三種豬偽狂犬病毒gE 抗體診斷試劑盒的檢測結果比較

陸 江，葉志樹，米樹運，孫如水，梁恒英

（廣西農墾永新畜牧集團有限公司良圻原種豬場，廣西 橫縣 530317）

三種豬偽狂犬病毒gE 抗體診斷試劑盒的檢測結果比較

陸 江，葉志樹，米樹運，孫如水，梁恒英

（廣西農墾永新畜牧集團有限公司良圻原種豬場，廣西 橫縣 530317）

本試驗選取60份豬血清，分別采用三種商用豬偽狂犬病毒gE抗體診斷試劑盒進行檢測，然后對三種檢測結果的符合程度進行了分析，比較三種試劑盒之間的一致性。

豬偽狂犬病毒；gE抗體檢測；ELISA；試劑盒；比較試驗

偽狂犬病（PR）又名奧耶斯基氏病，是由偽狂犬病病毒（PRV）引起的包括多種家畜和野生動物共患的一種急性傳染病。豬是該病的天然宿主和儲存者，在豬呈暴發性流行，常引起妊娠母豬流產、死胎，公豬不育，新生仔豬大量死亡，育肥豬呼吸困難、生長停滯等，是危害全球養豬業的重大傳染病之一，我國也將其列為一類傳染病，是發生最多、危害最大、流行最廣的動物傳染病之一。在歐美等發達國家，使用基因缺失疫苗和相應的血清學鑒別診斷方法，該病已得到控制或根除。PRV-gE抗體監測方法較多，其中酶聯免疫吸附試驗（ELISA）為國際貿易中PRV-gE抗體檢測指定方法之一，且ELISA以其敏感、特異、簡便等特點已被廣泛應用于各個領域。

目前市面上用于PRV-gE抗體檢測的試劑盒較多，I廠家診斷試劑盒有較好的口碑，主要是因為I廠家豬偽狂犬病毒gE抗體檢測試劑盒是唯一經過我國農業部注冊的PRV進口診斷產品，同時其操作方法也列入了農業部的行業標準，性能經過了嚴格的檢驗；同時在國內和國際上都被高度認可，也是使用最早和最廣泛的診斷試劑盒，發表SCI的文獻，唯獨認可的就是I診斷試劑盒的檢測結果。本試驗以I廠家的檢測數據為標準對其他兩個不同廠家的商用PRV-gE抗體診斷試劑盒進行檢測結果的比較分析，現報告如下：

1 試驗材料

1.1 樣品 從公司和外來客戶送檢的各階段豬只血清中，選取了臨床背景情況清楚的60份血清作為檢測樣品。

1.2 試劑

1.2.1 I廠家生產的豬偽狂犬病毒PRV-gE抗體診斷試劑盒（簡稱I盒，阻斷ELISA），批號：99-09836-ML584。

1.2.2 B廠家生產的豬偽狂犬病毒PRV-gE抗體診斷試劑盒（簡稱B盒，間接ELISA），批號：10-7161-10-A429704。

1.2.3 H廠家生產的豬偽狂犬病毒PRV-gE抗體診斷試劑盒（簡稱H盒，間接ELISA），批號：CAE.97X JUL-2017。

1.3 檢測儀器 不同規格的微量移液器（Socorex、Eppendorf等）、美國Biotek ELX 800酶標儀、微量振蕩器（IKA）、高速離心機等。

2 試驗方法

2.1 試驗設計 I盒做一組檢測實驗，B盒和H盒在同一塊反應板上做3組重復檢測。

2.2 結果測定 檢測的實驗步驟與結果判定均嚴格按照各試劑盒的說明書進行，且所用試劑盒均在有效期內檢測并實驗成立，檢測結果按試劑盒要求判定。

2.3 檢測數據處理分析 以I盒的檢測數據為標準，計算其他2種試劑盒相對I盒的特異性、敏感性和結果符合率，以選出相對穩定且符合率高的試劑盒，用于指導臨床實踐。

2.4 結果判定 I診斷試劑盒判定標準：S/N值≤0.6為陽性，＞0.7為陰性，0.6～0.7為可疑。

B診斷試劑盒判定標準：阻斷值≤50為陽性，＞60為陰性，51～60為可疑。

H診斷試劑盒判定標準：阻斷值＞45為陽性，＜40為陰性，40～45為可疑。

3 結果與分析

3.1 檢測結果匯總 用3種試劑盒分別檢測60份血清樣品，以I盒的檢測數據為標準，其他兩種試劑盒的重復性檢測結果見表1。

表1 I、B與H試劑盒的檢測結果匯總 份

3.2 B盒和H盒對I盒的符合率

3.2.1 B盒對I盒檢測結果的符合率 B盒的3次重復分別檢測到32、31、31個陽性樣品和28、29、29個陰性樣品。其中3次重復檢測中，分別各有10份樣品用兩種方法檢測均為陽性，有28、29、29份樣品用兩種方法檢測均為陰性。計算得出：B盒3次重復的敏感性都為100%（10/10），3次重復的特異性分別為56.0%（28/50）、58.0%（29/50）、58.0%（29/50）；B盒3次重復對I盒檢測結果的符合率分別為 63.3% [（10+28）/60]、65.0%[（10+29）/60]、65.0%[（10+29）/60]。詳見表2。

表2 B盒相對I盒的比較試驗 份

3.2.2 H盒對I盒檢測結果的符合率 H盒的3次重復分別都檢測到10個陽性樣品和50個陰性樣品。其中3次重復分別都有10份樣品用兩種方法檢測均為陽性，有50份樣品用兩種方法檢測均為陰性。計算得出：H盒3次重復的敏感性都為100%（10/10），3次重復的特異性都為100%（50/50），H盒3次重復對I盒檢測結果的符合率都為100%[（10+50）/60]。詳見表3。

表3 H盒相對I盒的比較試驗

表4 B盒和H盒對I盒符合率的比較

3.2.3 B盒和H盒對I盒符合率的比較總結 結果見表4。

4 結論與討論

從試驗結果看，H試劑盒的特異性、敏感性和符合率與I試劑盒都達到100%的一致性，B試劑盒對I試劑盒的敏感性能達到100%的一致性，但特異性、符合率有顯著的差別，檢測樣品容易出現假陽性。

對B盒和H盒兩種試劑盒重復穩定性的比較：H盒3次重復檢測結果的可重復性和穩定性比較一致，而B盒3次檢測的結果有一定的差異，試劑盒重復性和穩定性較差。用相同的方法，同一試驗材料，在相同的條件下獲得的結果不一致，容易對同一份樣品的結果造成誤判。

綜上所述，H試劑盒對I試劑盒的檢測結果有很高的符合率和重復性、穩定性，這兩種試劑盒可根據情況加以靈活應用，不僅能夠保證疫病監測工作的完成，而且能夠為偽狂犬野毒檢測提供可靠的依據，還可以解決試劑盒供應緊張時的替代等問題。然而，筆者認為，一個豬場進行疫病監測時，為了掌握疫病的流行趨勢，最好不要經常變換檢測試劑盒，相對穩定的檢測方法有利于豬場建立檔案資料，為指導生產提供理論依據，所以我們要合理地選擇試劑盒，以便更好地為生產服務。■

[1] 陳偉杰，周彩琴，黃怡君，等.檢測豬偽狂犬病抗體的3種ELISA試劑盒的比較分析[J].豬業科學，2008（8）：96-97.

[2]楊濤，李謂娟.Kappa檢驗比較2種豬偽狂犬病gE抗體ELISA檢測試劑盒[J].福建畜牧獸醫，2015，37（6）：11-13.

[3] 蔡振鴻，趙冉，楊濤，等.3種豬偽狂犬病gB抗體ELISA檢測試劑盒的比較[J].福建畜牧獸醫，2016，38（6）：38.

[4]肖亞朋，龍進學，黨占國，等.兩種豬偽狂犬病gB抗體檢測ELISA試劑盒的應用比較[J].養豬，2015（4）.

S854.43

：B

：1001-8964（2017）04-0032-02

2017-02-27

優質瘦肉型配套系種豬選育與產業化示范項目（桂科重14121003-2-3）

陸江（1977-），男，廣西南寧人，畜牧師，主要從事養豬生產、豬場疫病監測和防治工作。