸含量及血清IL-2、IL-6含量的影響 皮膚羥脯氨酸含量對照組明顯高于其他各組(P<0.05)，然而十全育真湯各組小鼠明顯高于模型組(P<0.05)。十全育真湯組小鼠血清中IL-2、IL-6含量顯著高于對照組和模型組(P<0.05)，模型組小鼠血清中的IL-2、IL-6比對照組要低(P<0.05)。見表3。

表3 十全育真湯對皮膚羥脯氨酸，血清中IL-2、 IL-6含量的影響

3 討 論

衰老又稱老化，是機體隨年齡的增長，自身功能減退，體內各種生理功能退行性退變。中醫學對衰老的認識早在《黃帝內經》中就有記載，認為衰老是由脾氣虛、腎氣虛、脾腎兩虛、精氣神虛衰、精血津液虧虛及陰陽失調等所致〔8〕。現代醫學則認為衰老是代謝所產生過多的氧自由基造成細胞膜的破壞，使蛋白質(酶)變性，并會導致一系列神經功能損傷，造成認知障礙，加速衰老〔9〕。明代虞摶《醫學正傳》認為“腎氣盛則壽延，腎氣衰則壽夭”，腎虛為衰老之根本原因，而腎主骨生髓，髓通腦，所以衰老早期體現在學習記憶能力的下降。本實驗表明衰老小鼠在空間定位、空間記憶等認知方面是較差的。服用十全育真湯的小鼠平均潛伏期明顯縮短，撤去平臺后穿越原平臺次數也增加，說明十全育真湯衰老小鼠的學習記憶能力有比較好的恢復。中醫認為脾胃為后天之本，氣血生化之源，為延年益壽之本〔8〕，健脾可調節機體代謝，改善免疫功能，減輕體內自由基的損傷。本實驗表明十全育真湯的抗衰老作用存在一定的量效關系。在羥脯氨酸含量檢測中發現，十全育真湯還可有效地恢復衰老小鼠皮膚中的羥脯氨酸的含量。衰老的另一顯著特征是免疫能力下降，本實驗發現十全育真湯能顯著增加小鼠體內的IL-2和IL-6的含量，表明其可增強衰老小鼠的免疫功能，有助于促進細胞的分裂增殖。

1 張錫純,著.王云凱,李彬之,韓 煜,重校.醫學衷中參西錄〔M〕.石家莊:河北科學技術出版社,2002:23-6.

2 楊付明.張錫純配伍運用活血化瘀法據探析〔J〕.湖北民族學院學報(醫學版),2003;20(3):49-51.

3 郝麗莉.論張錫純學術思想與十全育真湯的衍用〔J〕.中醫藥學報,1998;5(1):9.

4 吳 曦.張錫純十全育真湯治驗3則〔J〕.江蘇中醫藥,2008;40(10):71-2.

5 姜國良,于 曉,徐 愷，等.腹腔和皮下注射D-半乳糖衰老大鼠模型分析〔J〕.中國老年學雜志,2013;33(5):1101-3.

6 王緒平,咼登俊,陳 宇,等.Morris水迷宮實驗評價血管性癡呆大鼠模型的學習記憶能力〔J〕.中華中醫藥學刊,2013;31(1):99-100.

7 劉金鳳,聶 坤,栗振杰,等.Morris水迷宮測評方法的改進及對快速老化癡呆小鼠SAMP8認知功能的再評價〔J〕.中國中醫急癥,2013;22(1):5-7.

8 冀小偉,張連城.中醫對衰老的認識〔J〕.中醫雜志,2013;54(17):1527-9.

9 李 燕.銀耳多糖的抗衰老作用及其機制研究〔D〕.上海:第二軍醫大學,2004.

〔2015-09-28修回〕

(編輯 曹夢園)

國家中醫藥管理局公共衛生專項資金項目(財社〔2010〕91號)；湖北民族學院博士科研啟動基金項目(MY2010B004)

朱云超(1971-)，男，碩士，講師，主要從事延緩衰老及防治老年病的應用研究。

R285.5

A

1005-9202(2017)05-1054-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.05.006

1 湖北民族學院科技學院