蒙藥檳榔十三味丸中總黃酮含量的測定

黃雪秋+趙玉英

摘 要：運用紫外分光光度法在510nm波長下以硝酸鋁-亞硝酸鈉-氫氧化鈉作為顯色試劑、蘆丁作為對照品，測定蒙藥檳榔十三味丸（高尤-13）中總黃酮含量。結(jié)果表明，在0～0.076mg/ml濃度范圍內(nèi)黃酮含量與吸光度局呈良好的線性關(guān)系，回歸方程：y=0.011x+0.014，r2=0.999。通過不同濃度乙醇溶液溶解樣品發(fā)現(xiàn)，80%乙醇提取的樣品所含黃酮量最高，其黃酮含量為5.352μg/g；平均回收率為105.18%。

關(guān)鍵詞：檳榔十三味丸；總黃酮量；蘆丁

DOI：10.16640/j.cnki.37-1222/t.2017.04.042

黃酮類化合物通常以游離態(tài)或糖苷的方式存在，是植物生長過程中所產(chǎn)生的一類次生代謝物，黃酮類化合物普遍存在于植物體各個部位，由于不同植物或同一植物不同部位的黃酮類化合物都不相同，是以黃酮類化合物具有數(shù)量、種類繁多，結(jié)構(gòu)復雜的特點，因其特有的化學結(jié)構(gòu)而對生物體的細胞產(chǎn)生許多重要的生化作用[1]。黃酮類化合物具有廣泛的生物活性，隨著人們對黃酮類化合物理化性質(zhì)日益深入的探究，發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物對抗炎、抗病毒、抗輻射、解熱、保肝以及對腎臟、心腦血管、腫瘤、癌癥等方面的疾病均有顯著作用[2-6]。

蒙藥檳榔十三味丸（高尤-13）由檳榔、廣棗、沉香、丁香、木香、干姜、胡椒、當歸、篳茇、肉豆蔻、制草烏、紫硇砂、葶藶子13種草藥精制而成，適用于心悸、失眠，精神失常、游走刺痛等病癥[7-8]。本實驗以蘆丁為對照品，以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH為顯色劑，在510nm處測定蒙藥檳榔十三味丸中黃酮的總含量。

1 材料與方法

（1）材料：蘆丁（百靈威化學試劑公司）、 檳榔十三味丸（內(nèi)蒙古蒙藥股份有限公司，批號：100319） 、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等（分析純）。（2）儀器：722S可見分光光度計（上海精密科學儀器有限公司）、KQ-250B超聲波清洗器、電子天平（精天-JA1003B）。

2 試驗方法

（1）實驗原理。黃酮類化合物與NaNO2和Al（NO3）3在堿性條件下可形成紅色的穩(wěn)定絡(luò)合物，且在510 nm處有最大吸收，該配合物與黃酮類物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系。

（2）標準曲線繪制。1）配制蘆丁標準溶液：精密稱取蘆丁標準品24mg，置于100ml容量瓶中，加入80%乙醇溶解，定容。2）配制濃度為5%的亞硝酸鈉溶液和濃度為10%的硝酸鋁溶液。3）制備標準曲線：精確量取0ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml蘆丁標準液，分別置于25ml容量瓶中，加入5%的亞硝酸鈉溶液0.6ml，靜置5分鐘，加入10%的硝酸鋁溶液0.6ml，靜置5分鐘，加入4%的氫氧化鈉溶液8ml后加水定容，在510nm處測定吸光度。以吸光度為縱坐標，橫坐標為含量，繪制標準曲線，計算出回歸方程。回歸方程為y=0.011x+0.014，r=0.9994，表明在0～0.076mg/ml濃度范圍內(nèi)黃酮含量與吸光度局呈良好的線性關(guān)系。

（3）供試品的制備。準確稱取4份質(zhì)量為1.0g的檳榔十三味丸，分別置于50ml容量瓶中，用60%乙醇溶液、70%乙醇溶液、80%乙醇溶液和90%的乙醇溶液溶解樣品，在超聲波中超聲震蕩30分鐘后取出，定容。

（4）檳榔十三味丸中總黃酮含量的測定。準確吸取1ml樣品溶液于25ml容量瓶中，加入5%的亞硝酸鈉溶液0.6ml，放置5分鐘后，加入10%的硝酸鋁溶液0.6ml，再放置5分鐘，加入8ml 4%的氫氧化鈉溶液，加水定容，在510nm處測定其吸光度，并帶入標準曲線計算總黃酮量，重復測定三次，計算平均值。結(jié)果見表1。

由表1可知，80%乙醇溶解的樣品所含黃酮量最多。

（5）精密度試驗。精確吸取1ml 80%乙醇提取的樣品，根據(jù)2.4的方法測定，重復操作5次，計算 RSD=0.203%。

（6）回收率試驗 。80%乙醇溶解的樣品中加入蘆丁標準品，進行回收率實驗，結(jié)果示于表2中。

由此表2可以得出，用此種方法測定檳榔十三味丸黃酮含量的結(jié)果是令人滿意的。平均回收率為105.18%，RSD=0.02%。

（7）穩(wěn)定性試驗。精確吸取2ml 80%乙醇提取的檳榔十三味丸樣品，按2.4方法，分別在5、10、15、20、25、30min時，測定吸光度。RSD=0.85%。

3 結(jié)果與討論

本文運用分光光度法，以蘆丁對照品，亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑，在510nm處測定蒙藥檳榔十三味丸中黃酮的總含量。結(jié)果顯示，80%乙醇溶解的檳榔十三味丸中的所含黃酮量最高，其黃體酮含量為5.352 μg/g，且精密度、回收率、穩(wěn)定性試驗顯示，分光光度法測定蒙藥檳榔十三味丸方法操作簡單，結(jié)果精確可靠，且在30分鐘內(nèi)穩(wěn)定。

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