隔藥餅不同灸量對模型兔血細胞及免疫球蛋白水平的影響

賈翠娜，李雷勇，田岳鳳，邱橋，王軍

1.山西中醫學院針灸推拿學院，山西 太原 030619；2.山西醫科大學第二醫院，山西 太原 030001

隔藥餅不同灸量對模型兔血細胞及免疫球蛋白水平的影響

賈翠娜1，李雷勇2，田岳鳳1，邱橋1，王軍1

1.山西中醫學院針灸推拿學院，山西 太原 030619；2.山西醫科大學第二醫院，山西 太原 030001

目的觀察隔藥餅不同灸量對免疫抑制兔血細胞和免疫球蛋白水平的影響，探究量效差異可能的機制。方法采用腹腔注射環磷酰胺建立免疫抑制兔模型。實驗動物分為空白組、模型組、隔藥餅灸3壯組、隔藥餅灸5壯組、隔藥餅灸7壯組。選用六味地黃湯組方制作藥餅，置于神闕、關元等穴，隔日1次，共灸10次。治療結束后第2日，靜脈取血，行血細胞系列、IgG、IgM和補體C3、C4水平的檢測。結果與空白組比較，模型組白細胞（WBC）、中性粒細胞（NEU）、紅細胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細胞壓積（HCT）、血小板計數（PLT）、IgG、IgM、補體C3水平顯著降低，淋巴細胞（LYM）、單核細胞（MONO）水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，除隔藥餅3壯組HCT和IgM水平升高不明顯外，各治療組WBC、NEU、RBC、HGB、HCT、PLT、IgG、IgM和補體C3水平顯著升高，LYM、MONO水平顯著降低（P＜0.01）；與隔藥餅灸3壯組比較，隔藥餅灸5壯組WBC、IgG和補體C3水平顯著升高，隔藥餅灸7壯組WBC、HGB和補體C3水平顯著升高（P＜0.01）。結論隔藥餅灸可有效改善環磷酰胺所致兔免疫功能低下，不同灸量效果有一定差異。

隔藥餅灸；不同灸量；環磷酰胺；血細胞；免疫球蛋白；兔

隔藥餅灸是將艾灸、藥物、穴位三者有機結合，將藥餅放于穴位上進行艾灸，藥物和艾絨的藥性通過穴位、經絡輸布滲透并深入體內，發揮藥物歸經的效能。從古代醫家對灸量的沿革、應用、施灸規律、量效關系[1-3]，到現代研究者總結不同灸量對不同系統疾病的影響，以及灸量如何準確控制等，都關注到艾灸量這一重要的變化因素在艾灸療效中的關鍵作用[4-5]。本研究從量效角度出發，觀察免疫抑制模型兔在施以隔藥餅不同艾灸量后血細胞和免疫分子的變化，分析不同灸量所產生效果的差異，為臨床應用提供更佳的治療方案。

1 實驗材料

1.1 動物

新西蘭兔50只，3月齡，體質量（2.5±0.3）kg，雌雄不限，太原市小店區豐澤園種養農民專業合作社，動物合格證號SCXK（晉）2015-0003。飼養于溫度20～25 ℃、相對濕度50%～70%環境。

1.2 藥物、艾條和儀器

注射用環磷酰胺，山西普德藥業股份有限公司，批號20140312；0.9%NaCl注射液，石家莊四藥有限公司，批號20140521；艾條，南陽臥龍漢醫艾絨廠。血細胞檢測儀（美國雅培），體液免疫檢測儀（美國貝克曼）。

2 實驗方法

2.1 分組

將50只新西蘭兔隨機分為空白組、模型組和隔藥餅灸3壯組、5壯組、7壯組，每組10只。

2.2 造模

參照文獻[6]方法。經過前期預實驗，對給藥劑量和時間略作調整。實驗動物適應性飼養7 d，除空白組外，其余4組每日上午腹腔注射生理鹽水稀釋環磷酰胺60 mg/kg，空白組注射等量生理鹽水。連續7 d。

2.3 藥餅及艾柱制備

將六味地黃湯藥物按組方 8∶4∶4∶3∶3∶3的比例混勻，打碎成粉末，過120目篩備用。臨用前用75%乙醇調勻，軟硬適中，制成直徑1 cm、厚0.3 cm的藥餅。取艾條中艾絨，制成底徑0.8 cm、高0.5 cm的圓錐形艾炷備用。

2.4 艾灸

選取神闕、關元、足三里（雙）、脾俞（雙）、腎俞（雙）8個穴位。穴位定位參照《實驗針灸學》[7]。造模完成2 d后，將穴位處的毛剪去，施灸時先將動物固定于兔臺，藥餅置于穴位上，艾炷置于藥餅上，線香點燃，燃盡更換，3個治療組根據不同分組每穴分別連灸3、5、7壯，隔日1次，共灸10次。

2.5 指標檢測

治療結束后次日，將動物麻醉，腹腔靜脈采血，觀察外周血細胞變化，檢測免疫球蛋白IgG、IgM和補體C3、C4。

3 統計學方法

采用SAS8.2統計軟件進行分析。實驗數據以—x±s表示，組間比較采用方差分析。P＜0.05表示差異有統計學意義。

4 結果

4.1 隔藥餅不同灸量對模型兔血細胞的影響

與空白組比較，模型組白細胞（WBC）、中性粒細胞（NEU）、紅細胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細胞壓積（HCT）、血小板計數（PLT）顯著降低，淋巴細胞（LYM）、單核細胞（MONO）顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，除隔藥餅3壯組HCT升高差異無統計學意義外，各治療組WBC、NEU、RBC、HGB、HCT、PLT顯著升高，LYM、MONO顯著降低（P＜0.01）；與隔藥餅3壯組比較，隔藥餅5壯組WBC顯著升高，隔藥餅7壯組WBC和HGB顯著升高（P＜0.01）；嗜酸性粒細胞（EOS）、嗜堿性粒細胞（BASO）組間比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。結果見表1。

4.2 隔藥餅不同灸量對模型兔免疫球蛋白和補體水平的影響

與空白組比較，模型組IgG、IgM和補體C3顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，除隔藥餅3壯組IgM升高不明顯外，各治療組IgG、IgM和補體C3顯著升高（P＜0.01）；與隔藥餅3壯組比較，隔藥餅5壯組IgG和補體C3明顯升高，隔藥餅7壯組補體C3顯著升高（P＜0.01）。結果見表2。

表1 各組兔血細胞水平比較（—x±s）

續表1

表2 各組兔免疫球蛋白和補體水平比較（mg/dL）

表2 各組兔免疫球蛋白和補體水平比較（mg/dL）

注：與空白組比較，##P＜0.01；與模型組比較，**P＜0.01；與隔藥餅灸3壯組比較，▲▲P＜0.01

組別 只數 IgG IgM C3 C4空白組 10 38.54±10.62 3.70±1.45 1.58±0.22 0.23±0.04模型組 10 20.21± 5.31## 1.92±0.98## 0.78±0.14## 0.26±0.04隔藥餅灸3壯組 10 29.33± 8.54** 2.87±0.99 1.17±0.29** 0.23±0.07隔藥餅灸5壯組 10 41.73± 4.81**▲▲ 3.71±1.30** 1.56±0.11**▲▲ 0.24±0.07隔藥餅灸7壯組 10 30.35± 5.41** 3.65±0.37** 1.49±0.08**▲▲ 0.21±0.04

5 討論

隔藥餅灸較單純艾灸增加了藥物的作用，使艾絨在燃燒時產生溫熱，促進機體對藥物的吸收，通過經絡的滲透輸布，發揮藥性歸經的效能，從而作用于機體各臟腑組織，提高機體的免疫防御能力。六味地黃湯在臨床上廣泛用于內、外、婦、兒、皮膚、五官等各科疾病，為經典的滋陰補腎方。研究發現，該方能提高正常小鼠脾臟巨噬細胞的功能，提高紅細胞免疫功能，對淋巴細胞免疫有增強作用，從多方面調節機體的免疫系統，還可明顯增強體液免疫功能[8]。課題組前期研究發現，隔藥餅灸不同年齡人群對血細胞有顯著調節作用，可增強紅細胞CD58的高表達，提高機體免疫力[7]。動物實驗也表明，隔藥餅灸較單純艾灸更有效調節外周血細胞、CD4和CD8以改善機體免疫功能低下的狀態[9]。

灸量是影響灸效的重要因素之一。從古至今灸量都是中醫家關注的重點，古代醫家注重辨證施灸，結合患者病情特點、年齡和施灸部位等不同因素，對患者施以不同的艾灸量。《外臺秘要》卷三十九：“灸風者，宜從少以至多也；灸寒者，宜從多以至少也；寒濕者，宜從多以至少也。”較全面認識到施灸用量的規律和施灸足量的判定方法，同時闡述了不同施灸用量的適應癥和不同施灸方法的用量特點[2]。現代學者在前人經驗的基礎上，與現代醫學相結合，總結了不同灸量對不同系統疾病的影響，提倡加強對灸量的研究和創新，促使灸量的應用更加客觀化和標準化，為臨床應用最佳治療方案提供了理論基礎[4]。

灸效的產生必定需要一定量的積累，但并非灸量越大效果越好。這可能與機體自身機制相關，機體的耐受程度是一定的，對艾灸產生熱力的吸收有一定限度，當未達到或剛好達到自身機體的閾值時，產生的效果就會隨著灸量增大而增加。有研究表明，隔藥餅灸不同灸量治療寒凝型原發性痛經，灸量越大所取得的效果越好[10]；不同灸量艾灸潰瘍性結腸炎大鼠，取得效果與使用灸量成正相關[11]。當超出機體自身耐受的閾值時，其敏感度下降，所取得的效果就開始出現下降趨勢。有研究發現，不同灸量懸灸哮喘大鼠模型，結果懸灸15、30、60 min的效果呈遞增趨勢，而懸灸2 h與懸灸1 h的效果相當[12]。另有實驗觀察，對克羅恩病大鼠模型施以不同灸量發現，艾灸15 min和25 min的效果均好于艾灸5 min，并且兩組的效果相當[13]。由此看出，灸效并未一直隨灸量的加大而增強，合適灸量就可達到較佳的治療效果，為臨床應用提供了實驗依據。另外，臨床上還需要根據患者的病情特點、體質、部位等因素，辨證施治，選擇合適的灸量，以獲取較佳治療效果，避免灸量過度導致不良反應的發生。

本實驗結果顯示，模型組WBC、NEU、RBC、HGB、HCT、PLT、IgG、IgM、補體C3較空白組顯著降低，LYM、MONO顯著升高，提示免疫抑制動物造模成功。不同灸量隔藥餅灸的3個治療組對免疫抑制兔的血細胞和免疫分子均有調節作用，由于灸量的不同，所產生的效果也有所差異。隔藥餅灸3壯組雖然提高了免疫抑制兔的免疫功能，但其效果總體上與隔藥餅灸5壯組和隔藥餅灸7壯組相差較多。隔藥餅灸5壯組和隔藥餅灸7壯組效果相當，血細胞分析中隔藥餅灸7壯組的效果優于隔藥餅灸5壯組，而免疫球蛋白和補體系統檢測顯示隔藥餅灸5壯組的效果較好。適度的灸量可以獲得較佳的效果，而效應持續的時間將是我們后期實驗探討的內容。

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Effects of Different Quantities of Cake-separated Moxibustion on Blood Cells and Immunoglobulin in Model Rabbits

JIA Cui-na1, LI Lei-yong2, TIAN Yue-feng1, QIU Qiao1, WANG Ju1(1. Acupuncture and Massage College, Shanxi University of Traditional Chinese Medicine, Taiyuan 030619, China; 2. The Second Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)

ObjectiveTo observe the effects of different quantities of cake-separated moxibustion on blood cells and immunoglobulin in immunosuppressive rabbits; To study the possible mechanism of quantity-effect difference.MethodsImmunosuppressive rabbit model was established by intraperitoneal injection of cyclophosphamide. Rabbits were randomly divided into blank group, model group, cake-separated moxibustion 3 Zhuang group, 5 Zhuang group, 7 Zhuang group. Liuwei Dihuang Decoction was used to make herbal-cake, and was put on Shenque (RN8), Guanyuan (RN4), and other acupoints, once for every other day, 10 times in total. Venous blood was taken on the next day after finishing treatment, and the contents of blood cells series and IgG, IgM, complement C3 and complement C4 were detected.ResultsCompared with blank group, the levels of WBC, NEU, RBC, HGB, HCT, PLT, IgG, IgM, and complement C3 of model group significantly decreased, while the levels of LYM and MONO significantly increased (P＜0.01). Compared with model group, the increase of HCT and IgM in the cake-separated moxibustion 3 Zhuang group was not significant, the levels of WBC, NEU, RBC, HGB, HCT, PLT, IgG, IgM, and complement C3 in all treatment groups significantly increased, and LYM and MONO significantly decreased (P＜0.01). Compared with cake-separated moxibustion 3 Zhuang group, the levels of WBC, IgG, and complement C3 of cake-separated moxibustion 5 Zhuang group significantly increased, and the levels of WBC, HGB and complement C3 of cake-separated moxibustion 7 Zhuang group significantly increased (P＜0.01).ConclusionCake-separated moxibustion can improve the immune function under immunosuppressive state induced by cyclophosphamide, and different quantities have differences in efficacy.

cake-separated moxibustion; different quantities of moxibustion; cyclophosphamide; blood cells; immunoglobulin; rabbits

10.3969/j.issn.1005-5304.2017.04.013

R245

A

1005-5304(2017)04-0050-04

2016-07-08）

（

2016-07-26；編輯：華強）

國家自然科學基金（81373742）

田岳鳳，E-mail：tyfsx@163.com