犬晶狀體超聲乳化術對術眼及其角膜內皮組織學的影響

廖天利，張葉楓

（1.重慶市黔江區畜牧獸醫局，重慶 黔江 409000；2.西南大學榮昌校區動物醫學系，重慶 榮昌 402460）

犬晶狀體超聲乳化術對術眼及其角膜內皮組織學的影響

廖天利1，張葉楓2

（1.重慶市黔江區畜牧獸醫局，重慶 黔江 409000；2.西南大學榮昌校區動物醫學系，重慶 榮昌 402460）

本試驗通過對健康的試驗犬實施晶狀體超聲乳化術，然后制作術眼角膜切片，觀察該手術對犬眼角膜內皮組織學的影響。結果表明，超聲乳化術后犬只恢復情況良好，術眼在一周內痊愈；術后7d角膜內皮層變形，呈波浪狀，有些出現斷裂、脫落，內皮細胞空泡化；術后14d角膜內皮細胞空泡化更明顯，甚至角膜內皮層連同后彈力層一同丟失，基質層變形、脫出。

犬；超聲乳化術；角膜內皮；病理切片

有研究表明[1]，犬發生白內障的幾率大于人，對于犬白內障治療的研究大體分為藥物治療和手術治療。超聲乳化術是目前最先進的手術治療方式，但手術過程中對角膜內皮造成損傷是該手術最大的缺點。本試驗通過實驗造模，了解超聲乳化術后術眼的恢復情況及角膜內皮的組織學變化，評估該手術對角膜內皮的影響。

1 材料與方法

1.1 藥品與儀器

1.1.1 手術用 5%托吡卡胺滴眼液（美多麗）、速眠新（846合劑）、鹽酸奧布卡因滴眼液、利多卡因、卡米可因、慶大霉素等。

1.1.2 染色用 10%中性福爾馬林、二甲苯、1%蘇木素、0.5%伊紅、酒精、1%氨水、中性樹膠。

1.1.3 主要儀器 雙目手術顯微鏡、裂隙燈、尼龍5-0和10-0眼科無損傷縫線、眼科顯微手術器械一套、低溫切片機、光學顯微鏡、高溫高壓滅菌鍋、冰箱。

1.2 試驗方法

1.2.1 動物選擇與分組 選擇體重相當（4～5kg）、體質健康均勻、4～5月齡、眼無任何疾病史的本地犬24只，雌雄不限。在相同飼養條件下隔離喂養一周后，未發現問題的隨機分為兩組：第一組為試驗組（12只犬），均對其左眼進行超聲乳化術；第二組（12只犬）為空白對照組，不進行超聲乳化術。

1.2.2 手術參數設定 根據目前手術儀器的條件，參照臨床上犬超聲乳化手術常用的參數設定，同時考慮到手術眼為健康眼，本試驗采用冷超聲乳化技術，設超乳能量為40%，乳化抽吸負壓為170mmHg，抽吸速率為27cc/min，每次乳化時間在42.0～78.0s之間，平均時間為54.4s。

1.2.3 超聲乳化術實施 手術當日禁食12h，手術前1h對犬的手術眼用5%托吡卡胺散瞳，術前30min用硫酸阿托品0.04mg/kg皮下注射，丙泊酚0.6mL/kg靜脈注射誘導麻醉，然后氣管插管，全程采用吸入麻醉。手術過程如下：

（1）顯露術野：開瞼器充分開瞼。（2）角鞏膜緣切口：在眼球12點方向，距角鞏膜緣后方0.5～1.0mm處，用穿刺刀進入前房，寬度為3.0～3.2mm。（3）連續環形撕囊術：向前房內注入粘彈劑后，用撕囊鑷形成一個翹起的囊瓣，以其游離部的頂端為著力點，沿時鐘軌跡做逆時針牽引，依次撕開前囊膜。（4）晶狀體的水分離：在撕囊邊緣的前囊下，注入灌注液，使晶狀體與周圍皮質完全分離。（5）側切口：沿虹膜平行方向，用直頭穿刺刀做前房穿刺。（6）囊袋內雙手超聲乳化術：采用冷超乳技術，先將踏板踩至1檔（灌注），當針頭接觸到晶狀體核時，逐漸將踏板踩至2檔（抽吸）和3檔（乳化）進行超聲乳化。（7）抽吸皮質：進入灌注/抽吸模式，將I/A針頭移向囊袋中央牽引皮質，使其附著在后囊上的部位脫離赤道部。重復以上操作直至皮質完全清除。（8）徹底抽吸出囊袋和前房內的粘彈劑。（9）縫合切口，沖洗術眼，涂上紅霉素眼膏。

1.2.4 術后護理 術后將犬只單獨飼養于犬籠中，為防止它舔舐、抓咬術眼，要佩戴伊麗莎白圈。術后一周內每天涂紅霉素眼膏，并自術后1～7d，每日進行裂隙燈檢查，觀察角膜水腫情況、瞳孔形狀、前房深度、前房炎癥情況、囊膜有無撕裂、后囊膜有無破裂等。每日多次檢查術眼情況，及時清理眼分泌物。

對手術失敗的試驗犬予以淘汰，并及時進行補充試驗。日糧中盡量避免添加刺激性較大的原材料，飼養房間禁止非試驗人員進入，防止刺激導致試驗犬過度吠叫引起眼壓升高，縫線崩斷。

1.2.5 病理切片制作

1.2.5.1 制片 （1）取材：分別于術后第 7、14 d（每個時間點2只犬），取犬術眼；對照組2只犬分別取左眼。（2）固定：10%福爾馬林溶液浸泡24h，剪下完整角膜，切成寬度為1～2mm的小段。（3）沖洗：用蒸餾水徹底沖洗干凈。（4）脫水：分別在50%、70%、80%、90%、95%的乙醇溶液中進行梯度脫水，每個濃度梯度的脫水時間為1h，然后在無水乙醇中脫水兩次，每次0.5h。（5）透明與透蠟：先用二甲苯和酒精（1∶1）的混合液在室溫下處理0.5h，再用二甲苯浸透3次，每次為5min；然后在62～65℃恒溫箱中透蠟，先是用甲苯和蠟（1∶1）的混合液處理0.5h，再以純蠟處理3次，每次0.5h。（6）包埋：將包埋組織塊置入熔化的蠟液中，待包埋組織的蠟凝結成塊后將蠟塊修成梯形，再將其固著于木質蠟頭上。（7）切片：用4%的蛋白甘油溶液浸潤載玻片，再將載玻片在干燥箱中烘干備用；蠟塊切片厚度為8～10μm，將蠟帶放在預先處理的載玻片上，再將其平放入65℃烘箱中熔化、展片，10min后組織就能自然展開并貼在載玻片上。（8）粘片：被片上涂一層粘貼劑，加一滴水，切取蠟帶，燙手后烘干。

1.2.5.2 染色 （1）脫蠟：將切片以20°傾斜放入染缸中脫蠟，程序為二甲苯I 5 min、二甲苯II 5 min，無水乙醇2 min、95%乙醇 1 min、90%乙醇 1 min、80%乙醇1min、75%乙醇 1min，蒸餾水沖洗 1min。（2）染色與脫水：蘇木素染色5～10min后用蒸餾水沖洗2次，每次0.5min；染色后脫水：70%乙醇2min、80%乙醇2 min、90%乙醇2min，脫水后再用伊紅染色2min，之后繼續脫水：95%乙醇2min、無水乙醇2min，二甲苯I 2min、二甲苯II 2min，最后用中性樹脂封閉。

2 試驗結果

2.1 超聲乳化術后術眼恢復情況 術后1～7d，每天用裂隙燈檢測術眼的恢復情況。正常犬的眼角膜透明純凈，眼底清澈，無混濁現象。術后第1～2d，幾乎所有術眼的角膜均陸續出現灰色或灰白色的混濁和水腫，表面有血管生長，切口處輕微睫狀充血；術后第3d，角膜水腫逐漸消退，隨著傷口愈合，血管痕跡淡化，睫狀充血減輕，混濁狀況有所改善；術后第5d，角膜混濁消退，切口愈合良好，血管痕跡殘留，充血減輕；術后第7d，術眼愈后良好，已無明顯手術反應。

2.2 犬角膜內皮的組織學觀察 正常情況下犬眼角膜內皮層平滑完整，細胞排列整齊緊密。術后7d，觀察到角膜內皮層變形，呈波浪狀，表面變得粗糙不平，內皮細胞空泡化，有些角膜內皮層與后彈力層出現斷裂，角膜內皮層脫落。術后14d，角膜內皮細胞空泡化更加明顯，甚至角膜內皮層丟失，或角膜內皮層連同后彈力層一同丟失，基質層變形、脫出。

3 分析與討論

3.1 術眼超聲乳化術模型的建立及術眼的恢復情況 超聲乳化術是近年來治療白內障的有效手術方法之一，應用超聲波將晶狀體核粉碎，使其呈乳糜狀，然后連同皮質一起吸出，同時也可植入人工晶狀體[1-2]。自1967年由Kelman等發明以來，該手術以組織損傷小、切口愈合快、術后散光小及視力恢復快等優點成為當前白內障手術的主流方式[3]。

有研究認為，超聲乳化術中使用的能量大小、超乳時間的長短直接影響術后角膜內皮細胞的恢復情況，能量越高、時間越長，對角膜內皮的影響就越嚴重。近年來“冷超聲乳化”技術的問世，大大降低了術中超聲能量及浪涌現象，從而減輕對角膜內皮細胞的損傷[4]。低能量脈沖式超聲乳化降低了超聲乳化針頭產生的熱量，術中超聲乳化針頭產生的溫度僅在20～34℃之間，在機體正常溫度（37℃）以下，所以不會對切口及角膜組織產生灼傷熱量，相對于普通超聲乳化儀更安全。有研究表明，3.5mm角鞏膜緣切口對角膜內皮的損傷要小于5mm切口。本次手術采用角鞏膜緣切口，切口寬度為3.0～3.2mm，如果切口過小，則超聲乳化針頭無法進入前房，或灌注液不能順利流出而導致角膜灼傷。

3.2 犬角膜內皮的組織學變化 角膜內皮層是角膜與前房水相接觸的分界線，鏡下呈直線形，由單層扁平的六邊形細胞構成，大小均等、緊密鑲嵌、排列整齊[5-6]。術后暫時的角膜水腫，表明角膜內皮細胞泵功能受損，是超聲或機械損傷的結果。內皮細胞遭到破壞后，傷口緣的后彈力層收縮并向基質層卷曲，在數小時內，傷口周圍的內皮細胞向傷口區遷移，通過細胞面積增大和重組，重建完整的內皮單層結構[7]。

超聲乳化術的切口、灌注液的沖刷、超聲能量的釋放、劈核的方式、機械因素（如超聲乳化術中乳化針頭和器械不斷進出前房）以及手術過程中產生的核碎屑和氣泡等，不可避免地會對角膜內皮產生損傷。但是角膜內皮層的變化并不是均一的，損傷程度也并不相同，如硬核會造成超聲乳化能量較高，乳化時間長，角膜內皮質、細胞間容易存在空泡，角膜內皮細胞容易發生水腫[8-9]。

本試驗觀察到術后7d角膜內皮層變形，呈波浪狀，表面變得粗糙，內皮細胞空泡化，有些出現斷裂、脫落，這是角膜內皮受到損傷、功能失調所致；術后14d時，角膜內皮的損傷加重，角膜內皮丟失，基質層甚至變形、脫落，可能是因為角膜內皮受損失代償造成的。

4 結論

本試驗采用角鞏膜緣切口，切口寬度為3.0～3.2mm，設置超乳能量為40%，乳化抽吸負壓為170mmHg，抽吸速率為27cc/min，每次乳化時間在42.0～78.0s之間，平均時間為54.4s。在此參數條件下對健康試驗犬施行冷超乳技術，在囊袋內進行超聲乳化。術后犬只精神和飲食狀況與術前無明顯差異，術眼在一周內痊愈，恢復情況良好。超聲乳化術使角膜內皮結構發生改變，可能與角膜內皮失代償發生有關。

（致謝：本文在西南大學鄭小波副教授悉心指導下完成，在此致以衷心的感謝！）

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[2]夏楠，姚華，王雪喬，等.超聲乳化術對白內障模型犬的治療研究[J].畜牧獸醫學報，2010，41（12）：1629-1635.

[3]柴新紅，王從毅，吳利安.低角膜內皮細胞數的白內障行超聲乳化術 29 例[J].國際眼科雜志，2005，5（3）：560-561.

[4]孫建初，王麗婭，李衛，等.正確看待“冷超乳”[J].眼外傷職業眼病雜志，2009，31（5）：337-339.

[5]馬烈，劉芳，顧麗萍，等.白內障超聲乳化術中角膜內皮細胞損害的相關因素分析[J].國際眼科雜志，2012，12（1）：90-92.

[6]黃建宇，楊靜，包著妍.白內障超聲乳化術中兩種模式和兩種切口對角膜內皮細胞的影響[J].福建醫藥雜志，2013，35（4）：118-120.

[7]李萬明，郭東華.白內障超聲乳化術65例并發癥臨床分析[J].中國現代醫藥雜志，2006，8（10）：115-116.

[8]王紅.白內障超聲乳化人工晶體植入術后角膜水腫的原因分析及其預防[J].中國老年學雜志，2011，31（13）：2442-2443.

[9]王九三，周瓊芝，王勇懿，等.白內障超聲乳化人工晶體植入術 106 例臨床報告[J].云南醫藥，2003，24（5）：400-401.

Effect of Phacoemulsification on Dog's Eyes and Corneal Endothelium

Liao Tianli1，Zhang Yefeng2
（1.Animal Husbandry and Veterinary Bureau of Qianjiang District，Chongqing Qianjiang 409000；2.Department of Veterinary Medicine，Rongchang Campus of Southwest University，Chongqing Rongchang 402460，China）

In order to evaluate the effect of phacoemulsification on dog′s corneal endothelium，this experiment operated phacoemulsification on healthy dogs，as well as made pathological sections of canine corneals.The results showed that dogs recovered well after phacoemulsification and the eyes also healed in one week，after 7 days，some corneal endotheliums became wavy shape，breakage or detached，and some corneal endothelial cells became vacuolization，post-operation 14 days，the vacuolization of corneal endothelial cells became more serious，even corneal endothelium with elastic layer lost together，and the stromal layer was out of shape and prolapsed.

Dog；Phacoemulsification；Corneal endothelium；Pathological section

S858.292.12

B

1001-8964（2017）10-0024-03

2017-06-20

廖天利（1975-），男，重慶榮昌人，碩士研究生，獸醫師，現從事動物疫病臨床與預防控制工作。