HPLC法測(cè)定歸芍舒肝散中芍藥苷的含量

許慶+安艷蘇+肖植國(guó)

【摘要】目的：建立高效液相色譜法測(cè)定歸芍舒肝散中芍藥苷的含量。方法：采用BDS HYPERSIL C18色譜柱（250mm×46mm，5μm）；以甲醇-01%磷酸溶液（26∶74）為流動(dòng)相，流速為10mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm。結(jié)果：芍藥苷濃度在521～10411μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=09999，平均回收率為9894%（RSD為12%）。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于歸芍舒肝散中芍藥苷的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】歸芍舒肝散；芍藥苷；高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】R248【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2017）05-0032-03

歸芍舒肝散是曲靖市中醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑，由白芍、當(dāng)歸、柴胡、白術(shù)、茯苓、薄荷、甘草（炙）等七味中藥組成，具有疏肝健脾、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的作用。臨床用于肝氣不舒，胸脅脹痛，頭暈?zāi)垦＃秤麥p退，月經(jīng)不調(diào)等癥。制劑中白芍為君藥，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、柔肝止痛之功效[1-2]。白芍的主要有效成分為芍藥苷，是一種單萜類糖苷化合物，藥理研究發(fā)現(xiàn)芍藥苷具有抗自由基損傷，抑制細(xì)胞內(nèi)鈣超載和抗神經(jīng)毒性等活性，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明其有降低血液黏度、抗血小板聚集、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、抗氧化、抗驚厥等多種生物學(xué)效應(yīng)[3-6]。由于不同產(chǎn)地來(lái)源、不同炮制方法的白芍中芍藥苷含量會(huì)有顯著差異[7-8]，而歸芍舒肝散現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅以顯微及薄層色譜來(lái)鑒別其中部分藥材，未建立制劑中白芍含量測(cè)定方法。本文參照文獻(xiàn)[9-12]，以芍藥苷為定量控制指標(biāo)，采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)芍藥苷進(jìn)行含量測(cè)定，為有效控制歸芍舒肝散質(zhì)量提供了可靠且簡(jiǎn)便易行的方法。

1儀器與材料

11儀器Agilent1200型高效液相色譜儀（包括G1322A系列四元泵，G1315D DAD檢測(cè)器，G1316A柱溫箱，G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器）；KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；METTLE MS205DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；PURELAB Flex 3一體式超純水儀（英國(guó)ELGA公司）。

12材料芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：110736-201539，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；磷酸（分析純，批號(hào)：2015071401，成都市科龍化工試劑廠），甲醇（色譜純，CAS號(hào)：67-56-1，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司），水為純化水。歸芍舒肝散（批號(hào)：140203、150309、160103，曲靖市中醫(yī)醫(yī)院制劑室）。陰性樣品用藥材當(dāng)歸、柴胡、白術(shù)、茯苓、薄荷、甘草（炙）來(lái)源于曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心中藥標(biāo)本室經(jīng)檢驗(yàn)合格的留樣標(biāo)本。

2方法與結(jié)果

21色譜條件色譜柱：BDS HYPERSIL C18色譜柱（250mm×46mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-01%磷酸溶液（26∶74）；流速：10mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；進(jìn)樣量：10μl。

22溶液制備

221供試品溶液制備取本品內(nèi)容物，混勻，取約02g，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲（頻率：45KHz；功率：240W）30min，取出，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

222對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品1125mg置25mL量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，即得芍藥苷質(zhì)量濃度為04338mg/mL的對(duì)照品溶液。

223陰性樣品溶液的制備按歸芍舒肝散處方比例，分別稱取除白芍外的其它藥材，依歸芍舒肝散工藝制備不含白芍的陰性樣品，并按“221”項(xiàng)下制備陰性樣品溶液。

23線性關(guān)系的考察分別精密吸取“222”項(xiàng)下芍藥苷對(duì)照品溶液03、06、12、30、60mL，分別置25mL量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得含芍藥苷521、1041、2082、5206、10411ug/mL的系列對(duì)照品溶液。在“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），計(jì)算線性回歸方程，得芍藥苷的回歸方程Y=128698X-31886（r=09999）。結(jié)果表明，芍藥苷濃度在521～10411μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

24精密度試驗(yàn)精密吸取同一芍藥苷對(duì)照品溶液（含芍藥苷5206μg/mL）在“21”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值，RSD為07%，表明儀器的精密度良好。

25重復(fù)性試驗(yàn)取同一批歸芍舒肝散（批號(hào)160103）6份，按“221”項(xiàng)下的方法處理，記錄峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果，每1g樣品中平均含芍藥苷5385mg，RSD為11%，表明本方法的重復(fù)性良好。

26穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品溶液（批號(hào)160103），分別于0、2、4、8、12、24h按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，記錄峰面積。結(jié)果芍藥苷的RSD為13%。表明供試品溶液在24h內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。

27加樣回收率試驗(yàn)分別取已知含量的同一批歸芍舒肝散（批號(hào)160103）約01g，精密稱定，共6份，分別精密加入對(duì)照品溶液（濃度為04338mg/mL）1mL，按“221”項(xiàng)下的方法處理，制備供試液，分別測(cè)定，計(jì)算回收率。平均回收率為9894%，RSD為12%。見(jiàn)表1。

28專屬性試驗(yàn)將陰性樣品溶液按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。結(jié)果色譜圖中在芍藥苷相應(yīng)出峰位置未出現(xiàn)干擾峰。

29樣品含量測(cè)定取不同批號(hào)的供試品3批按“221”項(xiàng)下的方法處理，制備供試品溶液，按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，按上述色譜條件測(cè)定峰面積積分值，以外標(biāo)法計(jì)算芍藥苷含量。見(jiàn)表2。

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