核酸檢測與抗體檢測在HIV感染中的應用

摘要：目的：觀察核酸檢測與抗體檢測在HIV感染中的應用價值。方法：2016年10月至2017年10月382例確診HIV感染患者為本次實驗研究對象，其中有225例患者為早期感染，有157例患者為中晚期感染，所有患者均給予核酸檢測與抗體檢測，比較核酸檢測、抗體檢測對HIV感染檢出情況。結果：早期感染患者核酸檢測其陽性檢出率明顯高于抗體檢測（87.1%VS80.2%），中晚期感染患者抗體檢測其陽性檢出率明顯高于核酸檢測（80.4%VS85.9%），各項數據差異具有統計學意義（P<0.O5）。結論：早期HIV感染與中晚期HIV感染患者核酸檢測以及抗體檢測準確性具有較大差異，早期HIV感染患者核酸檢測準確性高，中晚期HIV感染患者抗體檢測準確性高。

關鍵詞：核酸檢測；抗體檢測；HIV感染；應用價值

目前艾滋病尚未發現其臨床治療特效藥，故艾滋病個體患者死亡率高，據我國衛生部門調查顯示我國艾滋病個體患病率逐年提高，嚴重威脅我國公民健康，因此早發現、早診斷對于HIV感染患者就顯得十分重要。目前臨床常用的HIV檢測方法有抗體檢測以及核酸檢測，按照我國2009年《全國艾滋病檢測技術規范》修訂版的要求，抗體檢測應對HIV抗體進行初篩和復篩，并對HIV抗體確證試驗，對于篩查試驗結果為陽性的標本經AIDS確證陽性后可出具HIV抗體一1型或HlV抗體一2型陽性確證報告[1]。本次研究對我實驗室2016年10月至2017年10月225例早期感染患者以及157例中晚期感染患者均給予核酸檢測與抗體檢測，通過比較核酸檢測、抗體檢測對HIV感染檢出情況，從而論證核酸檢測與抗體檢測在HIV感染中的應用價值。

1資料與方法

1.1一般資料

2016年10月至2017年10月382例確診HIV感染患者，其中有225例早期感染患者，有157例為中晚期感染患者。225例早期感染患者均在2016年10月至2017年10月AIDS確證中心實驗室檢測確診不確定，二次隨訪通過AIDS生物樣本庫中患者首次樣本查詢確診為陽性，其中男性113例，女性112例，年齡在18～69歲，平均年齡在（33.2±1.5）歲，文化程度：有137例為小學及小學以下文化程度，有49例為初中文化程度，有39例為初中以上文化程度。157例中晚期感染患者其血樣均來自AIDS疫情網絡直報系統查詢且確診陽性，所有患者血液樣本均經淋巴細胞亞群CD4+淋巴細胞明顯降低，且具有艾滋病晚期臨床癥狀，男性86例，女性71例，年齡在17～68歲，平均年齡在（32.8±1.4）歲，文化程度：有76例為小學及小學以下文化程度，有46例為初中文化程度，有35例為初中以上文化程度。兩組患者在年齡、性別、文化程度等一般資料上不存在統計學意義（P>0.05）。

1.2方法

1.2.1材料

T淋巴細胞亞群檢測采用美國BD公司流式細胞儀以及三色熒光單克隆抗體試劑盒進行檢測；HIV感染抗體檢測采用美國BD公司配套酶聯兔疫吸附試驗檢測進行檢測；HIV感染核酸檢測采用美國羅氏TaqMan全自動病毒載量儀檢測。

1.2.2抗體檢測：

美國BD公司配套酶聯兔疫吸附試驗檢測包括提取包被蛋白、蛋白質聚合反應以及一抗抗體孵育，對個體標本采用Tris緩沖鹽水（TBST）洗滌，而后加入適量酶標二抗、加底物液顯色，根據標準顯色情況結合置酶標檢測儀，于450 nm處空白對照各孔吸光度（A）值。

1.2.3核酸檢測：

采用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離法以及自動化儀器，參考相應商品化試劑、設備說明書操作提取核酸（RNA），并將提取后的核酸置于零下20攝氏度環境下進行保存。取核酸給予逆轉錄引物、脫氧核糖核苷酸三磷酸（dNTPs）、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、二硫蘇糖醇（DTT）、緩沖液、適量無RNA酶超純水以及RNA模板，在擴增儀或水浴箱中按規定溫度和時間進行逆轉錄，從而完成逆轉錄合成互補DNA（cDNA）。使用商品化實時熒光聚合酶鏈式反應（PCR）一步法試劑進行第一輪擴增反應，使用瓊脂糖凝膠電泳法分析法對擴增產物與相對分子質量標準進行比較，從而判斷擴增片段是否在預期的相對分子質量范圍內，實現擴增產物定性分析。

1.3觀察指標

（1）觀察比較225例早期HIV感染患者核酸檢測與抗體檢測情況，假陰性=漏診例數/總受檢例數，準確性=陽性例數/總受檢例數。

（2）觀察比較157例中晚期HIV感染患者核酸檢測與抗體檢測情況，假陰性=漏診例數/總受檢例數，準確性=陽性例數/總受檢例數。

1.4統計學處理

采用SPSS18.0系統軟件統計分析資料；早期HIV患者核酸檢測與抗體檢測情況與中晚期HIV患者核酸檢測與抗體檢測情況相關計數資料用（n，%）表示，并用X2檢驗；P<0.05表示有統計學意義。

2結果

2.1觀察比較225例早期HIV感染患者核酸檢測與抗體檢測情況，具體情況（見表1），225例早期HIV感染患者核酸檢測陽性檢出率以及準確性均明顯優于抗體檢測陽性檢出率以及準確性。

2.2觀察比較157例中晚期HIV感染患者核酸檢測與抗體檢測情況，具體情況（見表2），157例中晚期HIV感染患者抗體檢測陽性檢出率以及準確性均明顯優于核酸檢測陽性檢出率以及準確性。

3討論

艾滋病全稱為獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS），艾滋病主要是由于個體感染人類免疫缺陷病毒（HIV），HIV病毒是一種對人體免疫系統具有較高攻擊能力的病毒，人體免疫系統中CD4T淋巴細胞為其主要攻擊目標。艾滋病個體患者感染HIV病毒后機體大量CD4T淋巴細胞減少，降低個體免疫功能，隨著個體患者免疫功能的降低，患者機體感染發生率升高，甚至可誘使患者發生惡性腫瘤以及心肺功能衰竭，導致患者死亡[2]。目前臨床研究認為艾滋病源于非洲，而后隨移民帶入美國，我國首例艾滋病于1985年確診，艾滋病個體患者HIV病毒潛伏期可達10年甚至更久，艾滋病個體患者因機體免疫功能降低可發生帶狀皰疹、肺結核、肺炎、腦炎等多臟器組織感染，機體處于長期消耗狀態，最終由于全身衰竭死亡，目前尚未發現預防性疫苗，我國已經艾滋病列為乙類法定傳染病。

艾滋病其疾病進展可分為急性期、無癥狀期、艾滋病期，其中急性期主要是指個體患者實驗室HIV抗體又陰性轉為陽性的患者，相關研究調查你顯示約80%的艾滋病患者HIV感染后6周初篩即可檢出抗體，HIV感染12周后幾乎100%艾滋病患者可檢出抗體。無癥狀期個體患者HIV抗體陽性，且有流行病學史，艾滋病期患者已出現機體心、肺重要臟器損傷，由此可以看出對HIV感染患者進行抗體檢測是十分重要的[3]。目前HIV檢測方式包括抗體檢測以及核酸檢測，通過檢測可有效確診個體患者是否為早期感染，并針對個體患者疾病發展病程給予有針對性、快速治療。HIV感染后個體患者可損傷免疫細胞，出現不受控制的病毒血癥，約持續1周，該期間HIV傳染性最高，常規抗體檢測方法無法檢出，容易致使個體患者病情被忽視，從而造成病毒進一步傳播[4]。在傳統抗體檢測基礎上對于早期HIV感染患者給予核酸檢測方法，可有效提高HIV陽性檢出率。本次研究顯示對于早期HIV感染患者核酸檢測準確率為87.1%，明顯優于早期HIV感染患者抗體檢測準確率，中晚期HIV感染患者抗體檢測準確率為85.9%，明顯優于核酸檢測。

本次研究顯示對于HIV感染患者早期感染者與中晚期感染者其核酸檢測與抗體檢測準確性具有較大差異，HIV感染早期患者核酸檢測準確性高，HIV感染中晚期患者抗體檢測準確性高，醫師臨床工作過程中應根據患者不同階段選擇合適的檢測手段。

參考資料：

[1]侯海燕，燕清麗，劉靚等.核酸檢測與抗體檢測在HIV感染中的應用[J].國際檢驗醫學雜志，2015，16（23）：3431-3432.

[2]李莉華，王素玲，馬印圖等.單人份核酸檢測在降低輸血感染人類免疫缺陷病毒殘余風險中的應用[J].解放軍醫藥雜志，2017，29（2）：107-110.

[3]常俊峰.三種HIV抗原/抗體檢測方法對HIV早期感染檢測的診斷研究[J].中國免疫學雜志，2015，5（8）：1082-1084.

[4]孫麗娜，孫京濤，田永全等.肺結核抗體檢測聯合CRP檢測判斷HIV合并肺結核桿菌感染的效果研究[J].標記免疫分析與臨床，2015，22（6）：546-5225.