乳腺浸潤性導管癌中Survivin和Caspase3的表達與細胞增殖的關系

郭 通 葛 斌 高睿心 劉 軍 陳文靜 閆衛剛 王婧欣 史蓬亮 王曉燕

(齊齊哈爾市第一醫院乳腺科，黑龍江 齊齊哈爾 161005)

乳腺浸潤性導管癌中Survivin和Caspase3的表達與細胞增殖的關系

郭 通 葛 斌 高睿心 劉 軍 陳文靜 閆衛剛 王婧欣 史蓬亮 王曉燕

(齊齊哈爾市第一醫院乳腺科，黑龍江 齊齊哈爾 161005)

目的 檢測乳腺浸潤性導管癌中生存素(Survivin)和天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白(Caspase)3的表達，關注二者在不同臨床病理特征中的表達差異及與Ki67標記的增殖指數的關系。方法 84例乳腺浸潤性導管癌患者的臨床資料及術后蠟塊組織作為觀察組，16例乳腺增生術后切除的組織作為對照組。應用免疫組化SP法檢測兩組中Survivin、Caspase3和Ki67的表達。結果 Survivin、Caspase3和Ki67在兩組中的表達差異顯著。觀察組中Survivin、Caspase3和Ki67的陽性率與腫瘤的最大徑、組織學分級密切相關，Survivin和Caspase3的陽性率與脈管累犯密切相關。線性相關分析顯示觀察組中Survivin和Ki67增殖指數呈正相關性，Caspase3和Ki67增殖指數呈負相關。結論 乳腺浸潤性導管癌中Survivin和Caspase3異常表達參與病變的形成和進展，二者可以調節Ki67標記的腫瘤細胞增殖。

乳腺浸潤性導管癌；Survivin；Caspase3；增殖指數

乳腺浸潤性導管癌腫瘤形成和進展過程中呈細胞高增殖狀態〔1〕。生存素(Survivin)是凋亡抑制因子(IAPs)的成員，不但抑制凋亡，還參與細胞增殖調控，與腫瘤的進展密切相關〔2,3〕。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白(Caspase)3是Caspase家族中重要的凋亡執行者之一，其介導的信號傳導途徑在細胞凋亡過程中發揮作用，Caspase3還具有調控細胞增殖等生物學作用〔4,5〕。本文針對乳腺浸潤性導管癌術后組織中Survivin和Caspase3表達進行檢測，關注二者在不同臨床病理特征中的表達差別及與Ki67標記的增殖指數的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年1月至2015年10月我院確診乳腺浸潤性導管癌女性患者84例為觀察組，留取臨床資料及術后的蠟塊組織，并經病理醫師確診。納入均符合WHO中的診斷標準。年齡37～78歲，平均56.7歲。16例乳腺增生術后切除的組織作為對照組，均為女性，年齡35～68歲，平均52.3歲。

1.2 Survivin、Caspase3和Ki67表達的檢測 兩組術后均行甲醛溶液固定，常規脫水后石蠟包埋，切取4 μm膠片，Survivin、Caspase3和Ki67的檢測應用免疫組化SP法，二氨基聯苯胺(DAB)顯色，嚴格按說明書操作，減少誤差。

1.3 Survivin、Caspase3和Ki67結果的判斷方法 Survivin和Caspase3的陽性部位是細胞質，Ki67的陽性部位是細胞核，以染成棕黃色為陽性細胞，在200倍鏡下先選擇上皮細胞集中且染色較為明顯的區域進行觀察，在400倍鏡下選擇3個視野進行計數，計算陽性率，取平均值，Survivin和Caspase3陽性率以<10%定為陰性，≥10%陽性，Ki67增殖指數以<25%定為陰性，≥25%陽性。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件進行χ2檢驗、線性相關分析。

2 結 果

2.1 兩組中Survivin、Caspase3和Ki67陽性率的比較 Survivin、Caspase3和Ki67在兩組中表達差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

2.2 觀察組Survivin、Caspase3和Ki67陽性率在不同臨床特征中的比較 觀察組中Survivin、Caspase3和Ki67的陽性率與腫瘤的最大徑、組織學分級密切相關，Survivin和Caspase3的陽性率與脈管累犯密切相關。見表2。

表1 兩組Survivin、Caspase3和Ki67陽性率比較〔n(%)〕

表2 觀察組Survivin、Caspase3和Ki67陽性率在 不同臨床特征中的比較〔n(%)〕

2.3 觀察組中Survivin、Caspase3和Ki67的相關性 觀察組中Survivin和Ki67增殖指數呈正相關性(r=0.53,P<0.05)，Caspase3和Ki67增殖指數呈負相關性(r=-0.48,P<0.05)。

3 討 論

乳腺腫瘤中浸潤性導管癌是最常見的一類，腫瘤形成異型腺管，浸潤性生長，其分級依靠腫瘤細胞異型性、腺管形成趨勢和細胞的核分裂象，因此分級高的腫瘤異型性明顯、腺管成分少、核分裂象多，呈現高增殖及較低的分化狀態。與凋亡和增殖相關的基因和蛋白參與病變的整個過程〔6,7〕。Survivin是凋亡抑制蛋白家族中最小的成員，包含兩個特定的結構：N端桿狀病毒IAP重復區域(BIR)單拷貝、C端疏水α螺旋。Survivin 蛋白與中心粒微管蛋白形成有效結合后，Survivin 蛋白能發揮促進細胞增殖的作用〔8,9〕。有研究認為當細胞需要快速增殖時,生長因子大量分泌，激活Survivin的表達，而Survivin蛋白具有C端疏水α螺旋和 N 端 BIR 結構，當 C端螺旋與中心粒結合時，N 端BIR與Caspase3相互作用，使細胞凋亡受阻〔10,11〕。Caspase是一組特異性切割天冬氨酸的半胱氨酸蛋白酶，根據其成員在細胞凋亡過程中扮演的角色分為二類，一類被稱為起始者，主要在細胞凋亡早期發揮作用，另一類被稱為執行者，在細胞凋亡的晚期發揮作用〔12,13〕。Caspase3是凋亡的執行者，是家族級聯反應中最下游的基因。近年研究顯示Caspase3除了參與凋亡，還在細胞的分化、腫瘤細胞增殖及放療的抵抗中發揮作用〔14〕。也有觀點認為Survivin可能是Caspase的一種內源性抑制劑〔15〕。

本實驗提示Caspase3低表達、Survivin和Ki67高表達是腫瘤形成的促進因素。Survivin和Caspase3異常表達可能對腫瘤的脈管侵犯有一定的促進作用。Survivin在發揮生物學作用時對腫瘤細胞的凋亡進行有效抑制，細胞凋亡程度和數量減少〔16,17〕，此時與凋亡相對應的細胞增殖活躍，腫瘤呈進展狀態〔18〕。王亞利等〔19〕研究認為Survivin抗細胞凋亡作用的機制可能是抑制蛋白重復序列分子中的氨基酸殘基Trp67、Pro33和Cys84與Caspase3、Caspase7結合，進而抑制Caspase的活性，抑制細胞凋亡，此時對細胞的異常增殖和細胞的惡性轉化提供了空間。

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〔2015-12-17修回〕

(編輯 苑云杰)

齊齊哈爾科學技術計劃項目(No.SFZD2012103)；齊齊哈爾科學技術計劃項目(No.SFZD-2012038)

郭 通(1980-)，男，碩士，副主任醫師，主要從事乳腺腫瘤研究。

R737

A

1005-9202(2017)05-1160-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.05.055