中國沙棘與豐寧雄葉中蘆丁含量的比較

張洋洋，楊雪芳，王斌，張瓊姝，郭海利，張小民

（1.山西大學生命科學學院，山西太原030006；2.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

中國沙棘與豐寧雄葉中蘆丁含量的比較

張洋洋1，楊雪芳1，王斌1，張瓊姝1，郭海利2，張小民1

（1.山西大學生命科學學院，山西太原030006；2.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

試驗利用高效液相色譜法測定不同月份中國沙棘（雄）與豐寧雄葉中蘆丁含量，所用的色譜柱為Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.5%磷酸（33∶67），流速為1.0 mL/min，檢測波長為254 nm，柱溫是30℃。結果表明，中國沙棘♂葉中蘆丁含量在4—11月依次為0.317，0.492，0.424，0.897，0.981，0.387，1.462，0.441 mg/g；豐寧雄葉中蘆丁含量在4—11月依次為0.394，0.557，0.719，0.770，0.540，0.869，0.722，0.855 mg/g。通過比較2個品種的蘆丁含量，可為沙棘葉采摘時間的確定以及進一步有效開發和利用提供依據。

高效液相色譜法；中國沙棘（雄）葉；豐寧雄葉；蘆丁

沙棘（Hippophae rhamnoides L.）又名醋柳、酸刺，是胡頹子科沙棘屬的一種生態幅度廣、適應能力強的落葉漿果灌木或小喬木，雌雄異株[1]。就種植規模而言，山西省的野生沙棘面積約占全國的1/2，位居首位，主要分布在右玉蒼頭河流域、五臺山區、太岳山區、蘆芽山、云中山區、呂梁山中部和呂梁山南部。據保守估計，山西省沙棘總面積達到13萬hm2以上[2]，主要品種為中國沙棘亞種。

豐寧雄的原始材料來源于河北省豐寧縣，在遼寧省阜新縣做無刺株系的無性系測定，后經選育而確定為比較穩定的中國沙棘無刺雄無性系。該品種為中國沙棘亞種的良種，可作沙棘造林的配伍雄株，也是營造飼用沙棘林的理想栽植材料，其適用范圍為中國沙棘的全分布區。目前，其在新疆北疆、甘肅、內蒙古、北京、遼寧等地試種，均表現良好[3]。

目前，研究沙棘葉化學成分的文章較多，劉洪章[4]利用HPLC對沙棘中總黃酮及主要黃酮類成分異鼠李素、槲皮素、山奈酚和香豆素、齊墩果酸進行了定性、定量研究；陳海芳[5]對沙棘葉中總黃酮進行提取并確定其化學成分；劉錫建等[6]利用HPLC對沙棘葉中的異鼠李素和槲皮素進行測定；翁佳燕等[7]用HPLC法測定沙棘葉的黃酮配基含量；張益娜[8]對沙棘葉中總黃酮進行提取及測量；付文婷[9]利用HPLC法分離、鑒定了沙棘中熊果酸、齊墩果酸和異鼠李素等10種化合物；趙二勞等[10]測定了沙棘葉中綠原酸和蘆丁的含量；郁長治等[11]利用HPLC法同時測定沙棘葉中槲皮素、山奈素、異鼠李素含量；李敏等[12]通過HPLC法同時測定中亞沙棘中的原兒茶酸、蘆丁和異鼠李素的含量；李德鑫等[13]利用HPLC法初步測定了沙棘顆粒中的蘆丁含量；安樂等[14]利用HPLC法研究沙棘葉中總黃酮的提取純化工藝；李淑珍等[15]利用分光光度法測定了沙棘葉中總黃酮的含量。但通過高效液相色譜法對不同月份的中國沙棘葉及豐寧雄葉中蘆丁含量的比較尚未見報道。

本試驗用高效液相色譜法測定不同月份中國沙棘葉及豐寧雄葉中蘆丁的含量，并進行2個品種蘆丁含量的比較，旨在為進一步開發利用沙棘以及種植推廣提供理論依據。

1 材料和方法

1.1 材料

供試材料中國沙棘葉（雄）于2015年采自山西省祁縣來遠鎮，豐寧雄葉、雜優2號沙棘葉于2015年采自山西省太谷縣，將其置干燥箱60℃干燥后粉碎備用。

1.2 儀器

島津SPD-15C高效液相色譜儀（日本，島津公司）；N-3000色譜工作站（浙江大學）；BG-01超聲波清洗機（廣州邦潔超聲波設備有限公司）；循環真空水泵（SHZ-D（III）型，上海楚柏實驗室）；電子分析天平（上海電平儀器廠）；Heal Force SMART-N超純水機（上?？道追治鰞x器有限公司）

1.3 試劑

蘆丁對照品（購買自國家標準物質網）；甲醇為色譜純（天津市大茂化學試劑廠）；水為超純水，其他試劑均為分析純。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件色譜柱為DiamonsilC18柱（150mm× 4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.5%磷酸（33∶67），流速為1.0 mL/min，檢測波長254 nm，柱溫是30℃。進樣量20 μL，進樣前經0.22 μm的針頭過濾器過濾。

1.4.2 溶液的配制

1.4.2.1 標準品溶液的配制準確稱取干燥至恒質量的蘆丁標準品31.25 mg，加甲醇適量，超聲溶解后冷卻，置于25 mL容量瓶中，定容，搖勻，即得標準品溶液。在1.4.1色譜條件下，測得的蘆丁標準品色譜如圖1所示。

1.4.2.2 供試樣品的配制準確稱取中國沙棘葉（雄）及豐寧雄干葉粉末各5 g，置50 mL具塞錐形瓶內，準確加入甲醇50 mL，稱質量，超聲波輔助提取40 min（功率80 W，頻率40 kHz），待其冷卻至室溫，再稱其質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，過濾，取濾液。測定時再取適量濾液，經0.22 μm有機微孔濾膜過濾，取濾液各自備用，即得16種供試樣品。

2 結果與分析

2.1 線性關系的考察

分別準確吸取蘆丁對照品溶液1，5，10，15，20 μL。在1.4.1色譜條件下，分別注入液相色譜儀測定。以蘆丁的進樣量（X，μg）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，得到回歸方程為：Y＝1.0×106X（r＝0.992 4，n＝5），結果表明，對照品進樣量在0.25～5 μg時，蘆丁進樣量與峰面積呈現良好的線性關系（圖2）。

2.2 精密度試驗

分別準確吸取1.25 μg/mL蘆丁標準溶液各20 μL，重復進樣5次，結果表明，蘆丁峰面積的RSD為1.37%（n＝5），精密度較好。

2.3 穩定性試驗

取中國沙棘（雄）9月的供試樣品，分別于0，2，4，6，8，12 h進樣，在1.4.1條件下測定，確定試液的穩定性。結果表明，蘆丁峰面積的RSD為1.12%（n＝6），中國沙棘葉供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.4 重復性試驗

取雜優2號沙棘葉9月的供試樣品5份，每份約5 g，按1.4.2.2的方法制備樣品溶液，在1.4.1色譜條件下分別進樣測定，以測試其穩定性。結果表明，RSD為1.43%，重現性良好。

2.5 加樣回收試驗

準確稱取已知蘆丁含量的供試品粉末5份，每份約5 g，分別置于50 mL具塞錐形瓶中，分別加入1 mL濃度為1.25 mg/mL的蘆丁對照品溶液，按照1.4.2.2供試品溶液的制備方案制備成5份供試液，在1.4.1色譜條件下測定，結果表明，測得的平均回收率為97.56%，RSD為0.94%，回收結果良好（表1）。

表1 沙棘葉蘆丁回收率測定結果

2.6 樣品含量測定

取不同月份的中國沙棘（雄）葉和豐寧雄葉在1.4.2.2的方法下制備好供試樣品，分別進樣20 μL，按照1.4.1色譜條件測定峰面積，計算樣品中蘆丁的含量。

從圖3可以看出，中國沙棘♂葉中各月份蘆丁含量差異較大，蘆丁最低值為0.317 mg/g，最高值為1.462 mg/g，即在4月26日中國沙棘♂葉中蘆丁含量最低，在10月16日中國沙棘♂葉中蘆丁含量最高，為何時采摘、提取中國沙棘♂葉獲得最高含量的蘆丁提供參考。同時，9月12日中國沙棘♂葉蘆丁含量為0.387 mg/g，即中國沙棘♂葉蘆丁含量為0.146 6%，對比趙二勞等[10]通過高效液相色譜法所測定的忻州市寧武縣同樣質量下的野生中國沙棘蘆丁含量為0.14%，其蘆丁含量基本一致。

由圖4可知，豐寧雄葉各月份蘆丁含量雖有變化，但與中國沙棘♂葉相比，各月份蘆丁含量變化較小，最低值為0.394 mg/g，最高值為0.869 mg/g，即在4月16日豐寧雄葉中蘆丁含量最低，在9月12日豐寧雄葉中蘆丁含量最高，為何時采摘、提取豐寧雄葉獲得最高含量的蘆丁提供參考。

通過比較圖3，4可知，11月3日中國沙棘♂葉蘆丁含量為0.441 mg/g，豐寧雄葉為0.855 mg/g。落葉中蘆丁含量豐寧雄葉遠高于中國沙棘♂葉，幾乎為中國沙棘♂葉的1倍，分析原因可能是由于豐寧雄是中國沙棘♂的良種，加上豐寧雄地處開闊，通風、日照情況較好，落葉干燥較快，但其具體原因還有待進一步考察。

3 討論

目前，對于沙棘葉總黃酮量的測定研究較多，最初有化學方法，如肖蓉等[16]根據黃酮類化合物與金屬離子形成穩定的呈色螯合物這一性質，從而測定沙棘中總黃酮含量。此后，采用分光光度法進行測定，如付桂香等[17]根據黃酮類化合物與鋁離子在甲醇中形成穩定的呈色螯合物這一性質，采用分光光度計測定沙棘中總黃酮含量。隨后，付桂香等[18]運用高效液相色譜法測定沙棘中蘆丁、槲皮素、異鼠李素的含量，為以后的蘆丁含量測定提供技術參考。隨后，通過超聲波法、攪拌法和回流法提取沙棘中的黃酮，如劉樹英等[19]通過這3種方法測定沙棘葉中的總黃酮量。但是通過高效液相色譜法測定野生中國沙棘及豐寧雄葉中各月份蘆丁含量并進行比較尚未見報道。

蘆丁是一種具有代表性的黃酮類化合物，有降低毛細血管通透性和脆性的作用，保持及恢復毛細血管的正常彈性，同時具有抗炎、抗病毒、抑制醛糖還原酶的作用，可用于防治高血壓腦溢血，糖尿病視網膜出血和出血性紫癜等，也用作食品抗氧化劑和色素。

沙棘作為食藥兩用植物，具有較高的食用及藥用價值，且沙棘中黃酮含量較高，富集于葉中，所以，本研究首次采用高效液相色譜法測定了山西野生中國沙棘（雄）葉及其良種豐寧雄葉中蘆丁的含量，并進行2個品種間的蘆丁含量比較，為進一步開發利用沙棘及種植推廣提供參考。

綜上所述，中國沙棘雄葉在10月16日蘆丁含量最高，為1.462 mg/g，豐寧雄葉在9月12日蘆丁含量最高，為0.869 mg/g，中國沙棘雄葉蘆丁含量的最大值高于豐寧雄葉。但是豐寧雄作為中國沙棘♂的良種，通過觀察可以得出，11月3日中國沙棘♂落葉的蘆丁含量為0.441 mg/g，豐寧雄落葉為0.855 mg/g，并且各月份豐寧雄葉中蘆丁含量變化較小，落葉中蘆丁含量遠高于中國沙棘♂葉，蘆丁含量損失較少，為以后沙棘品種推廣以及沙棘葉中蘆丁的提取提供理論依據。

［1］劉瑞香，楊劼，金爭平，等.蒙古沙棘亞種和中國沙棘亞種良種及其雜種1代ISSR分析[J].干旱區資源與環境，2007，21（12）：146-150.

［2］孟晶巖，王賢萍，巫東堂，等.山西省沙棘資源利用現狀及發展對策[J].山西農業科學，2004，32（4）：64-67.

［3］黃銓，于倬德.沙棘研究[M].北京：科學出版社，2006：364-364.

［4］劉洪章.沙棘生物學及化學成分研究[D].長春：吉林農業大學，2003.

［5］陳海芳.沙棘葉總黃酮提取工藝和化學成分研究[D].楊凌：西北農林科技大學，2006.

［6］劉錫建，劉則華，肖穩發，等.沙棘總黃酮的測定及其抗氧化性能[J].上海工程技術大學學報，2006，20（2）：135-139.

［7］翁佳燕，吳曉婧，李瑞霞，等.沙棘葉中黃酮糖苷和黃酮配基的含量[J].國際沙棘研究與開發，2007，5（2）：1-4.

［8］張益娜.新疆沙棘葉黃酮類化合物提取，純化及抑菌性研究[D].烏魯木齊：新疆農業大學，2007.

［9］付文婷.新疆中亞沙棘（H.rhamnoides L.subsp.turkestanica Rousi）化學成分與抗氧化活性的初步研究[D].烏魯木齊：新疆醫科大學，2009.

［10］趙二勞，王迎進，薛麗，等.反相高效液相色譜法同時測定沙棘葉中綠原酸和蘆丁[J].分析科學學報，2012，28（1）：101-103.

［11］郁長治，鄭永剛，吳旭東，等.RP-HPLC法測定沙棘葉中黃酮苷的含量[J].中國當代醫藥，2012，19（11）：51-52.

［12］李敏，王曉梅，熱娜·卡斯木，等.HPLC同時測定中亞沙棘中的原兒茶酸、蘆丁和異鼠李素[J].華西藥學雜志，2014，29（3）：314-316.

［13］李德鑫，鄭亞玉，靳鳳云.淺談用HPLC法測定沙棘顆粒中的蘆丁含量[J].求醫問藥（學術版），2012，10（3）：132-133.

［14］安樂，郁長治，郭小娜.沙棘葉中總黃酮提取純化工藝研究[J].安徽農業科學，2016，44（11）：154-155.

［15］李淑珍，武飛，陳月林，等.沙棘葉總黃酮的提取工藝優化[J].中國民族民間醫藥，2016，25（1）：14-16.

［16］肖蓉，肖卓殷.醋柳總黃酮甙元的含量測定[J].四川醫學院學報，1982，13（1）：1-5.

［17］付桂香，馮瑞芝.不同種及不同采收時間沙棘葉中總黃酮的含量測定與比較[J].中國中藥雜志，1997，22（3）：147-148.

［18］付桂香，趙世萍.高效液相色譜法測定沙棘葉中黃酮含量[J].中國中藥雜志，1997，22（5）：299-300.

［19］劉樹英，鄭濤，劉俊男，等.沙棘黃酮提取方法比較研究[J].安徽農業科學，2009，37（24）：11551-11552.

鄭重聲明

有單位、個人假冒本刊名義開設虛假投稿網站，給作者、讀者帶來困惑甚至造成經濟損失，嚴重損害了本刊聲譽。

本刊鄭重聲明：目前本刊所有稿件只通過郵箱（sxnykx@126.com）投稿，除此之外的其他投稿方式均為虛假渠道。請廣大作者、讀者注意識別，謹防上當受騙。

《山西農業科學》編輯部

Comparison of Rutin Content in Chinese Seabuckthorn and Fengningxiong Leaves

ZHANGYangyang1，YANGXuefang1，WANGBin1，ZHANGQiongshu1，GUOHaili2，ZHANGXiaomin1
（1.College ofLife Science，Shanxi University，Taiyuan 030006，China；2.Shanxi Jinkehai Biological TechnologyCo.,Ltd.，Taiyuan 030006，China）

HPLC method was used to determine the content of rutin in Chinese seabuckthorn（male）leaves and Fengningxiong leaves in different months,and compare the results.The column was a Diamonsil C18column（150 mm×4.6 mm,5μm）,the mobile phase consisted ofmethanol-0.5%phosphoric acid（33∶67）,the flowrate was 1.0 mL/min,the detection wavelength was 254 nm,and the column temperature was 30℃.The result showed that the content of rutin in leaves of China seabuckthorn from April to November were 0.317,0.492,0.424,0.897,0.981,0.387,1.462,0.441 mg/g,respectively.Rutin content of Fengningxiong leaves from April to November were 0.394,0.557,0.719,0.770,0.540,0.869,0.722,0.855 mg/g,respectively.By comparing the rutin content of 2 varieties, it can provide the basis for the determination ofthe harvest time and the further development and utilization ofseabuckthorn leaves.

HPLC;Chinese seabuckthorn（male）leaves;Fengningxiongleaves;rutin

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.05.13

S793.6

：A

：1002-2481（2017）05-0725-04

2016-11-29

張洋洋（1991-），男，河北辛集人，在讀碩士，研究方向：植物化學與藥理。張小民為通信作者。