甲狀腺乳頭狀癌中ret癌基因的表達

謝英娜

（遼寧省沈陽市第九人民醫院病理室，遼寧 沈陽 110024）

甲狀腺乳頭狀癌中ret癌基因的表達

謝英娜

（遼寧省沈陽市第九人民醫院病理室，遼寧 沈陽 110024）

目的觀察研究人類甲狀腺乳頭狀癌中ret癌基因的表達及其意義。方法選取本院2010年3月至2016年6月近6年腫瘤科收治的43例甲狀腺乳頭狀癌確診患者（乳頭狀癌組）及其癌旁正常組織（對照組），選取同期30例甲狀腺濾泡型癌（濾泡型癌組），29例甲狀腺腺瘤（腺瘤組）術后病理標本（甲狀腺組織）。通過反轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）檢測兩組4組入選者中ret癌基因的活化情況。結果入選甲狀腺乳頭狀癌的43例患者中共出現14例（32.56%）ret/ptc癌基因呈陽性表達。濾泡型癌組、腺瘤組與對照組經檢測ret/ptc癌基因均呈陰性表達。ret/ptc癌基因呈陽性表達的患者平均年齡顯著小于ret/ptc癌基因呈陰性表達的患者（P<0.05）。結論甲狀腺乳頭狀癌與ret癌基因的活化表達有著重要聯系，ret癌基因的活化可能與該病的發生發展有關。且ret/ptc癌基因呈陽性平均年齡較小，其腫瘤呈現的體積較小發展程度較輕，其腫瘤組織細胞分裂繁殖能力較弱，經治療患者遠期預后能力較強，ret癌基因的活化表達可成為判定患者甲狀腺乳頭狀癌的生物學行為指標。

ret基因；表達；ptc基因；甲狀腺腫瘤；甲狀腺乳頭狀癌

近年來，國外專家研究稱甲狀腺乳頭狀癌患者的癌細胞中多會有ret癌基因活化表達，該形式被命名為ret/ptc癌基因[1]。因此本次實驗本院選取2010年3月至2016年6月近6年腫瘤科收治的43例甲狀腺乳頭狀癌確診患者及其癌旁正常組織，選取同期30例甲狀腺濾泡型癌，29例甲狀腺腺瘤的術后病理標本，通過反轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）檢測兩組4組入選者中ret癌基因的活化情況。現進行如下報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取本院2010年3月至2016年6月近6年腫瘤科收治的43例甲狀腺乳頭狀癌確診患者（乳頭狀癌組）及其癌旁正常組織（對照組），選取同期30例甲狀腺濾泡型癌（濾泡型癌組），29例甲狀腺腺瘤（腺瘤組）術后病理標本（甲狀腺組織）。4組患者在性別、年齡、病程等一般資料方面均沒有顯著性差異（P>0.05），因而具有可比性。

1.2 納入排除標準

1.2.1 納入標準[2]：①患者的確診均為術后病理標本經病理學檢查確診；②所有患者的檢查資料、術后隨訪資料完整；③手術治療前未接受放化療、免疫治療等；④研究對象了解本研究的目的、意義并簽訂知情同意書。

1.2.2 排除標準[3]：①手術前使用放療或者化療治療的患者；②合并其他部位原發性腫瘤的患者；③病歷及隨訪資料不完整的患者。

1.3 方法：TaqDNA聚合酶、引物、Trizol試劑、RT試劑盒、蛋白酶K由南京諾唯贊生物科技有限公司提供。

RNA提取：甲狀腺乳頭狀癌、癌旁正常組織、甲狀腺濾泡型癌、甲狀腺腺瘤組織分別放入離心管中，其中裂解液500 μL并使用高速分散器（湖北康龍電子科技有限責任公司）將組織粉碎，放置一段時間后吸取上清液放入其他離心管里（在冰浴中進行），加入3 mol/L MaAC、氯仿、飽和酚并混勻，靜置15 min，12000 r/min離心10 min。吸取上清液放入其他離心管(內置異丙醇)，-20 ℃下過夜。第2天離心后棄上清液，加入0.5 mL異丙醇及裂解液，-20 ℃下靜置1 h。離心后棄上清液，加入乙醇靜置在空氣中直至干燥。加入DEPC水測定其樣品濃度。

RT反應條件：42 ℃30 min、99 ℃5 min、5 ℃5 min，反應體積為10 μL。PCR反應體積為50 μL，設空白對照。

PCR反應條件：94 ℃預變性2 min后，94 ℃ 30 s、59 ℃ 30 s、72 ℃1 min共27個循環，72 ℃延伸10 min。

反應產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳后經電泳凝膠成像分析系統采集圖像，測定灰度值[3]。

1.4 統計學方法：利用統計學處理軟件SPSS13.0進行處理分析，采用卡方檢驗對數據資料進行對比分析，計量資料比較采用t檢驗，以P＜0.05來顯示結果差異性顯著，具有統計學意義。

2 結 果

2.1 ret/ptc癌基因呈陽性表達患者中組織學分級為Ⅱ級的有9例（20.93%），組織學分級為Ⅲ級的有2例（4.65%）。見表1。

表1 四組入選者ret/ptc癌基因表達比較

2.2 乳頭狀癌組經臨床資料研究得ret/ptc癌基因呈陽性表達的患者平均年齡（27.68±5.36）歲，ret/ptc癌基因呈陰性表達的患者平均年齡（44.37±13.93）歲。呈陽性患者平均年齡顯著小于陰性表達的患者（P<0.05）。呈陽性表達的患者腫瘤大小、性別、淋巴結是否轉移與呈陰性患者無顯著差異（P>0.05）。

3 討 論

經諸多實驗證實，腫瘤的演進、發生多由機體內一連串的基因發生突變導致的，這些改變將極大破壞或影響正常細胞的調控、增生等機制。甲狀腺上皮性腫瘤由于其濾泡上皮發生病變，經不同因素影響最終發展成為床生物學行為、表型等各不相同的腫瘤。本次實驗中乳頭狀癌多為多灶性，經由淋巴道轉移擴散，而濾泡性癌多為單灶性，其多經由侵襲血管完成轉移擴散，上述兩種癌細胞具備不一樣的生物學特征，不同的甲狀腺腫瘤演進、發生多由機體內一連串的對應特定基因發生突變導致的[4]。

而本次實驗研究甲狀腺乳頭狀癌與ret癌基因活化表達間的聯系。ret癌基因在10q11.2區，外顯子共21個，其主要表達合成酪氨酸蛋白激酶受體，該受體能通過胞膜[5]。其增殖分化調節主要由胞外信號傳導來調控。當10號染色體的H4基因與RET癌基因融合發生突變后形成ret/ptc癌基因，其表達合成的蛋白延長ret癌基因合成的受體激活時長，下游信號將這一指令進行傳導，導致細胞惡性轉化，經多方證實其幾乎只在甲狀腺乳頭狀癌中表達。與本次實驗結果一致。

綜上所述，甲狀腺乳頭狀癌與ret癌基因的活化表達有著重要聯系，ret癌基因的活化可能與該病的發生發展有關。且ret/ptc癌基因呈陽性平均年齡較小，其腫瘤呈現的體積較小發展程度較輕，其腫瘤組織細胞分裂繁殖能力較弱，經治療患者遠期預后能力較強，ret癌基因的活化表達可成為判定患者甲狀腺乳頭狀癌的生物學行為指標。

[1] 趙堅強,郭良,戚曉平,等.RET原癌基因p.C618Y突變的家族性甲狀腺髓樣癌一家系的臨床診治分析[J].中華醫學雜志,2013,93 (6):440-444.

[2] 潘瑞蓉,張海鳴,王濟芳,等.RET/PTC3在甲狀腺乳頭狀癌中的表達[J].廣東醫學,2016,37(4):577-579.

[3] 葉艷,武學潤,趙樹君,等.RET/PTC1重排和 BRAFV600E突變甲狀腺乳頭狀癌細胞系原位裸鼠模型比較[J].中華內分泌代謝雜志,2016,15(1):62-66.

[4] 俞靈鶯,馬麗珍,屠巧峰,等.熒光定量PCR檢測甲狀腺結節針吸細胞甲狀腺乳頭狀癌的原癌基因1,3的重排[J].中華內分泌代謝雜志,2014,30(10):830-833.

[5] 濮亞斌,李剛強.甲狀腺乳頭狀癌組織中酪氨酸激酶受體第16外顯子基因突變情況及意義[J].山東醫藥,2014,48(7):22-23.

R737.9

B

1671-8194（2017）05-0022-02