卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF表達變化及意義

張艷慧, 馮艷奇,張愛萍

(1黃河科技學院醫學院,鄭州450063；2河南醫學高等專科學校；3鄭州市中醫院)

卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF表達變化及意義

張艷慧1, 馮艷奇2,張愛萍3

(1黃河科技學院醫學院,鄭州450063；2河南醫學高等專科學校；3鄭州市中醫院)

目的 觀察卵巢癌患者組織中切除修復交叉互補基因(ERCC1)、基質金屬蛋白酶2(MMP-2)、血管內皮生長因子(VEGF)的表達變化，并探討其臨床意義。方法 收集60例卵巢癌患者的癌組織及其20例癌旁正常組織，采用免疫組化SP法檢測ERCC1、MMP-2、VEGF，分析三者與卵巢癌患者臨床病理特征及預后的關系。結果 卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF陽性表達率均高于癌旁正常組織(P均<0.05)，臨床分期高的卵巢癌組織ERCC1表達高于臨床分期低者(P<0.05)，分化程度低、臨床分期高和有淋巴結轉移卵巢癌組織MMP-2、VEGF表達高于分化程度高、臨床分期低和無淋巴結轉移者(P均<0.05)。MMP-2、VEGF陽性表達與陰性表達者5年生存率比較差異無統計學意義(P均>0.05)，ERCC1陽性表達者5年生存率高于陰性表達者(P<0.05)。結論 卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF表達增加，三者均在卵巢癌的發生、發展中起重要作用，且ERCC1可作為卵巢癌患者預后判斷的參考指標。

卵巢癌；切除修復交叉互補基因；基質金屬蛋白酶2；血管內皮生長因子

卵巢癌是病死率最高的一類婦科惡性腫瘤，70%診斷時已有卵巢癌浸潤、盆腹腔轉移[1]。腫瘤轉移是多基因、多階段、多步驟相互作用的級聯反應，形成腫瘤新生血管與降解細胞外基質金屬是此過程中兩個至關重要的環節[2]。切除修復交叉互補基因(ERCC1)參與DNA的修復，與腫瘤的生長分化密切相關；基質金屬蛋白酶2(MMP-2)與多種腫瘤的轉移、侵襲有關；血管內皮生長因子(VEGF)能夠誘導血管生成，導致腫瘤的生長、侵襲及遠處轉移。本研究觀察了卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF的表達，分析其表達與卵巢癌患者臨床病理因素及預后的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2004年6月～2008年6月黃河科技學院附屬醫院進行手術治療的卵巢癌患者60例，年齡37～66歲。病理類型：黏液性囊腺癌15例，漿液性囊腺癌33例，子宮內膜樣癌10例，其他類型2例；組織高分化 28 例，中分化 22例，低分化 10例；臨床分期Ⅰ～Ⅱ期 44例，Ⅲ～Ⅳ期16例；有淋巴結轉移27例，無淋巴結轉移33例；單側發病48例，雙側發病12例；術前均未接受過化療、放療或免疫治療。術中收集所有患者的癌組織及其20例癌旁正常組織，術后均經病理確診。患者術后均進行30個月的隨訪，末次隨訪至2011年10月。

1.2 ERCC1、MMP-2、VEGF檢測方法 所有組織標本用4%甲醛固定，脫水，包埋，切片，切片厚度為4 μm。先將切片進行抗原修復，在0.01 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)中放入切片，置入水浴鍋內煮20 min后取出；切片冷卻后用PBS液洗3次，加入一抗，置入4 ℃冰箱過夜；第2天取出后再用PBS液洗3×3 min，加入二抗(En Vision法)試劑，置入37 ℃水浴箱30 min；取出后用PBS液洗3次，DAB顯色10 min；最后，用蘇木精襯染、分化、藍化，脫水，樹脂封片。結果判定：染色結果由兩名有經驗的病理科醫生閱片審核，所有標本置于10×40倍光學顯微鏡下觀察。每例隨機選取5個視野，計數每個視野陽性細胞所占的比例，取平均值。ERCC1定位于細胞核內，MMP-2與VEGF定位于細胞質中，均以出現棕色或棕黃色顆粒為陽性細胞。染色強度評分標準: 不著色 0 分,黃色1分,棕黃色2 分，黃褐色3 分。陽性細胞所占比例評分標準: 陽性細胞數﹤5%者0 分，5%～﹤30% 者 1 分，30%～﹤70%者2 分，≥71%者3分。兩種評分相乘≥3者視為免疫染色陽性。

1.3 統計學方法 采用SPSS16.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗，采用Kaplan-Meier進行生存分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 卵巢癌及其癌旁正常組織ERCC1、MMP-2、VEGF表達比較 卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF陽性率分別為40.00%(24/60)、78.33%(47/60)、86.67%(52/60)，均高于癌旁正常組織的0、10.00%(2/20)、20.00%(4/20)，差異有統計學意義(P均<0.05)。

2.2 ERCC1、MMP-2、VEGF表達與卵巢癌患者臨床病理特征的關系 臨床分期高的卵巢癌組織ERCC1表達高于臨床分期低者(P<0.05)，分化程度低、臨床分期高和有淋巴結轉移卵巢癌組織MMP-2、VEGF表達高于分化程度高、臨床分期低和無淋巴結轉移者(P均<0.05)。見表1 。

表1 ERCC1、MMP-2、VEGF表達與卵巢癌患者臨床病理特征的關系

2.3 ERCC1、MMP-2、VEGF表達與患者生存率的關系 Kaplan-Meier生存分析顯示，MMP-2、VEGF陽性表達者5年生存率分別為19.41%、20.28%，MMP-2、VEGF陰性表達者分別為21.52%、22.41%，差異無統計學意義(P均>0.05)；ERCC1陽性表達者5年生存率為18.41%，高于陰性表達者的11.23%(P<0.05)。

3 討論

卵巢癌是婦科疾病中常見的惡性腫瘤之一，發病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌，嚴重威脅婦女的生命健康[3，4]。由于卵巢的發育、解剖結構及內分泌功能較復雜，疾病的早期癥狀不典型，很難在術前鑒別卵巢腫瘤的組織類型及其良惡程度[5]。卵巢上皮癌是卵巢惡性腫瘤中最多見的一種，其次是惡性生殖細胞腫瘤[6]。大約30%的卵巢上皮癌患者在手術中發現其腫瘤仍局限于卵巢，多數患者在手術時發現病變已擴散到子宮、大網膜、附件及盆腔各器官，侵襲和轉移是惡性腫瘤患者治療失敗和致死的主要原因之一。所以，早期診斷卵巢癌、及時進行手術治療是臨床上面臨上的一大難題[7，8]。

ERCC1參與核苷酸剪切修復，是其家族中具有特異性的重要成員之一，在19號染色體表達，可編碼297個氨基酸的蛋白，作用于DNA單鏈受損處5′端，參與多種腫瘤的發生、發展及增殖[9]。有研究[10]報道，ERCC1表達陽性的患者其術后生存期高于ERCC1表達陰性的患者;亦有研究[11]報道，ERCC1的表達與非小細胞肺癌的臨床分期、組織學類型及預后密切相關。本研究結果顯示，臨床分期高者ERCC-1表達高于臨床分期低者，且ERCC1陽性表達者總生存率高于陰性表達者。說明ERCC1的表達與生存顯著相關，影響患者預后，該結論與上述研究相符。MMP-2在血管生成過程中參與血管基底膜和細胞外基質的降解，而降解細胞外基質可為腫瘤侵襲與轉移提供路徑[12]。有研究[13]報道，MMP-2能夠破壞基底膜的完整性，致使癌細胞向其他部位轉移，且MMP-2陽性表達率在伴有淋巴結轉移的卵巢癌患者明顯高于無淋巴結轉移的患者。VEGF是血管內皮特異性的有絲分裂原，參與血管內皮細胞的增殖、遷移和血管構建的調控。VEGF可使血管的滲透性增加，為腫瘤轉移提供基質[14]。本研究結果顯示，ERCC1、MMP-2、VEGF在卵巢癌組織中的陽性表達率均高于癌旁正常組織，MMP-2、VEGF表達與卵巢癌的浸潤程度、臨床分期和淋巴結轉移有關，而與患者年齡、腫塊大小、病理類型及發生部位無關。

綜上所述，腫瘤的形成、發展及轉移都是一個多基因相互作用的復雜過程。卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF表達增加，且ERCC1表達與患者預后關系密切。因此，MMP-2、VEGF參與了卵巢癌的發生、侵襲和轉移，檢測ERCC1、MMP-2、VEGF的表達水平可作為卵巢癌患者病情及預后判斷的重要參考指標。

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張愛萍(E-mail: 389974090@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.10.023

R713.6

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1002-266X(2017)10-0067-03

2016-10-20)