黎藥海南野扇花的藥效學研究

張一云+李天一+唐菲+楊麗娜

【摘要】目的：探討海南野扇花對免疫功能，止血功能的影響。方法：將小鼠分為海南野扇花給藥高（13g/kg）、中（65g/kg）、低（33g/kg）劑量組及陰性（生理鹽水）、陽性（云南白藥）對照組，采用半數溶血試驗（HC50）；雞紅細胞吞噬實驗；凝血試驗考察藥物的藥效學作用。結果：海南野扇花高，中劑量均能顯著提升（P<001，P<005）小鼠血清溶血素含量；顯著增加（P<001）小鼠巨噬細胞吞噬功能；凝血試驗的高、中劑量均顯著縮短（P<001）小鼠凝血時間。結論：海南野扇花作為一種活血化瘀，消炎止血的藥物，具有良好的生物學活性。

【關鍵詞】黎藥；海南野扇花；免疫功能；止血

【中圖分類號】R29【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）05-0046-03

黎族在海南具有3000多年的生活史[1]，為了生存和繁衍，黎族人依托海南獨特的熱帶資源氣候，逐漸探索和實踐出了豐富的具有民族特色醫藥知識[2]。海南野扇花（Sarcococca vagans Stapf）為黃楊科野扇花屬植物，主要分布于我國海南、云南、廣西等地區[3]。報道集中于海南野扇花的化學成分研究，未見藥理藥效方面研究。海南民間用以活血化瘀，消炎止痛，常用于跌打損傷后的止血及瘀血祛除，以及咽喉腫痛、風熱感冒的消炎止痛。研究參考黎族民間常用用法，考慮其具有止血、提升巨噬細胞吞噬血塊的能力，同時可能具有提高免疫力，增強抵抗力的作用。故設計免疫力功能試驗及止血試驗，為今后開發新藥提供一定的研究數據。

1儀器與材料

11實驗動物KM小鼠，體重18～22g，雌雄各半，由海南省實驗動物中心提供，許可證號SCXK（瓊）2015-0007；動物飼養于海南省藥物研究所SPF動物房，使用許可證號：SYXK（瓊）2014-0025。

12藥物海南野扇花由五指山海南黎族民間醫藥研究協會提供，經海南省藥物研究所鑒定；云南白藥（批號：ZBA1505，云南白藥集團股份有限公司）。

13儀器二氧化碳培養箱、十萬分之一天平、離心機、紫外分光光度計、顯微鏡、手術器械。

14試劑Hank′s液（20150604，Biohao Biotechnology CoLtd）；PBS緩沖液（批號：20150629，Biohao）；SRBC（批號：20150806，鴻泉生物）；SA緩沖液（批號：20150811，Biohao）；瑞姬氏染液（批號：上海源葉生物科技）；都氏試劑（批號：D5941-6VL，SIGMA）。

2方法

21分組與給藥海南野扇花的推薦劑量為成人（體重70kg）每日50g生藥量，依據體重換算系數[4]，20g標準小鼠等效劑量為170×00026=013g，即等效小鼠劑量65g/kg，設置為給藥中劑量組，高低劑量組分別為等效劑量2倍和05倍，即高、中、低劑量組分別為每日13、65、33g/kg。

將海南野扇花干品粉碎，取130g藥材粉加8倍量純化水浸泡2h，大火煎煮30min，過濾收集濾液，剩余藥材再加8倍量水重復煎煮，合并濾液，濃縮至100mL（含生藥13g/mL）用于高劑量組。中劑量及低劑量給藥組分別為高劑量給藥組稀釋2倍及4倍。小鼠按每10g體重給藥01mL給藥，每日一次。

陽性對照組：云南白藥膠囊，用純化水配置為00026g/mL溶液，小鼠按每10g體重給藥01mL，1次/d。陰性對照組：等量純化水，每日按10g體重給藥01mL。

22血清溶血素測定試驗[5]隨機取KM小鼠40只，分為給藥高、中、低劑量組及陰性對照組，每組10只，雌雄各半。每日按每10g體重給藥01mL，連續給藥30d，采用半數溶血值（HC50）的測定方法進行實驗。結束前4d以2%（v/v）濃度的綿羊血紅細胞（SRBC）免疫小鼠，4d后，小鼠采血分離血清，用SA緩沖溶液稀釋200倍，取稀釋后血清1mL放入試管內，加入10% SRBC 05mL和1∶8稀釋的豚鼠血清補體1mL。另設置不加血清的對照管。置于37℃恒溫水浴箱內水浴30min，立即冰浴終止反應，離心，取上清液1mL，加入3mL都氏試劑，同時取10%SRBC 025mL，加都氏試劑至4mL，充分混勻，作為SRBC半數溶血管。靜置約10min，分光光度計于540nm處測OD值。HC50依下式計算。

HC50=樣品光密度值SBBC半數溶血時的光密度值×100%

23巨噬細胞吞噬功能測定試驗[5]隨機取KM小鼠40只，分為給藥高、中、低劑量組及陰性對照組，每組10只，雌雄各半。每日按每10g體重給藥01mL，連續給藥30d，采用小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞血紅細胞（半體內法）進行實驗，鼠腹腔注射20%雞紅細胞懸濁液1mL，放置30min，脫頸處死小鼠，剪開腹壁皮膚，腹腔注射生理鹽水2mL揉搓腹腔1min，吸出腹腔洗液，滴于載玻片上，放入墊有紗布的鐵質飯盒內，移至37℃二氧化碳恒溫培養箱孵育30min。孵畢，用生理鹽水洗去未貼壁細胞。以4%（v/v）Giemsa-磷酸緩沖液染色30s，蒸餾水洗凈。油鏡下計數巨噬細胞，分別記錄吞噬的巨噬細胞數，被吞噬的雞紅細胞數及巨噬細胞總數。依下式計算吞噬百分率及吞噬指數。

吞噬百分率（%）=

吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數計數的巨噬細胞數×100%

吞噬指數=被吞噬的雞紅細胞總數計數的巨噬細胞數

24止血試驗隨機取KM小鼠50只，分為給藥高、中、低劑量組及陽性、陰性對照組，每組10只，雌雄各半。每日按每10g體重給藥01mL，連續給藥7d，末次給藥30min后，小白鼠眼后靜脈叢取血，立即滴于載玻片，同時以秒表計時。每隔10s用清潔大頭針自血滴邊緣向里輕輕挑動一次，并觀察有無血絲挑起。從采血開始至挑起血絲止，為凝血時間。

25統計學方法采用SPSS 220軟件分析數據，計量資料用均數加減標準差（x±s）表示；多組間比較采用單因素方差分析，方差齊行Dunnett-t檢驗，方差不齊行Dunnett-T3檢驗，P<005表示差異有統計學意義。

3結果

31血清溶血素測定與陰性對照組相比，高劑量組血清溶血素非常顯著增加（P<001），中劑量組也顯著升高（P<005）。表明海南野扇花對小鼠體液免疫具有增加作用，能增加機體抗體的產生能力。詳見表1。

32巨噬細胞吞噬功能測定與陰性對照組相比，高，中劑量組小鼠巨噬細胞吞噬率及吞噬指數均非常顯著高于陰性對照組（P<001），表明海南野扇花對小鼠巨噬細胞具有正向刺激作用，詳見表2。

33止血試驗給藥高中劑量組均能非常顯著的縮短小鼠凝血時間（P<001），且凝血效果與陽性對照組云南白藥無明顯差異。表明海南野扇花具有不錯的止血藥效。詳見表3。

4討論

海南野扇花是黎族民間處方的常用藥之一，多用于活血化瘀，主治跌打損傷、消炎止痛等。活血化瘀的活性通常與機體吞噬細胞功能有關，皮下毛細血管破裂，內出血的血瘀塊通常由巨噬細胞進行清除，因此活血化瘀的藥材往往有活化巨噬細胞的功效[6]。血清溶血素的測定主要考察抗體生成數量，試驗結果表明海南野扇花能夠提升抗體生成數，說明海南野扇花具有抗感染的功效，止血試驗說明海南野扇花具有良好的止血能力，與云南白藥相仿。

海南野扇花的主要化學成分為帕其沙明A、矮陀陀堿F、海南野扇花堿A～D、富貴草堿A、H等[7-8]，其中矮坨坨堿、富貴草堿、海南野扇花堿等化合物在同屬植物清香桂中可見，富貴草、金絲矮陀陀中則同時含有矮陀陀堿及富貴草堿。而矮陀陀本身是壯藥中的重要藥材，被形容為“千藥萬藥，不如矮陀陀”[9]。可見清香桂、富貴草、矮陀陀的共有成分是它們藥理藥效作用的主要化學成分。由于黃楊屬、富貴草屬及野扇花屬植物基本具有相似的功效，推測主要的活性成分是矮陀陀堿及富貴草堿，海南野扇花堿是否具有類似的活性成分還需要更進一步與富貴草、金絲矮陀陀進行比對研究才可知。

研究表明了海南野扇花的抗炎止血、活血化瘀功效可能通過提升體液免疫，巨噬細胞活性和激活凝血因子實現，是一種有潛力的治療跌打扭傷藥材。

參考文獻

[1]中南民族學院本書編輯組.海南島黎族社會調查[M].南寧：廣西民族出版社，1992：1-89.

[2]鄭希龍， 甘炳春， 孫偉，等. “材”類黎藥資源的傳統利用[J]. 世界科學技術：中醫藥現代化， 2014（2）：313-318.

[3]中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志（第四十五卷第一分冊）[M].北京：科學出版社，1980：16.

[4]徐叔云. 藥理實驗方法學[M].3版.北京：人民衛生出版社， 2002： 202-203.

[5]中華人民共和國衛生部.保健食品檢驗與評價技術規范（2003版）[S].2003：701-703.

[6]李正本， 于明鶴， 王國輝. 中草藥對免疫功能的影響[J]. 廣東畜牧獸醫科技， 2006， 31（3）：18-19.

[7]庚石山， 叢浦珠. 海南野扇花中甾體生物堿的化學研究[J]. 藥學學報， 1997，（11）：852-856.

[8]鄒忠梅. 海南野扇花和韭子的化學成分及質譜-質譜研究[D]. 北京：中國協和醫科大學， 1998.

[9]馬雯芳， 唐玉榮， 顏萍花，等. 壯藥矮陀陀中總生物堿含量測定條件優選及不同產地藥材含量比較[J]. 中國藥房， 2016（4）：476-478.