魏燕,詹子逸,章宇,2,*
(1.浙江大學生物系統工程與食品科學學院,浙江杭州310058;2.浙江大學馥莉食品研究院,浙江杭州310058)
蔓越莓生物活性物質及主要生理功能研究進展
魏燕1,詹子逸1,章宇1,2,*
(1.浙江大學生物系統工程與食品科學學院,浙江杭州310058;2.浙江大學馥莉食品研究院,浙江杭州310058)
蔓越莓是北美三大傳統水果之一,在美國非常風靡,其制品也正在逐步被引進中國市場。由于其中含有大量植物活性物質,具有很好的保健功能,尤其是其獨特的A型原花青素,能有效保持泌尿道的健康,還具有抗氧化、防腫瘤等功效,近年來越來越受到人們的關注。其中活性物質檢測技術最為廣泛應用、效果最好的是高效液相色譜法與紫外法、質譜法的結合。
蔓越莓;生物活性物質;檢測技術;生理功能
蔓越莓,又稱蔓越橘、小紅莓,是越橘屬水果,主要生長在北半球的涼爽地帶酸性泥炭土壤中,與康科特葡萄和藍莓并稱為北美傳統三大水果[1]。蔓越莓的果實是2 cm~5 cm長的卵圓形漿果,成熟后表皮和果肉均呈鮮紅色,食用時重酸微甜,與其他食品搭配,可以增加清爽的口感。蔓越莓即使經過各種烹飪,它特有的那種鮮紅色不會發生改變,口味在烹飪后也有增無減,其已成為以美國為代表的西方國家家庭不可或缺的佐餐佳品。
除了口感極佳,蔓越莓還是一種富含膳食纖維、植物化學素和多種維生素及礦物質的低熱量水果,堪稱健康營養素的寶庫。蔓越莓中能提取出大量具有生理活性作用的黃酮類化合物等植物化學素,這些物質大多具有抗氧化的作用,能對抗生物膜中不飽和脂肪酸的脂質過氧化,保護生物膜的結構和功能,防止各種退行性病變[2]。最新研究表明,蔓越莓具有預防尿道感染、抗幽門螺旋菌、抗氧化、抗腫瘤、預防心血管疾病等功效[3]。目前蔓越莓制品非常多,有果汁濃縮物、酸奶[4]、咀嚼片、膠囊、果酒、果干等,且正在逐步被引進中國市場。由于在中國蔓越莓仍處于野生狀態,僅在東北等地分布有一些野生種,所以無論是種植栽培和市場開發,還是原料深加工和功能性食品研制,均處于起步階段。然而,由于獨特的口感和天然高效的抑菌及保健功效,蔓越莓及其加工制品在我國果蔬加工行業的開發前景和產品的市場前景潛力巨大。本文基于蔓越莓在營養成分和功能方面的最新研究成果,就蔓越莓主要生物活性物質的營養組成、分析檢測及主要生理功能進行綜述。
1.1 營養素
蔓越莓鮮果中碳水化合物、蛋白質和脂肪及代表性維生素和礦物質的含量如表1所示。

表1 蔓越莓中各營養素成分及含量[5]Table 1 Ingredients and contents of various nutrients in cranberry
從表1中可看出,蔓越莓是一種低熱量、高膳食纖維、多種維生素及礦物質并存的食物,其高含量的膳食纖維具有促進腸道蠕動和排毒、預防結腸癌和輔助防治糖尿病等功效;豐富的VC起到預防壞血病、抗氧化、促進生長發育、增強體質和減輕疲勞等作用。此外,蔓越莓所含有的礦物質中鉀的含量較高,而鈉的含量較低,非常適合高血壓患者食用;另外,VA與β-胡蘿卜素含量也較為豐富,具有防治視力減退、維護皮膚細胞功能和維持正常免疫系統功能等作用[6]。
1.2 生物活性物質
蔓越莓中能提取出大量具有生理活性作用的植物化學物質,這些物質大多具有抗氧化的作用,能對抗生物膜中不飽和脂肪酸的脂質過氧化,保護生物膜的結構和功能,防止衰老、腫瘤等各種退行性病變。蔓越莓中的主要生物活性物質有原花青素,黃酮醇類物質,酚酸,花青苷等。
原青花素又稱濃縮單寧酸,是一種酚類化合物,在蔓越莓中含量達到34.3 mg/100 g,是目前國際上公認的清除人體內自由基最有效的天然抗氧化劑。與其它漿果類水果不同的是,蔓越莓中的原青花素含有一個或多個A型的黃烷鍵。蔓越莓中富含的原青花素屬于表兒茶素4β→8位和2β→O→8位鍵合的寡聚體(A型結構),而非傳統的原花青素4β→8位鍵合的寡聚體(B型結構)(圖1)。這種獨特的分子結構使其能與細菌纖毛的外源性凝集素相接觸,具有抗細菌粘附特性[5]。

圖1 A型原花青素和B型原花青素連接方式Fig.1 The bindings of A-type proanthocyanidins and B-type proanthocyanidins
蔓越莓中主要的黃酮醇類物質是3,5,7,3′,4′-五羥基黃酮(槲皮素),其含量約為25 mg/100 g,因其具有良好的抗氧化活性,所以能抑制低密度脂蛋白膽固醇的初級氧化,有效降低血液中甘油三酯的水平,有助于防護心血管系統疾病和促進心血管健康[7]。此外,槲皮素還可通過抑制某些酶如細胞外信號調節激酶ERK、蛋白激酶HKT、生存素、蛋白激酶PKC的活性,使致癌原無法轉變成有活性的致癌化合物,從而發揮一定的抗癌效果[8]。除此之外,蔓越莓中的黃酮醇類物質還以糖苷的形式存在,主要是槲皮素-3-O-半乳糖苷,約占75%,另外還含有少量槲皮素的葡萄糖苷、木糖苷、鼠李糖苷、阿拉伯呋喃糖苷和阿拉伯吡喃糖苷。
蔓越莓中的酚酸物質主要包括羥基肉桂酸和水楊酸,它們以游離形式存在,或是作為多酚結構的主要基團嵌入多酚類物質的化學結構中。此外,有研究發現蔓越莓中還存在羥基肉桂酸的衍生物,包括對香豆酸、芥子酸以及香豆酰葡萄糖、阿魏酰葡萄糖和咖啡酰葡萄糖等?;穷愇镔|。
花青苷作為蔓越莓中標志性的深紅色色素,可作為其重要質量標志。蔓越莓中的花青苷主要以花青素和芍藥素的半乳糖苷和阿拉伯糖苷形式存在。然而,蔓越莓中還可檢測到少量花青素和芍藥素的3-O-葡萄糖苷,以及飛燕草色素-3-O-半乳糖苷和阿拉伯糖苷。
此外,蔓越莓還含有許多其它成分,如果膠、鞣花酸、白藜蘆醇、木脂素、烏蘇酸及生育三烯酚和ω-3脂肪酸等,具有潛在的保健功能和營養價值。在光、熱和氧氣的作用下,鞣花酸可與黃烷-3-醇以碳-碳鍵聚合形成鞣花丹寧,后者與原花青素一起組成了蔓越莓中的主要丹寧類物質。
對蔓越莓提取分析發現了很多生物活性物質,有黃酮醇(槲皮素3-半乳糖苷)、花青素(花青素3-半乳糖苷、矢車菊)、單寧酸(鞣花單寧、原花青素)、酚酸衍生物(香豆酸、綠原酸、鞣花酸、對羥基苯甲酸)等,正是這些物質賦予了蔓越莓各種營養與保健價值。
蔓越莓的成分分析通常要通過分離和分析兩步。分析和分析技術的采用取決于被測物的化學性質、樣本的容量以及是否有干擾物,樣品測出的酚類含量受檢測方式的影響非常大。目前應用于檢測食品中活性物質的技術有氣象色譜法、毛細管區帶電泳法、膠束毛細管色譜法等等,但是最為廣泛的是高效液相色譜法(HPLC)與紫外法、質譜法的結合[9]。
2.1 色譜分離
分離蔓越莓中酚類與黃酮類的物質常采用反相色譜法(reversed-phase,RP)進行二元溶劑系統的梯度洗脫,流動相多為水與有機改進劑。一般有機相常采用水乙腈、甲醇、或是兩者與甲酸、乙酸、三氟乙酸、醋酸銨或甲酸鹽的混合物。通常高效液相色譜法控制酚類和黃酮類物質的分析包括平衡階段在一小時以內,一般流量在1 mL/min或1.5 mL/min。
對于花青素洗脫模式由花青素B環的替代物,替代的位置,以及花青素上的糖分子數、糖?;某潭葲Q定。根據B環的替代物排出的洗脫順序為花翠素,矢車菊素,牽牛色素,花葵素,芍藥色素,錦葵色素[10]。高分子色素在使用RPC18柱的高效液相色譜法時會因很多成分易洗脫在一起形成一個寬峰而受到限制,最近聚苯乙烯-二乙烯基苯的RP柱提供了高分子色素分析的途徑。而黃酮類的洗脫方式是黃酮醇和黃酮先洗脫,接著再洗脫黃烷酮。
2.2 紫外可見吸收光譜檢測
所有酚類物質均有一個或以上的芳香環,故可以高效吸收紫外光,每種酚類由于結構的細微差別都有一個特殊的紫外光或紫外可見吸收范圍。二極管陣列檢測(DAD)能得出特定成分掃描和最大波長的數據,與色譜保留的特性結合,這些光譜特性可以得出洗脫物質的成分和結構特點。
花青素在240 nm~280 nm間有一個特殊的峰,在450 nm~560 nm間有個很強的可視峰,這個峰使花青素更容易與黃酮類區分開來,且其最大吸收峰會因為花青素的生色團發生輕微的變化。原花青素的紫外光譜有一個第二吸收峰在240 nm~280 nm范圍內,第一吸收峰在300 nm~380 nm范圍內。
黃酮類在紫外區域有兩個主要吸收區。第一個是在300 nm~500 nm,可能的原因是B環的存在,底物的性質以及C環的共軛作用;第二個吸收區在240 nm~285 nm,是由于A環的存在導致的。在芳香環加上一個能提供電子的取代基,如甲基、甲氧基和結合態的羥基基團通常只對最大吸收峰的位置產生微小的影響。黃酮醇類的紫外光譜有第一吸收區240nm~280nm和第二吸收區300 nm~380 nm[11]。
然而大多數苷和?;鶜埩粑锏陌l色團很弱,很難用DAD來區分,所以采用單級MS與UV-VIS聯合使用來更好得確定樣品中的酚類物質。
2.3 質譜儀檢測
質譜儀經常用于檢測分子量和確定酚醛環上的取代基的分布。
現在,大氣壓力電噴霧電離(APESI)和大氣壓力化學電離(APCI)幾乎成為了HPLC-MS法唯一的電離法。陰離子模式電噴霧電離對于大部分的苯酚和多酚化合物更敏感,但是花青素更適合用陽離子模式電噴霧電離。因此對于大部分苯酚和多酚化合物可從[MH]-離子得出分子量,而花青素則從M+得出分子量。蔓越莓中主要生物活性物質的分子離子峰、特征性碎片離子峰等質譜參數如表2所示。

表2 蔓越莓中原花青素物質的質譜特征[12-13]Table 2 Characteristics of proanthocyanidins in cranberries
3.1 預防尿道感染
蔓越莓最獨特也是目前研究最多的功效是預防尿道感染。尿道感染是指泌尿系統受到細菌的感染從而引起炎癥反應。大腸桿菌是尿道感染的主要致病因素,尿道感染80%~90%是由大腸桿菌引起的。大量的科學研究已經證實[14-15],蔓越莓中含有的原花青素與其他植物如蘋果、葡萄中的原花青素有很大的區別,這些植物的原花青素都是B型連接的黃烷鍵,而蔓越莓中的原花青素含有一個或多個A型的黃烷鍵。這種A型連接的結構非常獨特,能與細菌纖毛的外源性凝結素相抵觸,從而使細菌不能與細胞受體結合,通過競爭性抑制,發揮有效的抗細菌黏附特性,可以抑制大腸桿菌吸附于泌尿道壁,從而保持泌尿道的健康。鑒于富含A型黃烷鍵結構原花青素成分的植物稀少,所以防止泌尿道感染可說是蔓越莓特有的,無副作用的保健功效。體內動物實驗已經證實了蔓越莓提取物在預防尿路感染方面的突出效果,其機制是抑制I型和P型傘狀尿道病原體(主要是大腸埃希氏桿菌病原體)黏附在尿道上皮,從而控制其引起的病原體定植與感染[16]。另有研究報道亞硝酸鹽在弱酸性條件下發生歧化反應形成二氧化氮(NO2)和一氧化氮(NO),后者在體內呈現時間和劑量依賴性的抑菌活性;因此,蔓越莓或其原花青素提取物可促進酸化的亞硝酸鹽轉化為NO,從而發揮其預防尿道感染的作用[17]。此外,蔓越莓提取物可在體內通過降低環氧化酶II(COX-2)、轉錄因子NF-κB和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等細胞炎癥因子的表達來抑制炎癥反應,或是控制氧化應激水平來提高機體免疫應答性,從而控制尿道感染性疾病的發生[18]。歸納起來,蔓越莓預防尿道感染的主要機理如圖2所示。

圖2 蔓越莓預防泌尿感染機理圖Fig.2 Potential mechanisms of action explaining cranberry beneficial effects on UTIs
近年來許多流行病學研究證實了蔓越莓有效降低人群尤其是婦女人群尿道感染的比例。相對于男性而言,女性由于其特殊的生理結構——尿道長度短、尿道口離膀胱近以及不良的生活習慣——憋尿等,比男性更易患尿路感染,調查研究顯示男女發病比率約為50∶1。因此,蔓越莓因能有效防控尿道感染而被譽為“女性之友”[19]。近年來,陸續有報道采用蔓越莓提取物膠囊(1 g/d,12個月)或蔓越莓濃縮混合液(75 mL/d,12周)進行飲食干預研究,發現蔓越莓有效防止有尿道感染患病史婦女的復發和維持泌尿系統健康[20]。最新前瞻觀察性研究報道了一種名為Cysticlean的蔓越莓提取物對復發的性交后癥狀性尿路感染(recurrent symptomatic postcoital urinary tract infections,PCUTI)的預防效果。在開始Cysticlean治療前3個月時,患者PCUTI發作次數為(2.8±1.3)次,治療6個月后減少到(0.2±0.5)次(P<0.000 1),改善了93%,具有代替經典抗生素來預防尿道感染復發的潛力[21]。
3.2 抗幽門螺旋菌
幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)是引發慢性胃炎和消化性潰瘍病的致病菌,是胃癌、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等疾病發病的重要因素,其人群感染率高達50%以上,且自從1994年世界衛生組織正式將其列為第一類致癌因子,很多幽門螺桿菌感染者強烈要求根除治療,但是在抗生素治療的情況下,幽門螺桿菌仍普遍存在,非常難根除,且在治療過程中,也會出現過度醫療,菌群失調,抗生素抵抗等等不良反應。早期研究表明,蔓越莓果汁飲料能夠清除小鼠胃內的幽門螺桿菌感染,清除率高達80%,由此達到對胃炎和胃潰瘍的防治作用[15]。進一步研究證實蔓越莓中的多酚類物質可使幽門螺桿菌的細菌形態轉變為球形,從而抑制其生長增殖[22]。所以,用蔓越莓這種天然的抗生素來治療幽門螺桿菌的方法在今后必將越來越受到關注與使用。
3.3 抗氧化
機體在代謝的過程中不斷產生具有強氧化性的自由基。如果體內的自由基不能被及時清除,過多的自由基就會攻擊蛋白質、脂肪和DNA等生物大分子,引發脂質過氧化的連鎖反應,破壞細胞膜的完整性,對機體造成一系列損傷,這與癌癥、肥胖和心血管疾病等慢性病的發生密切相關。
研究表明,由于富含水溶性原花青素、花青素和多酚類物質,蔓越莓的水相提取物顯示了優越的清除自由基和抗氧化能力,效果優于蔓越莓有機相提取物[23]。Vinson等[24]以果葡糖漿為對照,系統研究人體攝入蔓越莓果汁后體內抗氧化水平,結果表明,蔓越莓果汁飲料能顯著提高血漿抗氧化水平,有效避免因攝食果糖引起餐后甘油三酯水平升高而導致的氧化應激損傷。對于代謝綜合癥患者而言,每天飲用2杯低能量的蔓越莓果汁可以顯著降低體內脂質過氧化水平并提高血漿中抗氧化指標的活力[25]。Villarreal等[26]研究也發現蔓越莓有提高血漿中的抗氧化能力,保護紅細胞抗溶血和細胞抗氧化活性的功能。
3.4 預防心血管疾病
脂質過氧化作用是自由基介導的鏈式反應??茖W家研究發現[7],蔓越莓中含有多種抗氧化物質,能對抗生物膜中不飽和脂肪酸的脂質過氧化,保護生物膜的結構和功能,在延緩衰老以及預防心血管疾病等各種退行性病變方面起著重要作用。
Reed J等[27]研究發現蔓越莓中的黃酮類化合物在體內、體外試驗中都有抗氧化功能,尤其是黃酮醇和原花青素對動脈粥樣硬化有預防作用。這類化合物能夠抑制低密度脂蛋白氧化以及血小板聚集和黏附,抑制脂類及脂蛋白代謝中的酶,增加膽固醇的逆向轉運,降低總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇。Chua等[28]研究結果顯示蔓越莓可有效防止低密度脂蛋白的氧化,提高肝臟對膽固醇的吸收。其抑制脂質過氧化能力是VC的10倍,VE的37倍。
Nancy等[29]實驗發現服用蔓越莓汁組志愿者體內脂質過氧化顯著改善,血漿中的抗氧化能力增加,血漿中LDL和丙二醛水平明顯下降。表明蔓越莓對代謝綜合征患者及心血管疾病有益。
3.5 抗腫瘤
蔓越莓中的抗氧化成分能有效清除人體內的自由基和變異細胞,從而對預防癌癥和殺死癌細胞均有很好的療效。
Murphy等[30]研究報道蔓越莓中的三萜酯類化合物具有抑制腫瘤細胞生長的作用,鑒定和分析出這些化合物中含有順式和反式熊果酸。純化了的三萜肉桂酸在幾種腫瘤細胞系(乳腺癌、宮頸癌、前列腺癌)的抑制實驗中均顯示有較高的抗腫瘤活性,而花青素-3-半乳糖苷的細胞毒性要低得多。
Ferguson等[31]從蔓越莓果干中提取出花青素等類黃酮物質,喂食給植入乳腺癌細胞的小白鼠,經過一段喂食之后,小白鼠體內的癌細胞擴散受限并減緩,癌瘤減小。提取物對癌細胞產生了毒害作用,顯著抑制了癌細胞的生長。
Vu等[32]關于蔓越莓對結腸癌作用的研究結果表明,蔓越莓抑制結腸癌的有效成分是花青素和酚酸,并且pH2.5的蔓越橘果汁抗癌效果好于pH7.0的果汁。
3.6 促進口腔健康
研究發現[33],從蔓越莓汁中分離提取的物質能分解口腔中的菌群,阻止變形鏈球菌黏附在牙齒表面,抑制了它的繁殖,有預防齲齒的功效。臨床試驗[34]讓測試者使用含有蔓越莓濃縮物(不可透析的高分子物)的漱口水和普通漱口水,結果顯示使用蔓越莓漱口水的測試者,唾液總細菌數以及突變型鏈球菌數量顯著減少,口腔中的變性鏈球菌降低兩個數量級。
3.7 延緩衰老
根據Cecilia Wang[35]研究表明,攝入蔓越莓能延長果蠅的壽命,尤其對雌性果蠅效果明顯,并且能提高生殖率和運動力。Sujay Guha等[36]在秀麗隱桿線蟲實驗中發現越早開始用蔓越莓提取物干預的秀麗隱桿線蟲,其對環境的抗壓能力與身體的衰老狀態均優于晚干預的秀麗隱桿線蟲。他們還發現[37]蔓越莓的膳食干預能明顯延長秀麗隱桿線蟲的壽命,其研究表明蔓越莓延長秀麗隱桿線蟲壽命是通過daf-16和osr-1調節的通路實現的。
蔓越莓是一種集極佳口感,豐富營養,多種生理功能于一體的理想佐食,目前關于蔓越莓的保健功能的研究主要集中在防治泌尿感染方面,對于其他功能如抗氧化、抗腫瘤以及延緩衰老等功能的研究還非常有限。但是隨著蔓越莓諸多保健功能的證明、有效成分的檢測分離及其栽培技術的開發,相信蔓越莓將會被更多的消費者知曉,蔓越莓產品也必將有廣闊的市場開發前景。
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Introduction of Bioactive Substances and Physiological Functions of Cranberry
WEI Yan1,ZHAN Zi-yi1,ZHANG Yu1,2,*
(1.College of Biological Systems Engineering and Food Science,Zhejiang University,Hangzhou 310058,Zhejiang,China;2.Fuli Institute of Food Science of Zhejiang University,Hangzhou 310058,Zhejiang,China)
Cranberry,one of the"Three traditional fruits"in North America,is very popular in the United States.Cranberry products were gradually being introduced into Chinese market today.There was a growing public interest for the cranberry as a functional food because of its abundant physiological active substances,especially for the A-type cranberry proanthocyanidins,which was good for prevention of urinary tract infection.Also,there were other functions as antioxidant,anti tumor and so on.The most widely used and the best effect measurement technology of the cranberry physiological active substances was HPLC-UV-MS combination.
cranberry;physiological active substances;measurement technology;functions
10.3969/j.issn.1005-6521.2017.10.049
2016-07-13
魏燕(1990—),女(漢),碩士研究生,研究方向:天然產物與人類健康。