荷移-紫外分光光度法測定硫酸慶大霉素含量

單海峰

（溫州醫科大學附屬第三醫院藥學部，浙江溫州325200）

荷移-紫外分光光度法測定硫酸慶大霉素含量

單海峰

（溫州醫科大學附屬第三醫院藥學部，浙江溫州325200）

利用硫酸慶大霉素與四氯苯醌在水溶液中發生電荷轉移反應，建立了簡單快速測定硫酸慶大霉素含量的荷移紫外分光光度法。荷移絡合物在波長342 nm處有最大吸收，該荷移衍生物的吸光度與硫酸慶大霉素濃度在0.1～3 mg/mL范圍內吸光度和濃度呈現良好線性關系y=0.1652x+0.3054，R2=0.9996，平均加樣回收率為100.81%，RSD為2.55%。該方法簡便、準確、重現性好，適用于硫酸慶大霉素的快速測定。

硫酸慶大霉素；四氯苯醌；荷移反應；紫外分光光度法

硫酸慶大霉素具有療效顯著、抗菌譜廣等特點。同時存在一定的不良反應，以耳毒性最為嚴重，使用需要注意用量，制劑質量需要嚴格控制。藥典[1]上測定硫酸慶大霉素含量的方法是高效液相色譜法，該方法分析檢測時間較長，還有文獻[2]報道HPLC-ELSD法，該方法操作過程繁瑣，都不適合生產中快速測定，因此研究制定簡便、快捷、準確、重復性好的硫酸慶大霉素檢測方法，對生產工藝過程和產品質量的控制，具有很好的實際應用價值。

1 實驗儀器和試劑

雙光束紫外可見分光光度計TU-1901；恒溫水浴鍋HH-W21-600；pH計RHSJ-4F；電子天平FA2104N。

硫酸慶大霉素標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號130326，效價638 U/mg）；四氯苯醌、無水乙醇、硼酸、硼砂均為分析純

2 實驗方法和結果

2.1 溶液的制備

硫酸慶大霉素溶液：精密稱取10.0 mg硫酸慶大霉素于10 mL容量瓶中，用純化水溶解并定容至刻度，得到1.00 mg/mL的慶大霉素溶液作為儲備液。

四氯苯醌溶液：精密稱取20.0 mg四氯苯醌于100 mL容量瓶中，用無水乙醇溶解并定容至刻度，得到0.20 mg/mL的四氯苯醌溶液作為儲備液。

硼酸-硼砂緩沖液：精密稱取19.07 g硼砂于1 L容量瓶中，用純化水溶解并定容至刻度，得到0.05 mol/L（等于0.2 mol/L硼酸根）的硼砂溶液；精密稱取12.37 g硼酸于1 L容量瓶中，用純化水溶解并定容至刻度，得到0.2 mol/L的硼酸溶液；以0.05 mol/L硼砂：0.2 mol/L硼酸=3.0:7.0的比例混合均勻后用1.0 mol/L HCl調pH至8.0作為緩沖液儲備液。

2.2 實驗方法

荷移反應：用移液管精密移取0.50 mL硫酸慶大霉素溶液，加入至50 mL容量瓶中，加入pH＝8.0的硼酸-硼砂緩沖液11.0 mL、0.20 mg/ mL的四氯苯醌6.0 mL，用純化水定容至刻度，搖勻，放至70℃水浴中恒溫10 min后，迅速冷卻至室溫。

2.3 荷移反應條件的選擇

2.3.1 測定波長的選擇

取硫酸慶大霉素溶液、四氯苯醌溶液和荷移反應后的樣品溶液分別進行紫外掃描。結果如圖1所示，硫酸慶大霉素在200～400 nm處無紫外吸收，四氯苯醌在287 nm處有最大吸收，荷移反應后衍生物在342 nm處有最大吸收，因此選擇342 nm為檢測波長。

圖1 硫酸慶大霉素、四氯苯醌、荷移反應后衍生物的紫外掃描圖譜

2.3.2 荷移反應介質的選擇

按照荷移反應配制溶液，選用甲醇、無水乙醇、丙酮和水為反應介質進行試驗，結果見表1，硫酸慶大霉素和四氯苯醌荷移反應后溶液澄清，顯淡紫色，且在水為介質時，吸光度最大，因此本實驗選用水作為反應介質。

表1 不同反應介質吸光度

2.3.3 四氯苯醌用量的影響

按照荷移反應配制溶液，四氯苯醌用量從1.0～10.0 mL逐漸增加，考察四氯苯醌用量對吸光度的影響。結果表明，隨著四氯苯醌用量的增加，吸光度呈現先增后降的拋物線形，當四氯苯醌用量為6.0 mL時，吸光度最大。

2.3.4 緩沖液pH和用量的影響

按照荷移反應配制溶液，緩沖液pH從5.0～ 9.0逐漸增加，考察緩沖液pH對吸光度的影響。結果表明:緩沖液為酸性或者中性時，荷移反應后，溶液呈淡黃色，結合吸光度，說明硫酸慶大霉素和四氯苯醌在酸性和中性緩沖液中，基本不發生反應。當緩沖液pH值為8.0時，吸光度最大，隨后緩沖液pH的增加，吸光度反而有所下降，因此本實驗選用緩沖液pH=8.0。還通過考察緩沖液的用量，結果顯示，緩沖液用量在0～1 mL時，吸光度迅速增加，而后隨著緩沖液用量的增加，吸光度逐漸增加，當緩沖液用量大于11 mL時，吸光度變化不大，因此本實驗選用緩沖液的用量為11 mL。

2.3.5 荷移反應溫度和時間的影響

按照荷移反應配制溶液，反應溫度40℃、50℃、60℃、70℃，水浴恒溫10 min后，迅速冷卻至室溫，測定吸光度。結果顯示，隨著反應溫度的增加，吸光度逐漸增加，因此本實驗選用荷移反應溫度為70℃。還考察了荷移反應時間，結果顯示：隨著反應時間的增加，吸光度也相應的增加，當反應時間為10 min時，吸光度達到最大值，而后增加反應時間，吸光度趨于穩定，因此本實驗選用荷移反應時間為10 min。

2.3.6 荷移反應后絡合物穩定性的考察

按實驗方法，待反應完成后，放置0 d、1 d、2 d、3 d、4 d測定吸光度的變化，結果見表2，荷移反應后衍生物在4 d內未見顯著性差異，RSD為1.149%。

表2 樣品穩定性參數

2.4 標準曲線的繪制

精密稱取硫酸慶大霉素，分別配制成濃度為0.1 mg/mL、0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、3.0 mg/mL的硫酸慶大霉素，分別取1 mL，進行荷移反應后，測定吸光度，以硫酸慶大霉素濃度為橫坐標、荷移反應衍生物的吸光度為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程y=0.1652x+ 0.3054，R2=0.9996，結果如圖2所示。結果表明本品在硫酸慶大霉素濃度為0.1～3 mg/mL范圍內吸光度和濃度呈現良好線性關系。

圖2 標準曲線

2.5 加樣回收率

用移液管精密移取1.0 mg/mL硫酸慶大霉素溶液1 mL加入至50 mL容量瓶中，共9份，再分別加入1.0 mg/mL硫酸慶大霉素0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL各3份，按實驗方法進行荷移反應后，測定其吸光度，計算該方法的加樣回收率，結果見表3，平均回收率為100.81%，RSD為2.55%。

3 結論

硫酸慶大霉素缺乏共軛基團，不具有紫外吸收，因此本實驗將硫酸慶大霉素經四氯苯醌荷移反應后可在波長342 nm處直接檢測，四氯苯醌不干擾測定，在濃度范圍內線性良好。該方法準確、簡便，重現性好，可用于生產中硫酸慶大霉素含量的快速測定。

表3 加樣回收率

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典[S].北京：中國醫藥科技出版社.二部.2015:1324-1326.

[2]陳志，李傳響.HPLC-ELSD法測定硫酸慶大霉素含量的方法改進[J].中國現代藥物應用，2014，（8）:34-35.

Determination of Gentamicin Sulfate by Charge Transfer Spectrophotometry

SHAN Hai-feng
（Department of Pharmacy，the 3rd Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou，Zhejiang 325200，China）

In the water medium，the charge transfer reaction between gentamicin sulfate and tetrachlorobenzoquinone investigated by spectrophotometry，a simple and rapidmethod for the determination of gentamicin sulfate was developed.The maximum absorption wavelength of the charge transfer complex was 342 nm.The absorbance and concentration of the charge transfer complex showed good linear relationship with the concentration of gentamicin in the range of 0.1～3 mg/mL.y=0.1652x+0.3054，R2=0.9996.The average recovery was 100.81%.RSD was 2.55%.this method is simple，accurate and reproducible，and can be used for the rapid determination of gentamicin sulfate.

gentamicin sulfate;tetrachlorobenzoquinone;spectrophotometry;charge transfer reaction

1006-4184（2017）4-0052-03

2016-12-12

單海峰（1985-），男，浙江紹興人，碩士，藥師，從事醫院的藥學工作。E-mail:306759345@qq.com。