禽腫瘤病診斷

趙鵬建，朱文浩

（山東省沂南縣畜牧獸醫局，山東 沂南276300）

禽腫瘤病診斷

趙鵬建，朱文浩

（山東省沂南縣畜牧獸醫局，山東 沂南276300）

1 實驗材料與方法

1.1 病料來源 9只病雞均為某大型雞場的19周齡肉種雞。病雞精神沉郁、衰弱，漸行性消瘦，雞冠蒼白，腿部有黃豆大小的血管瘤，大部分血管瘤頂部結痂，呈黑色。

剖檢可見病雞肝臟、脾臟、腎臟、睪丸或者卵巢腫大，有的肝臟或者脾臟的體積是正常的2到3倍，其肝實質易碎，被膜下和實質中有大小不等的灰白色結節。

根據病理變化，懷疑雞患J亞型禽白血病（AL）或禽網狀內皮組織增殖病（RE）。

1.2 病料處理 取病雞肝臟、脾臟、卵巢（睪丸）等組織，用滅菌PBS清洗掉組織外部的血液等雜質，再加入適量的PBS研磨病料。將研磨的組織液反復凍融3次，以8 000 r/min離心后取上清液，用上清液提取病毒DNA。

1.3 PCR檢測 根據ALV、ALV-J和REV序列分別設計1對特異性引物。

按照天根DNA提取試劑盒說明提取組織上清液中的DNA，用設計的特異性引物檢測組織中是否含有ALV、ALV-J或REV的DNA。

將擴增呈ALV、ALV-J或者REV陽性的PCR產物與pMD-18 Vecter連接，轉化大腸桿菌DH5a，挑取陽性菌落進行酶切和PCR鑒定，同時將陽性克隆送測。

1.4 血清學檢測 從發病雞場采病雞血12份，按照常規方法分離血清，用ALV-J和REV抗體檢測試劑盒檢測血清中的相應抗體。

2 檢測結果

2.1 PCR檢測結果 以組織研磨液上清提取的DNA為模版，分別進行ALV、ALV-J和REV的PCR擴增，同時設陰陽性對照。檢測結果顯示，所檢測的4份樣品中，3份樣品為REV弱陽性，1份樣品為REV陽性。禽白血病通用引物檢測，4份樣品均為陽性，ALV-J亞型引物檢測中3份樣品呈陽性。

將PCR呈陽性的部分樣品轉化DH5a大腸桿菌后測序，經過序列對比分析，證實REV引物和ALV-J引物所擴增出的產物確實為網狀內皮組織增殖病病毒和禽白血病病毒。

2.2 血清學檢測結果 抗體檢測結果表明所檢測的12份樣品中，REV抗體呈陰性，而同雞場的病料抗原檢測為陽性，其提示該雞場出現的RE可能是REV垂直傳播所致。

在所檢測的12份樣品中，2份樣品呈ALV-J抗體陽性，10份樣品呈ALV-J抗體陰性。抗原檢測發現該場存在ALV-J病毒。根據抗原檢測陽性而抗體陰性，初步推斷可能存在ALV-J垂直傳播情況，其父母代或祖代可能攜帶ALV-J。

3 結果分析

對REV和ALV-J亞型的混合感染僅從病理變化或肉眼上很難作出判定，對其需借助病原學檢測和抗體水平監測加以確認。

減少和消除REV、ALV-J的危害，做好種群的凈化工作非常必要。種雞場的凈化可以從以下幾個方面著手：淘汰REV和ALV-J陽性雞群，防止病毒擴散；嚴格控制活疫苗中REV和ALV-J的污染。如果活疫苗有外源病毒污染，不僅達不到預期免疫效果，外源病毒還會給雞場帶來更大的危害。潔凈度高、無外源病毒污染的SPF雞胚生產出來的活疫苗相對可靠，制備活疫苗時應做好SPF雞胚的篩選。

S858.36

C

1001-8964（2017）09-0047-02

2017-07-25