黎藥復(fù)體力湯抗疲勞和增強(qiáng)免疫力功能研究

李誠(chéng)叢+高香奇+周星

【摘要】目的：研究海南黎藥復(fù)體力湯對(duì)運(yùn)動(dòng)小鼠抗疲勞和增強(qiáng)免疫力作用，為藥物開發(fā)提參考依據(jù)。方法：使用小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行海南黎藥復(fù)體力湯抗疲勞和增強(qiáng)免疫力試驗(yàn)。結(jié)果：抗疲勞試驗(yàn)中，高劑量組（30g/kg·bw）小鼠游泳至力竭的時(shí)間、小鼠肝組織中SOD的活性與對(duì)照組比較，均有明顯延長(zhǎng)或增加（P<005）， MDA濃度顯著減少（P<001）；增強(qiáng)免疫力試驗(yàn)中，高劑量組（30g/kg·bw）能極顯著提高小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、conA誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、碳廓清能力和巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力（P<001）。結(jié)論：海南黎藥復(fù)體力湯具有抗疲勞和增強(qiáng)免疫力的效果。

【關(guān)鍵詞】海南黎藥；復(fù)體力湯；抗疲勞功能；增強(qiáng)免疫力功能

【中圖分類號(hào)】R96【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2017）05-0060-03

黎藥是黎族人民傳統(tǒng)使用的民間藥物的簡(jiǎn)稱，是黎族用以保健、預(yù)防和治療疾病的物質(zhì)[1]。黎藥復(fù)體力湯是將多種黎藥藥材搭配做成的湯劑，處方主要由雞血藤、杜仲、千斤拔、七葉蓮、散血丹、牛大力等組成。前期對(duì)黎藥復(fù)體力湯的提取工藝和安全性進(jìn)行研究評(píng)價(jià)顯示，黎藥復(fù)體力湯屬于實(shí)際無毒級(jí)，未顯示有急性、亞急性和遺傳毒性作用[2-3]。根據(jù)安全性研究結(jié)果，現(xiàn)進(jìn)行黎藥復(fù)體力湯的抗疲勞和增強(qiáng)免疫力試驗(yàn)，為開發(fā)具有抗疲勞和增強(qiáng)免疫力功能的海南黎藥復(fù)體力湯提供理論依據(jù)。

1儀器與材料

11儀器3K-18超速離心機(jī)（美國(guó)SIGMA公司）；UV2550紫外分光光度計(jì)（日本SHIMADZU公司）；MOC-15二氧化碳培養(yǎng)箱（日本三洋）、ST-260酶標(biāo)儀（上海科華）、SW-CJ-2FD超凈工作臺(tái)（蘇州凈化）、Nikon 50i顯微鏡（日本尼康）、YSQ-LS-50SF高壓滅菌器（江陰濱江）、XM7E-8112恒溫水浴（上海精宏）、LRH-150L生化培養(yǎng)箱（上海一恒）、游標(biāo)卡尺（精密度002mm）（上海九量）、AUW220D電子分析天平（日本島津）。

12藥物牛磺酸（500mg/片，批號(hào) 012022，美國(guó)GNC健安喜）。黎藥復(fù)體力湯由海南省五指山市黎族民間醫(yī)藥研究協(xié)會(huì)提供處方和藥材。取配方量的藥材，反復(fù)加水，煎煮3次，每次3h，合并三次濾液濃縮成所需濃度。

13動(dòng)物SPF級(jí)昆明種小鼠，由長(zhǎng)沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2009-0012。飼養(yǎng)環(huán)境為屏障級(jí)。

14統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS100軟件處理，以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，方差齊時(shí)采用t檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)采用t′檢驗(yàn)，P<005表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2方法

21抗疲勞試驗(yàn)選取檢疫合格小鼠50只，按體重隨機(jī)分為復(fù)體力湯高劑量組、中劑量組、低劑量組、陰性對(duì)照組和陽性對(duì)照組，每組雌雄各半。高、中、低劑量組給藥劑量分別為生藥30g/kg、20g/kg、10g/kg（分別相當(dāng)于人體推薦劑量的15、10和5倍），陰性對(duì)照組給予等體積純化水，陽性對(duì)照組為800mg/kg牛磺酸，配制成濃度80mg/mL牛磺酸溶液使用，配制方法：取4片牛磺酸片，入研缽研碎，加入25mL氯化鈉注射液，混勻即得。各組灌胃給藥，每日1次，連續(xù)21d，灌胃體積均為01mL/10g體重。

221小鼠5%負(fù)重游泳試驗(yàn)[4]末次給藥1h后，將小鼠置于游泳箱中，注水保持溫度于（25±2）℃（最適宜小鼠游泳溫度），于尾部上方負(fù)重該小鼠體重5%重量的保險(xiǎn)絲，負(fù)重過程中不影響小鼠運(yùn)動(dòng)。放入水池后開始記錄時(shí)間至小鼠沉入水池底部力竭為止。力竭標(biāo)準(zhǔn)：小鼠沉入水中超過10s，且放在平面上無法完成翻整反射。記錄游泳開始到小鼠力竭的時(shí)間。

212小鼠力竭運(yùn)動(dòng)后血清中SOD/MDA測(cè)定試驗(yàn)[5]在小鼠5%負(fù)重游泳試驗(yàn)計(jì)時(shí)結(jié)束后，將力竭小鼠眼球取血，加入離心管中，1500rpm離心10min，備用。SOD/MDA的測(cè)定按南京建成生物工程研究所提供的試劑盒給出的方法進(jìn)行。

22增強(qiáng)免疫力試驗(yàn)[6]選取體重18～22g的KM小鼠200 只，雄性，每40 只小鼠1 個(gè)大組，共分5 個(gè)大組。分別進(jìn)行碳廓清試驗(yàn)（免疫Ⅰ組），ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、NK細(xì)胞的活性試驗(yàn)（免疫Ⅱ組），臟體比值測(cè)定、半數(shù)溶血值（HC50）的測(cè)定和抗體生成細(xì)胞數(shù)的測(cè)定（免疫Ⅲ組），遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)（免疫Ⅳ組），小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)（免疫Ⅴ組） 。每大組40 只小鼠按照體重隨機(jī)分為4 個(gè)小組，分別為對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組。高、中、低劑量同抗疲勞試驗(yàn)，對(duì)照組給予等體積純化水。各組灌胃給藥，每日1次，連續(xù)30d，灌胃體積均為01mL/10g體重[7]。連續(xù)灌胃30d后測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)，包括細(xì)胞免疫功能指標(biāo)、體液免疫功能指標(biāo)、單核-巨噬細(xì)胞吞噬指標(biāo)及NK細(xì)胞活性測(cè)定。

3結(jié)果

31 抗疲勞試驗(yàn)

311小鼠5%負(fù)重游泳試驗(yàn)與陰性對(duì)照組比較，高劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<005）；陽性對(duì)照組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<001）；其余劑量組分別無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>005）。見表1。

312小鼠力竭運(yùn)動(dòng)后血清中SOD/MDA測(cè)定試驗(yàn)高劑量組小鼠力竭運(yùn)動(dòng)后血清中SOD測(cè)定值有明顯提高、MDA測(cè)定值顯著下降，兩者分別與對(duì)照組比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<005，P<001）；中、低劑量組分別與對(duì)照組比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>005）。見表2。

32增強(qiáng)免疫力試驗(yàn)

321黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響高劑量組小鼠足跖腫脹度和淋巴細(xì)胞增殖能力均明顯分別高于對(duì)照組（P<001），表明受試物可提供小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力和小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力。見表3。

322黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠體液免疫功能的影響各劑量組小鼠溶血空斑數(shù)、半數(shù)溶血值分別與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。見表4。

323黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響

3231巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力各劑量組小鼠吞噬率平方根反正弦轉(zhuǎn)換值、吞噬指數(shù)與陰性對(duì)照組比較，高劑量組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<001），低劑量組和中劑量組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。見表5。

3232碳廓清試驗(yàn)各劑量組吞噬指數(shù)與對(duì)照組的比較，高劑量組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<001）；低劑量組和中劑量組，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。見表6。

325黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠體重的影響和臟器比值的測(cè)定

3251黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠體重的影響各劑量組試驗(yàn)前、試驗(yàn)中期、試驗(yàn)?zāi)┢谛∈篌w重與對(duì)照組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>005）。

3252黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠免疫器官臟器比值的影響各劑量組小鼠脾臟/體重比值、胸腺/體重比值與對(duì)照組的比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。見表8。

4結(jié)論與討論

隨著社會(huì)節(jié)奏的加快，社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)日益激烈，疲勞已成為威脅人類健康的重要因素。因而延緩疲勞的發(fā)生和促進(jìn)疲勞的恢復(fù)成為營(yíng)養(yǎng)衛(wèi)生學(xué)、航天醫(yī)學(xué)、軍事醫(yī)學(xué)、運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)、保健醫(yī)學(xué)、康復(fù)醫(yī)學(xué)等學(xué)科的研究重點(diǎn)。近年來，在民間醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代科學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，不少學(xué)者在中藥抗疲勞方面做了大量的工作，取得了一定成效。海南黎藥復(fù)體力湯是海南黎族民間長(zhǎng)期使用且具有良好效果的經(jīng)驗(yàn)方，該方對(duì)于身體虛弱者可以增強(qiáng)體力，緩解體力疲勞，解除人體亞健康狀態(tài)。牛磺酸具有促進(jìn)有機(jī)體免疫力的增強(qiáng)和抗疲勞的作用，是臨床上用于抗疲勞的常用藥物之一，本課題通過與牛磺酸的抗疲勞效果比較，顯示黎藥復(fù)體力湯抗疲勞效果與牛磺酸相當(dāng)，但牛磺酸過多使用會(huì)增加人體血壓和心率，影響心臟功能，但黎藥復(fù)體力湯由多種中草藥組成，具有延緩并消除疲勞、改善激素分泌，無明顯不良發(fā)應(yīng)，且黎藥復(fù)體力湯還具有增強(qiáng)免疫力的功能。

經(jīng)過21d連續(xù)灌胃海南黎藥復(fù)體力湯，高劑量組（30g/kg）和陽性對(duì)照組小鼠的力竭游泳時(shí)間比陰性對(duì)照組明顯延長(zhǎng)（P<005，P<001），能顯著提高小鼠肝組織中SOD的活性（P<005，P<001）、降低MDA濃度（P<001），表明該方可阻止細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化，有利于運(yùn)動(dòng)耐力的提高，減少有氧代謝產(chǎn)物的生成，從而降低體內(nèi)能源物資的消耗，延緩疲勞的發(fā)生，有明顯的抗疲勞和抗氧化功能。中、低劑量組的力竭游泳時(shí)間、SOD活性和MDA濃度與陰性對(duì)照組比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>005），高劑量組的與牛磺酸陽性對(duì)照組抗疲勞作用效果相當(dāng)，提示該方具有開發(fā)意義。

經(jīng)口灌胃給予小鼠10、20、30g/kg·bw劑量的復(fù)體力湯30d后，與對(duì)照組比較，高劑量組（30g/kg·bw）能提高小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、conA誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、碳廓清能力和巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力（P<001）；各劑量復(fù)體力湯對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)、胸腺/體重比值、脾臟/體重比值、半數(shù)溶血值、抗體細(xì)胞生成數(shù)和NK細(xì)胞活性均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>005）。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版） 中增強(qiáng)免疫力功能的判斷標(biāo)準(zhǔn)，本實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞免疫功能和單核巨噬細(xì)胞功能結(jié)果均為陽性，表明復(fù)體力湯具有增強(qiáng)免疫力的功能。

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